Αναπνευστικός Συγκυτιακός "Ιός" (RSV)
Μετάφραση: Απολλόδωρος
18 Ιανουαρίου 2023 | ViroLIEgy | Διαβάστε το εδώ
Λόγω της διαφημιστικής εκστρατείας των μέσων μαζικής ενημέρωσης για την "τριδυμία" (γνωστή προηγουμένως ως "Twindemic"), οι περισσότεροι πιθανώς γνωρίζουν καλά και είναι αρκετά εξοικειωμένοι με την ονομασία "αναπνευστικός συγκυτιακός ιός", γνωστός και ως "RSV". Μας προειδοποίησαν τους τελευταίους μήνες ότι υπήρχε μια ανησυχητική αύξηση των κρουσμάτων αυτού του "ιού", κυρίως μεταξύ των παιδιών, και ότι προσθέτει σε μια κλιμακούμενη επιβάρυνση του συστήματος υγειονομικής περίθαλψής μας μαζί με το "Covid" και τη "γρίπη". Προφανώς, καθώς ο "RSV" λέγεται ότι προσβάλλει κυρίως τα βρέφη, έχει προκαλέσει στους ανήσυχους γονείς μια πανικόβλητη υστερία σχετικά με το πώς θα προστατεύσουν καλύτερα τα παιδιά τους από έναν ακόμη "ιό" που επιπλέει στον όλο και πιο "γεμάτο ιούς" αέρα. Ωστόσο, είναι απαραίτητο να θορυβηθούμε και μόνο με την αναφορά της απειλής του "RSV" ή πρόκειται για ένα ακόμη στη μακρά σειρά των υπερτροφικών αποκυήσεων της φαντασίας από τα μέσα ενημέρωσης; Καθώς έχω καλύψει αρκετά το "SARS-COV-2" και τη "γρίπη", ήρθε η ώρα να βάλουμε στο στόχαστρο τον "RSV" και να δούμε τι είδους επιστημονικά στοιχεία μας επιφυλάσσουν προκειμένου να δικαιολογήσουν αυτή την υποτιθέμενη "απειλή".
Αρχικά, τι ακριβώς είναι ο RSV; Με ποια συμπτώματα έχουμε δυνητικά να κάνουμε εδώ, τα οποία διαφοροποιούν αυτόν τον "ιό" από τους δύο που λέγεται ότι προκαλούν σήμερα χάος σε όλο τον κόσμο με; Ας ρίξουμε μια ματιά σε μια λίστα του CDC με τα κοινά συμπτώματα μεταξύ του "RSV", του "Covid" και της "γρίπης" και ας δούμε τι διαφοροποιεί τους "ιούς" μεταξύ τους:
Φαίνεται ότι τα συμπτώματα ταιριάζουν απόλυτα πέρα από την κανονικότητα της εμφάνισης. Από το άρθρο που συνοδεύει την εικόνα, παίρνουμε κάποιες περισσότερες πληροφορίες σχετικά με το αν αυτοί οι "ιοί" μπορούν να διακριθούν με βάση τα συμπτώματα και μόνο:
Πάσχετε από γρίπη, RSV ή COVID-19; Πώς μπορείτε να καταλάβετε τη διαφορά
Οι τρεις ιοί έχουν πολλά συμπτώματα που είναι παρόμοια.
"Και οι τρεις ιοί έχουν συμπτώματα που είναι παρόμοια, γεγονός που μπορεί να κάνει δύσκολη τη διάκρισή τους. Αλλά γνωρίζοντας ποιον ιό έχει ένα άτομο μπορεί να το βοηθήσει να λάβει την κατάλληλη θεραπεία ή, αν χρειαστεί, να το ενημερώσει αν πρέπει να απομονωθεί".
"Ο COVID-19, η γρίπη και ο RSV μοιάζουν περισσότερο μεταξύ τους παρά διαφέρουν ως προς τα συμπτώματα".
"Ωστόσο, ειδικοί σε θέματα δημόσιας υγείας δήλωσαν στο ABC News ότι η απουσία ενός από τα συμπτώματα δεν σημαίνει ότι ένας ασθενής δεν έχει έναν συγκεκριμένο ιό και ότι ο μόνος τρόπος για να είστε σίγουροι είναι να κάνετε εξετάσεις".
"Στις περισσότερες περιπτώσεις, αν κάποιος έχει γενικά συμπτώματα, όπως πυρετό, βήχα, ρινική καταρροή, δεν πρόκειται να υπάρξει πραγματικός τρόπος να διακρίνουμε ποιο είναι ποιο χωρίς εξέταση", δήλωσε στο ABC News ο Δρ Σκοτ Ρόμπερτς, επίκουρος καθηγητής και αναπληρωτής ιατρικός διευθυντής πρόληψης λοιμώξεων στην Ιατρική Σχολή του Yale".
https://www.google.com/amp/s/abcnews.go.com/amp/Health/suffering-flu-rsv-covid-19-difference/story%3fid=94211146
Σύμφωνα με τη λίστα που παρέχει το CDC, φαίνεται ότι κάθε σύμπτωμα είναι κοινό και στους τρεις "ιούς". Η μόνη διαφορά υποστηρίζεται ότι είναι σε σχέση με την κανονικότητα εμφάνισης ενός συγκεκριμένου συμπτώματος. Ωστόσο, αναφέρεται ότι ακόμη και η απουσία ενός συγκεκριμένου συμπτώματος δεν μπορεί να αποκλείσει ή να αποκλείσει κάποιον από τους "ιούς" και ότι η εξέταση είναι απαραίτητη προκειμένου να ληφθεί οριστική διάγνωση. Έτσι, είναι σαφές ότι δεν υπάρχει τρόπος κλινικής διάγνωσης οποιουδήποτε από αυτούς τους "ιούς" μόνο μέσω των συμπτωμάτων. Ασχολήθηκα με το πρόβλημα της διαφορικής διάγνωσης σε ένα άρθρο στο Substack μου.
Το CDC επιβεβαιώνει ότι τα συμπτώματα που σχετίζονται με τον RSV είναι μη ειδικά και επικαλύπτονται με πολλές "ιογενείς" και βακτηριακές ασθένειες. Καθώς η κλινική διάγνωση με βάση μόνο τα συμπτώματα είναι αδύνατη, οι εξετάσεις που χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση του "RSV" είναι οι συνήθεις ένοχοι με PCR και τεστ αντιγόνου. Οι εξετάσεις καλλιέργειας "ιού" και αντισωμάτων λέγεται ότι χρησιμοποιούνται λιγότερο συχνά, με τις εξετάσεις αντισωμάτων να περιορίζονται στην έρευνα και την επιτήρηση:
Κλινικές Εργαστηριακά Τεστ
"Τα κλινικά συμπτώματα του RSV είναι μη ειδικά και μπορεί να επικαλύπτονται με άλλες ιογενείς λοιμώξεις του αναπνευστικού, καθώς και με ορισμένες βακτηριακές λοιμώξεις. Διάφοροι τύποι εργαστηριακών εξετάσεων είναι διαθέσιμοι για την επιβεβαίωση της λοίμωξης από RSV. Οι εξετάσεις αυτές μπορούν να πραγματοποιηθούν σε δείγματα του ανώτερου και του κατώτερου αναπνευστικού συστήματος.
Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενοι τύποι κλινικών εργαστηριακών εξετάσεων RSV είναι οι εξής
Αντίστροφη αλυσιδωτή αντίδραση μεταγραφάσης-πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (rRT-PCR), η οποία είναι πιο ευαίσθητη από την εξέταση καλλιέργειας και αντιγόνου
εξέταση αντιγόνου, η οποία είναι ιδιαίτερα ευαίσθητη στα παιδιά αλλά όχι ευαίσθητη στους ενήλικες
Οι λιγότερο συχνά χρησιμοποιούμενες εξετάσεις περιλαμβάνουν:
καλλιέργεια ιού
Ορολογικές εξετάσεις, οι οποίες χρησιμοποιούνται συνήθως μόνο για μελέτες έρευνας και επιτήρησης.
Ορισμένα τεστ μπορούν να διακρίνουν μεταξύ των υποτύπων του RSV (Α και Β), αλλά η κλινική σημασία αυτών των υποτύπων δεν είναι σαφής. Συμβουλευτείτε τον εργαστηριακό σας ιατρό για πληροφορίες σχετικά με τον τύπο του αναπνευστικού δείγματος που είναι καταλληλότερο να χρησιμοποιηθεί".
https://www.cdc.gov/rsv/clinical/index.html
Ωστόσο, υπάρχει ένα σημαντικό πρόβλημα με τη στήριξη σε αυτές τις εξετάσεις για τη διάγνωση περιπτώσεων μιας συγκεκριμένης νόσου. Καθώς ο "RSV" δεν μπορεί να διαγνωστεί με ακρίβεια κλινικά λόγω των μη ειδικών και επικαλυπτόμενων συμπτωμάτων, δεν υπάρχει τρόπος να εντοπιστούν τα κρούσματα προκειμένου να προσδιοριστεί ο επιπολασμός της νόσου σε έναν συγκεκριμένο πληθυσμό. Προκειμένου τα αποτελέσματα της δοκιμής PCR να θεωρηθούν ακριβή, πρέπει πρώτα να είναι γνωστός ο επιπολασμός της νόσου. Όπως ορίζεται από το CDC, ο επιπολασμός είναι "το ποσοστό των ατόμων σε έναν πληθυσμό που έχουν μια συγκεκριμένη ασθένεια ή ιδιότητα σε μια συγκεκριμένη χρονική στιγμή ή κατά τη διάρκεια μιας συγκεκριμένης χρονικής περιόδου". Έτσι υπολογίζει το CDC τον επιπολασμό των ασθενειών:
Ο επιπολασμός της νόσου "RSV" μπορεί να προσδιοριστεί μόνο μέσω των περιπτώσεων που προσδιορίζονται με κλινική διάγνωση, η οποία, όπως παραδέχεται το CDC, είναι αδύνατη λόγω των μη ειδικών και επικαλυπτόμενων συμπτωμάτων. Δεν υπάρχει κανένας τρόπος να διακρίνει κανείς τον "RSV" από το "Covid" ούτε από τη "γρίπη". Καθώς τα αποτελέσματα του τεστ PCR δεν μπορούν να ερμηνευθούν με ακρίβεια χωρίς να διαπιστωθεί πρώτα ο επιπολασμός της νόσου, το τεστ PCR είναι άχρηστο ως διαγνωστικό εργαλείο. Έτσι, τα υγειονομικά ιδρύματα δημιουργούν κρούσματα "RSV", "Covid" και "γρίπης" μέσω της δοκιμής PCR, προκειμένου να διεκδικήσουν τη νομιμότητα των αποτελεσμάτων της PCR που χρησιμοποιήθηκαν για τη δημιουργία των κρουσμάτων. Αυτό είναι προφανώς δόλιο και παράλογο κυκλικό σκεπτικό, καθώς η ίδια η εξέταση δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη δημιουργία των κρουσμάτων που απαιτούνται προκειμένου να προσδιοριστεί ένα ποσοστό επιπολασμού της νόσου που χρησιμοποιείται για τη νομιμοποίηση των αποτελεσμάτων της εξέτασης.
Είναι ξεκάθαρο για όποιον εξετάζει αυτή την κατάσταση τόσο κριτικά όσο και λογικά ότι τα ίδια συμπτώματα της νόσου έχουν λάβει πολυάριθμα ονόματα που σχετίζονται με διάφορους "ιούς" κατά τη διάρκεια των δεκαετιών.
Η άνοδος και η εξάρτηση από τις μοριακές εξετάσεις για τη διάκριση μεταξύ αυτών των "ιών" είναι ένα πρόσφατο φαινόμενο που μπορεί να είναι έγκυρο μόνον εάν οι "ιοί" για τους οποίους γίνεται η εξέταση έχουν καθαριστεί και απομονωθεί απευθείας από τα υγρά ενός άρρωστου ξενιστή και έχουν αποδειχθεί αρχικά παθογόνοι με φυσικό τρόπο. Ωστόσο, αυτό δεν έχει γίνει ούτε μία φορά για κανέναν από αυτούς τους "ιούς" και θα φανεί ότι δεν είναι διαφορετικά για τον "RSV". Ας ρίξουμε μια γρήγορη ματιά στην ιστορία που παρέχεται για την ανακάλυψη αυτού του "ιού" πριν καταδυθούμε σε βάθος στις μελέες που παρέχονται ως αποδεικτικά στοιχεία:
Ιστορία
"Ο RSV ανακαλύφθηκε το 1956, αλλά αρχικά δεν συνδέθηκε με αναπνευστικές ασθένειες μεταξύ βρεφών. Πράγματι, όταν παρατηρήθηκε ότι μια ομάδα 14 χιμπατζήδων έπασχε από κρυολόγημα και κορίαση, ο Morris και οι συνεργάτες του απομόνωσαν έναν νέο ιό που αρχικά ονομάστηκε παράγοντας κορίασης των χιμπατζήδων (CCA). Στη συνέχεια, ο Chanock και οι συνεργάτες του επιβεβαίωσαν ότι ο παράγοντας προκαλούσε αναπνευστική νόσο στον άνθρωπο, όταν έλαβαν απομονώσεις από δύο παιδιά, το ένα με λαρυγγοτραχειοβρογχίτιδα και το άλλο με βρογχοπνευμονία, οι οποίες δεν διέφεραν από τον CCA. Όταν διαπιστώθηκε ότι υπήρχαν ειδικά εξουδετερωτικά αντισώματα έναντι του CCA στα περισσότερα παιδιά σχολικής ηλικίας, ο "παράγοντας της κορυζίας του χιμπατζή" μετονομάστηκε καταλληλότερα σε αναπνευστικό συγκυτιακό ιό για να δηλώσει τις κλινικές και εργαστηριακές εκδηλώσεις του".
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7173590/
Όπως φαίνεται από το παραπάνω απόσπασμα, ο "RSV" ανακαλύφθηκε αρχικά το 1956 από τους Morris et al. σε χιμπατζήδες και όχι σε παιδιά. Μόλις ένα χρόνο αργότερα οι Chanock et al. "επιβεβαίωσαν" ότι ο παράγοντας της κορυζας των χιμπαντζήδων (CCA) ήταν ικανός να "μολύνει" τον άνθρωπο, βασιζόμενοι σε "απομονώσεις" που ελήφθησαν από δύο παιδιά.
Ωστόσο, είναι αληθινή αυτή η ιστορία;
Απομόνωσε όντως κάποια από τις δύο ομάδες έναν νέο "ιό" που βρέθηκε τόσο σε χιμπατζήδες όσο και σε ανθρώπους και ήταν ικανός να προκαλέσει αναπνευστική νόσο;
Ήταν πράγματι ένας "ιός" κατάλληλα καθαρισμένος και απομονωμένος απευθείας από τα υγρά ενός άρρωστου ξενιστή και στη συνέχεια αποδεδειγμένα παθογόνος με φυσικό τρόπο;
Πραγματοποιήθηκαν κατάλληλοι έλεγχοι για οποιοδήποτε από τα πειράματα που πραγματοποιήθηκαν και τι, αν κάτι, έδειξαν;
Ας εξετάσουμε αυτά τα ερωτήματα και άλλα πολλά εξετάζοντας τις τεις μελέτες που παραδόθηκαν ως αποδεικτικά στοιχεία για την ανακάλυψη του "RSV". Παρουσιάζω ολόκληρη την εργασία των Morris et al. του 1956 καθώς και την πρώτη εργασία του 1957 από τους Chanock et al. Έχω επεξεργαστεί κάποια από τα πειράματα με αντισώματα από μια επόμενη μελέτη των Chanock et al., επίσης από το 1957, για λόγους έκτασης και επειδή οι πληροφορίες ήταν περιττές. Και οι τρεις εργασίες είναι διαθέσιμες για λήψη ή για αναζήτηση μέσω του αριθμού DOI. Για να αναλύσω τα στοιχεία για τον "RSV", δοκιμάζω μια διαφορετική μορφή όπου παρέχω σχόλια καθ' όλη τη διάρκεια της μελέτης αντί να συνοψίζω εκ των προτέρων τα σημαντικά σημεία. Ενημερώστε με στα σχόλια αν προτιμάτε τον ένα τρόπο από τον άλλο.
Ανάκτηση του κυτταροπαθογόνου παράγοντα από χιμπατζήδες με Coryza.
Από την πρώτη στιγμή, μπορούμε να δούμε ότι οι Morris et al. δεν φαίνονταν ιδιαίτερα σίγουροι για την ανακάλυψή τους, καθώς περιέγραφαν τον "ιό" ως "φαινομενικής" (δηλ. φαινομενικά πραγματικής ή αληθινής, αλλά όχι απαραίτητα) αιτιολογικής σημασίας. Ισχυρίστηκαν ότι είχαν διαπιστώσει μια συσχέτιση μεταξύ του παράγοντα και της αναπνευστικής νόσου σε έναν εργαζόμενο εργαστηρίου, αλλά στη συνέχεια παραδέχθηκαν ότι τα ορολογικά στοιχεία έδειχναν ότι θα μπορούσε να είναι είτε ο παράγοντας που "ανακάλυψαν" είτε κάποιος άλλος που ήταν στενά συνδεδεμένος.
Τον Οκτώβριο του 1955: μια αναπνευστική ασθένεια που χαρακτηριζόταν από βήχα, φτέρνισμα και βλεννοπυώδη ρινική έκκριση εμφανίστηκε σε μια αποικία 20 "φυσιολογικών" χιμπατζήδων στο Ινστιτούτο Έρευνας του Στρατού Walter Reed. Η παρούσα εργασία περιγράφει την αποµόνωση ενός ιού µε προφανή αιτιολογική σηµασία στην επιζωοτία, διαπιστώνει αιτιολογική συσχέτιση µεταξύ του παράγοντα της κορυζας των χιµπατζήδων και της αναπνευστικής νόσου σε έναν εργαστηριακό εργαζόµενο και, τέλος, παρουσιάζει ορολογικά δεδοµένα που υποδηλώνουν ότι ορισµένοι άνθρωποι έχουν προσβληθεί από τον ιό της κορυζας των χιµπατζήδων ή από έναν παράγοντα που σχετίζεται στενά µε αυτόν.
Τα υλικά που χρησιμοποιήθηκαν για την "απομόνωση" του "ιού" ήταν δείγματα επιχρίσματος λαιμού από 14 από 20 νεαρούς πιθήκους που λέγεται ότι ήταν κλινικά άρρωστοι από κορυζά, μια καταρροϊκή φλεγμονή του βλεννογόνου της μύτης. Μια ομάδα παλαιότερων πιθήκων, με τους οποίους είχαν προηγουμένως πειραματιστεί για τον "ιό" της ανθρώπινης ηπατίτιδας, χρησιμοποιήθηκαν σε πειράματα μεταδοτικότητας. Αυτό ακυρώνει τους πιθήκους ως κατάλληλο μέσο ελέγχου. Ο "ιός" αναπτύχθηκε σε καλλιέργειες ιστών που αποτελούνταν από επιθηλιοειδή κύτταρα προερχόμενα από ανθρώπινο ήπαρ τα οποία επωάζονταν σε κυλινδρικούς σωλήνες με θρεπτικό μέσο αποτελούμενο από βασικό μέσο Eagle, αδρανοποιημένο ορό αλόγου και L-γλουταμίνη. Προστέθηκαν πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη για τον έλεγχο τυχαίων βακτηριακών προσμίξεων.
Υλικά και μέθοδοι. Χιμπατζήδες και συλλογή δειγμάτων. Οι χιμπατζήδες της επιζωοτίας ήταν ηλικίας 15 έως 20 μηνών και προήλθαν από εμπορικό εκτροφέα στη Dania. Fla., 3 έως 24 εβδομάδες πριν από την ασθένειά τους. Φιλοξενήθηκαν στο παράρτημα Forest Glen του ερευνητικού ινστιτούτου του στρατού Walter Reed (WRAIR). Δείγματα αίματος για ορολογική μελέτη ελήφθησαν από μεμονωμένους χιμπατζήδες κατά την έναρξη της επιζωοτίας στις 13 Οκτωβρίου. 1955, όταν 5 από τα 20 ζώα έπασχαν από κλινική κορίαση, και στη συνέχεια περιοδικά μέχρι τις 18 Απρ. 1956. Επιχρίσματα λαιμού λήφθηκαν από όλα τα ζώα της αποικίας στις 17 Οκτωβρίου. 1955, όταν 14 από τα 20 ζώα έπασχαν κλινικά από κορίαση- τα επιχρίσματα αποτέλεσαν το υλικό που χρησιμοποιήθηκε για τις μελέτες απομόνωσης των ιών. Μια άλλη οµάδα λίγο µεγαλύτερων χιµπατζήδων χρησιµοποιήθηκε για τη µελέτη της πειραµατικής µεταδοτικότητας της κορυζας. Τα 6 ζώα αυτής της ομάδας είχαν προηγουμένως εμβολιαστεί με υλικό που εικάζεται ότι περιείχε τον ιό της ανθρώπινης λοιμώδους ηπατίτιδας: στεγάζονταν σε διαφορετική τοποθεσία από τα άλλα και δεν είχαν άμεση επαφή με άλλους χιμπατζήδες για πάνω από ένα χρόνο.
Καλλιέργειες ιστών. Οι καλλιέργειες επιθηλιακών κυττάρων που προέρχονται από ανθρώπινο ήπαρ (στέλεχος Chang) παρασκευάστηκαν με τη μέθοδο του Chang(1). Οι καλλιέργειες αναπτύχθηκαν σε κυλινδρικούς σωλήνες (1,5 x 13 cm) και σταθερές φιάλες (4 x 4 x 14 cm) σε θρεπτικό μέσο που αποτελούνταν από 8 μέρη βασικού μέσου Eagle (2), 2 μέρη αδρανοποιημένου ορού αλόγου και 0,2 μέρη L-γλουταμίνης. Προστέθηκαν πενικιλλίνη (100 uniits/ml) και στρεπτομυκίνη (20 ug/ml) για τον έλεγχο τυχαίων βακτηριακών προσμίξεων. Τα σωληνάρια και οι φιάλες περιείχαν 1 ml και 15 ml θρεπτικού υγρού, αντίστοιχα. Τα κύτταρα τρέφονταν την 3η ή 4η ημέρα αντικαθιστώντας το παλιό θρεπτικό υγρό με ίση ποσότητα φρέσκου θρεπτικού υγρού. Οι καλλιέργειες επωάζονταν στους 36°C και κατά τη στιγμή της χρήσης ήταν συνήθως 4-6 ημερών.
Ο "ιός" λέγεται ότι "απομονώθηκε" από τα δείγματα επιχρίσματος λαιμού σε 1 από τους 14 πιθήκους. Το δείγμα ξεπλύθηκε αμέσως σε θρεπτικό υγρό που περιείχε αντιβιοτικά και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε για λίγο για να απομακρυνθούν τα μεγαλύτερα σωματίδια. Σε κανένα σημείο δεν ελέγχθηκε ποτέ το δείγμα με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο για ενδείξεις των υποτιθέμενων "ιικών" σωματιδίων εντός του δείγματος πριν προστεθεί είτε στο θρεπτικό υγρό είτε στην καλλιέργεια ιστού. Στην πραγματικότητα, υπάρχουν μηδενικές εικόνες ΗΜ του υποτιθέμενου "ιού" σε καμία από τις τρεις εργασίες που παρουσιάστηκαν, ακόμη και μετά την εκτέλεση των πειραμάτων κυτταροκαλλιέργειας. Μετά από 4 ημέρες επώασης, τα υγρά αντικαταστάθηκαν με φρέσκα θρεπτικά/αντιβιοτικά, τα οποία είχαν ως αποτέλεσμα το θάνατο των κυττάρων και τα σημάδια της κυτταροπαθογόνου επίδρασης 4 ημέρες αργότερα. Κανένα από τα δείγματα από τους υπόλοιπους 13 πιθήκους δεν είχε ως αποτέλεσμα τα ίδια κυτταροπαθογόνα αποτελέσματα.
Απομόνωση του παράγοντα της coryza. Ένα φρέσκο (εντός της ώρας συλλογής) επίχρισμα λαιμού από έναν χιμπατζή (Sue) που συμμετείχε στην επιζωοτία πλύθηκε σε 2 ml θρεπτικού υγρού καλλιέργειας ιστών που περιείχε αντιβιοτικά. Μετά από φυγοκέντρηση στις 3000 στροφές ανά λεπτό για 15 λεπτά για την απομάκρυνση των μεγάλων σωματιδίων, 0,2 ml του υπερκείμενου εμβολιάστηκαν σε κυλινδρικό σωλήνα καλλιέργειας ηπατικών κυττάρων Chang ηλικίας 4 ημερών. Μετά από επώαση 4 ημερών το αρχικό θρεπτικό υλικό των κυττάρων αντικαταστάθηκε με φρέσκο θρεπτικό υλικό. Τέσσερις ημέρες αργότερα παρατηρήθηκε κυτταρικός εκφυλισμός που χαρακτηριζόταν από στρογγυλοποίηση, κοκκίωση και αποκόλληση από το τοίχωμα του σωλήνα. Η σειριακή μετάδοση του κυτταροπαθογόνου παράγοντα σε άλλες καλλιέργειες σωλήνων ή φιαλών με ηπατικά κύτταρα Chang έγινε εύκολα με τη διέλευση εναιωρημάτων εκφυλισμένων κυττάρων στα μολυσμένα υγρά τους. Παρόμοιες προσπάθειες απομόνωσης που έγιναν με υλικά που ελήφθησαν στις 17 Οκτωβρίου από 13 άλλους άρρωστους χιμπατζήδες έδωσαν αρνητικά αποτελέσματα.
Αποσιωπώ τα αποτελέσματα των αντισωμάτων, τα οποία δεν είναι παρά μη ειδικές χημικές αντιδράσεις που οφείλονται, σε αυτή την περίπτωση, στο μείγμα ανθρώπινου και ιπποειδούς αίματος. Για να έχουν νόημα τα αποτελέσματα αντισωμάτων, τα αντισώματα και τα ίδια τα αντιγόνα πρέπει να καθαριστούν και να απομονωθούν κατάλληλα μαζί με τα υποτιθέμενα "ιικά" σωματίδια. Καθώς αυτό δεν έχει συμβεί ούτε μία φορά σε καμία από τις δύο περιπτώσεις, είναι αδύνατο να χρησιμοποιηθούν αποτελέσματα που λαμβάνονται από μία αόρατη υποθετική οντότητα για να υποστηριχθεί έμμεσα η παρουσία μίας άλλης αόρατης υποθετικής οντότητας.
Ορολογικές διαδικασίες. Ιός. Ο ιός του σπόρου ελήφθη με εμβολιασμό φιαλών ηπατικών κυττάρων με τον παράγοντα της κορυζας του χιμπατζή (CCA) και συλλογή κυττάρων και υγρών 8 davs αργότερα, όταν τα μολυσμένα κύτταρα παρουσίαζαν χαρακτηριστικά πλήρη εκφυλισμό. Μετά την άλεση σε μύλο TenBroeck το μείγμα διασαφηνίστηκε με φυγοκέντρηση στις 3000 στροφές ανά λεπτό για 15 λεπτά. Το υπερκείμενο υγρό που προέκυψε αποτέλεσε τον σπόρο του σιτηρεσίου. Η μολυσματικότητα διατηρήθηκε με την αποθήκευση σε σφραγισμένες γυάλινες αμπούλες στους -70°.
Δοκιμές εξουδετέρωσης. Διαδοχικές 2πλάσιες αραιώσεις ορού που είχε αδρανοποιηθεί στους 56° για 30 λεπτά (0,15 ml) αναμίχθηκαν με σταθερή ποσότητα ιού (100 έως 1000 LD50 ιστοκαλλιέργειας) που περιέχονταν σε 0,15 ml μολυσμένου υλικού ιστοκαλλιέργειας. Τα µείγµατα επωάστηκαν σε υδατόλουτρο στους 37° C για 1 ώρα και στη συνέχεια 0,1 ml κάθε µείγµατος προστέθηκαν σε καθένα από τα 2 σωληνάρια που περιείχαν φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα. Οι καλλιέργειες εξετάστηκαν μικροσκοπικά για κυτταρικό εκφυλισμό μετά από περίοδο επώασης 6 έως 8 ημερών. Ο τίτλος εξουδετέρωσης θεωρήθηκε η υψηλότερη αραίωση ορού που ανέστειλε πλήρως τον κυτταρικό εκφυλισμό. Σε κάθε δοκιμή περιλαμβάνονταν κατάλληλοι έλεγχοι κυττάρων και ορών και μια τιτλοδότηση του ιού.
Δοκιμές πρόσδεσης συμπληρώματος. Ικανοποιητικό αντιγόνο πρόσδεσης συμπληρώματος παρασκευάστηκε από μολυσμένα ηπατικά κύτταρα που αναπτύχθηκαν σε μέσο που περιείχε 20% αδρανοποιημένο ορό αλόγου. Όταν το συστατικό του ορού αλόγου του μέσου δεν θερμάνθηκε στους 56° για 1/2 ώρα, το υλικό ήταν αντισυμπληρωματικό εάν χρησιμοποιήθηκε στη διαδικασία δέσμευσης του συμπληρώματος (CF) με ολονύκτια δέσμευση στο κρύο, σύμφωνα με την πρότυπη τεχνική του Τμήματος Ιογενών Νοσημάτων, WRAIR (3), η οποία χρησιμοποιήθηκε στις τρέχουσες μελέτες. Για τη χρήση στις δοκιµές CF οι οροί ανθρώπων και χιµπατζήδων αδρανοποιήθηκαν για 30 λεπτά στους 56°C και 60″C, αντίστοιχα. Ο τίτλος του ορού εκφράστηκε ως το αντίστροφο της υψηλότερης αραίωσης που δίνει 75% ή μεγαλύτερη δέσμευση του συμπληρώματος μετά από ολονύκτια επώαση στους 4°C παρουσία 2 μονάδων αντιγόνου και 2 πλήρων μονάδων συμπληρώματος. Οι έλεγχοι που περιλαµβάνονταν σε κάθε δοκιµή ήταν αντιγόνο (παρασκευασµένο από µη µολυσµένα ηπατικά κύτταρα που πολλαπλασιάστηκαν σε αδρανοποιηµένο ορό αλόγου), θετικός ορός (που ελήφθη από έναν άνδρα που παρουσίασε εργαστηριακή λοίµωξη, τον ασθενή Β1 στο Σχήµα 1 του κειµένου, και φυσιολογικός ορός.
Οι επόμενες δύο ενότητες είναι μάλλον αποκαλυπτικές. Στην εμβολιασμένη καλλιέργεια που ελήφθη από το δείγμα ενός πιθήκου, η κυτταροπαθογόνος δράση παρατηρήθηκε μετά από 8 ημέρες και παρατηρήθηκαν εγκλείσματα που έμοιαζαν με σωμάτια στις καλλιέργειες ηπατικών κυττάρων. Τα σωματίδια που μοιάζουν με εγκλείσματα ορίζονται ως "συσσωματώματα σωματιδίων του ιού ή πρωτεϊνών που προκαλούνται από τον ιό ή ειδικές δομές χαρακτηριστικές της μόλυνσης από ιούς είτε στο κυτταρόπλασμα είτε στον πυρήνα". Έτσι, τα αποτελέσματα αυτά υποτίθεται ότι είναι ειδικά για τους "ιούς". Ωστόσο, τα ίδια ακριβώς σωματίδια που μοιάζουν με εγκλείσματα παρατηρήθηκαν στις μη εμβολιασμένες καλλιέργειες ελέγχου, γεγονός που δείχνει ότι η παρουσία ενός φανταστικού "ιού" ήταν περιττή για την εμφάνιση αυτής της μη ειδικής επίδρασης. Δυστυχώς, αυτή η καταδικαστική πληροφορία δεν πτόησε τους Morris et al. καθώς συνέχισαν να πιστεύουν ότι είχαν έναν νέο "ιό".
Ωστόσο, αν αυτές οι πληροφορίες δεν ήταν αρκετά επιζήμιες για τα συμπεράσματά τους, οι προσπάθειες απόδειξης της παθογένειας θα έπρεπε να είχαν βυθίσει εντελώς το θωρηκτό τους. Οι ερευνητές επιχείρησαν ενδοεγκεφαλικούς και ενδοπεριτοναϊκούς εμβολιασμούς σε ποντίκια μιας ημέρας, απογαλακτισμένα χάμστερ και νεαρά ενήλικα κουνέλια και ινδικά χοιρίδια. Εμβολίασαν ενδορινικά ποντίκια 8 έως 10 γραμμαρίων, νεαρούς ενήλικους αρουραίους και χιμπατζήδες 16 έως 20 λιβρών. Ομάδες εμβρύων νεοσσών (7 έως 11 ημερών) εμβολιάστηκαν στη χοριο-αλλαντοϊκή μεμβράνη και στους αμνιακούς, αλλαντοϊκούς και κρόκους σάκους. Κανένα από τα εμβολιασμένα ζώα ή τα εμβρυοποιημένα αυγά, εκτός από τους χιμπατζήδες, δεν εμφάνισε σημάδια νόσου κατά τη διάρκεια της παρατήρησης. Η μόνη εξαίρεση ήταν ένα ινδικό χοιρίδιο που ανέπτυξε επίμονο πυρετό από την 3η ημέρα, ο οποίος όμως τελικά κηρύχθηκε βακτηριακής φύσης. Εκτός από την έλλειψη παθογένειας, η κυτταροπαθογόνος δράση που παρατηρήθηκε διέφερε ανάλογα με την κυτταρική σειρά που χρησιμοποιήθηκε κατά την καλλιέργεια. Όταν χρησιμοποιήθηκαν κύτταρα νεφρού πιθήκου, η CPE που ελήφθη ήταν δύσκολο να ερμηνευθεί λόγω της παρουσίας στις καλλιέργειες τυχαίων πιθηκοειδών "ιών". Πρόκειται για τους ίδιους αόρατους αφρώδεις παράγοντες που λέγεται ότι παράγουν CPE σε μη εμβολιασμένες καλλιέργειες, όπως παρατηρήθηκε από τους Enders, Rustigian, Cohen, Von Magnus και Hull. Έτσι, πρόκειται για μια ακόμη μελέτη που παρέχει αποδείξεις ότι οι κυτταροκαλλιέργειες και το κυτταροπαθογόνο αποτέλεσμα είναι μια άκυρη και αναξιόπιστη μέθοδος για τον προσδιορισμό της παρουσίας οποιουδήποτε "ιού".
Αποτελέσματα. Συμπεριφορά του παράγοντα της coryza του χιμπατζή (CCA) σε καλλιέργεια ηπατικών κυττάρων. Ο εμβολιασμός του CCA που ελήφθη από την καλλιέργεια του επιχρίσματος του λαιμού του χιμπατζή Sue σε καλλιέργειες ηπατικών κυττάρων παρήγαγε ελάχιστη ή καμία αλλαγή κατά τη διάρκεια των πρώτων 5 ή 6 ημερών. Περίπου την 7η ημέρα εμφανίστηκαν διάσπαρτες νησίδες στρογγυλών και κοκκωδών κυττάρων και μερικά κύτταρα διαλύθηκαν και αποκολλήθηκαν από το γυάλινο τοίχωμα του δοχείου. Μόλις ξεκίνησε, η διαδικασία εκφυλισμού εξαπλώθηκε γρήγορα και μέσα σε 24 ώρες σχεδόν όλα τα κύτταρα ήταν νεκρά και μερικά επέπλεαν στο θρεπτικό υγρό. Ενδοπυρηνικά και ενδοκυτταροπλασματικά εγκλείσματα, τα οποία είναι ηωσινόφιλα σε παρασκευάσματα κυττάρων που έχουν χρωματιστεί με Giemsa, παρατηρήθηκαν σε εκκαθαρίσεις ηπατικών κυττάρων μολυσμένων με CCA. Ωστόσο, παρόμοια σώματα που έμοιαζαν με εγκλείσματα καταδείχθηκαν σε μη εμβολιασμένα κύτταρα, τα οποία αναπτύχθηκαν σε αδρανοποιημένο ορό αλόγου. Προς το παρόν, η σημασία των δομών που μοιάζουν με εγκλείσματα και βρέθηκαν σε μολυσμένα και μη μολυσμένα κύτταρα δεν μπορεί να δηλωθεί με βεβαιότητα.
Παθογένεια του CCA για τους εργαστηριακούς ξενιστές. Υλικά ιστοκαλλιέργειας που περιείχαν 100 έως 10.000 TC LD50 CCA εμβολιάστηκαν με την ενδοεγκεφαλική και ενδοπεριτοναϊκή οδό σε ποντίκια ηλικίας μίας ημέρας, απογαλακτισμένα χάμστερ και νεαρά ενήλικα κουνέλια και ινδικά χοιρίδια. Άλλα ποντίκια βάρους 8 έως 10 γραμμαρίων, νεαροί ενήλικοι αρουραίοι και χιμπατζήδες βάρους 16 έως 20 λιβρών εμβολιάστηκαν ενδορινικά. Ομάδες εμβρύων νεοσσών (7 έως 11 ημερών) εμβολιάστηκαν στη χοριο-αλλαντοϊκή μεμβράνη και στον αμνιακό, αλλαντοϊκό και κρόκο σάκο. Με εξαίρεση ένα μόνο ινδικό χοιρίδιο που ανέπτυξε επίμονο πυρετό από την 3η ημέρα, κανένα από τα εμβολιασμένα ζώα ή τα εμβρυακά αυγά, εκτός από τους χιμπατζήδες, δεν εμφάνισε σημεία νόσου κατά τη διάρκεια περιόδων παρατήρησης που κυμαίνονταν έως και 28 ημέρες. Η αιτιολογία του πυρετού στο ινδικό χοιρίδιο εντοπίστηκε τελικά σε βακτηριακή λοίμωξη. Επιπλέον, τα υγρά που ελήφθησαν από έμβρυα κοτόπουλου εμβολιασμένα με διάφορες οδούς απέτυχαν να συγκολλήσουν τα ερυθροκύτταρα κοτόπουλου και ανθρώπου "0". Οι καλλιέργειες σωλήνων ανθρώπινων κυττάρων που προέρχονται από τον επιπεφυκότα (Chang) , το έντερο (Henle) και ινοβλάστες ανθρώπινου εμβρύου (που αποκτήθηκαν από την Microbiological Associates) βρέθηκαν λιγότερο ευαίσθητες στην κυτταροπαθογόνο δράση του CCA από ό,τι τα ηπατικά κύτταρα- τα κύτταρα αυτά παρουσίασαν μόνο ατελή εκφύλιση μετά από επώαση 16 ημερών. Τα κύτταρα νεφρών πιθήκων υπέστησαν πλήρη εκφυλισμό 8 ημέρες μετά τη μόλυνση με CCA, αλλά η κυτταροπαθογόνος επίδραση που επιτεύχθηκε ήταν μερικές φορές δύσκολο να ερμηνευθεί λόγω της περιστασιακής παρουσίας στις καλλιέργειες τυχαίων ιών πιθήκων (4).
Για άλλη μια φορά, αναξιόπιστα αποτελέσματα αντισωμάτων χρησιμοποιήθηκαν για να υποστηριχθεί μια σχέση μεταξύ ζώων που λέγεται ότι είχαν προσβληθεί από τον ίδιο φανταστικό "ιό". Ακόμη και όταν υγιή ζώα εμφάνιζαν αύξηση των αντισωμάτων, θεωρήθηκε ότι είχαν τον "ιό", παρόλο που δεν υπήρχαν καθόλου στοιχεία ότι τα ζώα ήταν ποτέ άρρωστα. Στα υγιή ζώα, τα οποία δεν παρουσίαζαν ούτε ασθένεια ούτε αύξηση αντισωμάτων, θεωρήθηκε ότι δεν είχαν έρθει σε επαφή με τον "ιό". Υπάρχει πάντα μια ρήτρα διαφυγής για τα δυσμενή ευρήματα.
Σχέση του CCA με την επιζωοτική coryza σε χιμπατζήδες στο Forest Glen. Η CCA διαπιστώθηκε ότι σχετίζεται με την επιζωοτική νόσο των χιμπατζήδων στο παράρτημα Forest Glen του WRAIR με τη χρήση ορολογικών τεχνικών. Τα ενδεικτικά αποτελέσματα των δοκιμών CF και εξουδετέρωσης που διενεργήθηκαν σε ορούς από 2 χιμπατζήδες της επιζωοτίας του Forest Glen παρουσιάζονται στον Πίνακα Ι. Φαίνεται ότι και στα δύο ζώα τα αντισώματα CF έναντι του CCA δεν ήταν ανιχνεύσιμα στους πρώιμους ορούς, αλλά ήταν 1:40 ή 1:80 στους ορούς που ελήφθησαν περίπου 2 μήνες αργότερα. Κατά την ίδια περίοδο δεν υπήρξε σημαντική μεταβολή στον τίτλο των αντισωμάτων CF έναντι του ιού RI-APC-ARD ή στα αντισώματα HA1 για οποιοδήποτε από τα 5 στελέχη του ιού της γρίπης. Τέλος, εξουδετερωτικό αντίσωμα κατά του CCA αναπτύχθηκε και στους δύο χιμπατζήδες κατά τη διάρκεια της περιόδου μεταξύ των αιμορραγιών. Η αιτιολογική σχέση μεταξύ του CCA και της επιζωοτικής νόσου στους χιμπατζήδες υποστηρίζεται περαιτέρω από τα δεδομένα που προέκυψαν όταν οι οροί και των 20 ζώων που συμμετείχαν στην επιζωοτία του Forest Glen εξετάστηκαν για ειδικά αντισώματα δέσμευσης του συμπληρώματος. Όπως φαίνεται στον Πίνακα ΙΙ και οι 14 χιμπατζήδες που εμφάνισαν κλινική κόρυζα κατά τη διάρκεια της 3ης εβδομάδας του Οκτωβρίου 1955, ανέπτυξαν στη συνέχεια ειδικό αντίσωμα. Τέσσερα άλλα ζώα που δεν υπέστησαν κλινική κόρυζα παρήγαγαν επίσης αντίσωμα, επομένως, πιθανώς υπέστησαν μη αναγνωρισμένη λοίμωξη. Τα υπόλοιπα 2 ζώα προφανώς διέφυγαν της μόλυνσης- ούτε υπέστησαν κλινική νόσο ούτε ανέπτυξαν αντίσωμα CCA CF.
Οι Morris et al. προσπάθησαν να αναδημιουργήσουν πειραματικά τη φλεγμονή του βλεννογόνου, λαμβάνοντας τοξικό μη καθαρισμένο υπερκείμενο κυτταροκαλλιέργειας που λέγεται ότι περιέχει τον "ιό" και εγχέοντάς το απευθείας στη μύτη τριών πιθήκων. Δύο από τους τρεις πιθήκους εμφάνισαν φτέρνισμα, βήχα και ρινικές εκκρίσεις μετά τις ενέσεις με τη γόβα από τη μύτη, ενώ ο τρίτος πίθηκος παρέμεινε ατάραχος. Σε ένα άλλο καταστροφικό πλήγμα για τη θεωρία τους περί "ιού", δύο από τα τρία ζώα ελέγχου εμφάνισαν επίσης ασθένεια μετά την έγχυση στη μύτη τους μη εμβολιασμένης γλίτσας από τοξική κυτταροκαλλιέργεια. Έτσι, δεν ήταν απαραίτητος κανένας "ιός" για την αναδημιουργία της νόσου και θα μπορούσε εύκολα να υποτεθεί ότι η έγχυση τοξικής σούπας με ή χωρίς φανταστικό "ιό" είχε ως αποτέλεσμα ρινικό έκκριμα.
Πειραματικά προκληθείσα coryza σε χιμπατζήδες. Τρεις χιμπαντζήδες, ηλικίας 20 έως 24 μηνών και βάρους 16 έως 20 λιβρών εμβολιάστηκαν ενδορινικά στις 2 Φεβρουαρίου 1956 με 1,0 ml υλικού ιστοκαλλιέργειας 11ου περάσματος που περιείχε 10.000 TC ID50 CCA. Ταυτόχρονα, 3 άλλοι χιμπατζήδες που στεγάζονταν στο ίδιο δωμάτιο εγχύθηκαν ενδορρινικά με μη μολυσμένο παρασκεύασμα ηπατικών κυττάρων Chang. Τα αποτελέσματα αυτού του πειράματος παρουσιάζονται γραφικά στην Εικ. 1. Τρεις ημέρες (5 Φεβρουαρίου) μετά τον εμβολιασμό 2 από τους 3 χιμπατζήδες που έλαβαν CCA εμφάνισαν αναπνευστικές ασθένειες που χαρακτηρίζονταν από φτέρνισμα, βήχα και στη συνέχεια βλεννοπυώδεις ρινικές εκκρίσεις. Τα συμπτώματα αυτά αυξήθηκαν κάπως σε σοβαρότητα και παρέμειναν σε αυτό το επίπεδο για 4 έως 5 ημέρες- ωστόσο, τα ζώα δεν είχαν πυρετό. Μέχρι τη 14η ημέρα οι προσβεβλημένοι χιμπατζήδες ήταν απαλλαγμένοι από τα σημάδια της αναπνευστικής νόσου. Ο τρίτος χιμπατζής αυτής της ομάδας (Babe στην Εικ. 1) παρέμεινε καλά καθ' όλη τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης. Ιδιαίτερο ενδιαφέρον παρουσιάζει η διαπίστωση ότι το εν λόγω ζώο διέθετε CF και εξουδετερωτικά αντισώματα (τίτλοι 1:40 και 1:20, αντίστοιχα) κατά τη στιγμή του εμβολιασμού. Δύο από τους 3 χιμπατζήδες ελέγχου που στεγάστηκαν με ζώα εμβολιασμένα με CCA ανέπτυξαν επίσης νόσο. Η έναρξη της νόσου σε αυτά τα ζώα ελέγχου εμφανίστηκε την 7η (9 Φεβρουαρίου) και την 9η (11 Φεβρουαρίου) ημέρα μετά τη λήψη των μη μολυσματικών κυτταρικών καλλιεργειών ή 4 και 6 ημέρες, αντίστοιχα, μετά την πρώτη εμφάνιση συμπτωμάτων στα ζώα δοκιμής. Κανένας από αυτούς τους χιμπατζήδες δεν ανέπτυξε πυρετό.
Εδώ βλέπουμε περισσότερες αποδείξεις ότι ακόμη και από τα ζώα ελέγχου που υποβλήθηκαν σε "μη μολυσματικά" υλικά, παρήχθη στην κυτταροκαλλιέργεια η ίδια CPE που παρατηρήθηκε σε δείγματα από "μολυσμένους" πιθήκους δείχνοντας έτσι ότι δεν ήταν απαραίτητος "ιός" για την παραγωγή του αποτελέσματος.
Από καθέναν από τους 4 χιμπατζήδες που εμφάνισαν εμφανή αναπνευστική νόσο, δηλαδή 2 ζώα δοκιμής και 2 ζώα ελέγχου, ανακτήθηκε ένας παράγοντας κυτταροπαθογόνου για τα ηπατικά κύτταρα από τα επιχρίσματα λαιμού που ελήφθησαν στις 8 Φεβρουαρίου. Επιπλέον, ένας κυτταροπαθογόνος παράγοντας ανακτήθηκε στις 15 Φεβρουαρίου από υλικά λαιμού του τρίτου χιμπατζή που έλαβε μη μολυσματικά υλικά. Αυτό το ζώο, (Blondy στην Εικ. 1) δεν παρουσίασε αναγνωρίσιμη αναπνευστική νόσο- ωστόσο ανέπτυξε αντισώματα δέσμευσης του συμπληρώματος και εξουδετέρωσης σε ελάχιστες ποσότητες. Καθένας από τους 5 ανακτηθέντες παράγοντες αποδείχθηκε ότι ήταν παρόμοιος ή ταυτόσημος με το CCA σε δοκιμές εξουδετέρωσης με ειδικούς αντιορούς που παρασκευάστηκαν σε κουνέλια έναντι του στελέχους Sue και σε δοκιμές πρόσδεσης συμπληρώματος με ανθρώπινο ορό που ήταν γνωστό ότι αντιδρά με το αντιγόνο CCA.
Μπορεί να αναφερθεί εδώ ότι οι 6 χιμπατζήδες σε αυτό το πείραμα (Εικ. 1) προσβλήθηκαν με ενδορινική ενστάλαξη 1 ml υλικού καλλιέργειας ιστού που περιείχε 1000 TC LD50 CCA στις 28 Μαρτίου 1956, 55 ημέρες μετά την αρχική έκθεση, όταν κάθε ζώο διέθετε αποδεδειγμένα CF (εύρος 1:20 έως 1:160) και εξουδετερωτικά (εύρος 1:10 έως 1:20) αντισώματα. Και οι 6 χιμπαντζήδες παρέμειναν ελεύθεροι από κλινικές ενδείξεις της νόσου κατά τη διάρκεια μιας περιόδου παρατήρησης άνω του ενός μηνός- επιπλέον, κατά την ίδια περίοδο των 30 ημερών δεν υπήρξε καμία αξιοσημείωτη μεταβολή στους τίτλους αντισωμάτων στον ορό.
Οι Morris et al. προσπάθησαν πολύ σκληρά να ισχυριστούν ότι ένας εργαζόμενος σε εργαστήριο είχε μολυνθεί από "CCA" μέσω των αποτελεσμάτων των αντισωμάτων, καθώς δεν κατάφεραν να παράγουν το CPE στην καλλιέργεια από το δείγμα που ελήφθη από το άτομο αυτό. Έτσι, θεωρήθηκε ότι είχε μολυνθεί με βάση μη ειδικά αποτελέσματα έμμεσων αντισωμάτων, αφού το "χρυσό πρότυπο" κυτταροκαλλιέργειας απέτυχε.
Μόλυνση εργαζομένου εργαστηρίου με CCA. Κατά τη διάρκεια της δεύτερης εβδομάδας του Φεβρουαρίου 1956, μια ασθένεια που διαγνώστηκε κλινικά ως "λοίμωξη του ανώτερου αναπνευστικού" εμφανίστηκε σε έναν εργαστηριακό εργαζόμενο που εργαζόταν με CCA και ο οποίος είχε έρθει σε στενή επαφή με τους πειραματικά μολυσμένους χιμπατζήδες. Η ασθένειά του χαρακτηριζόταν από αρκετές ημέρες ρινικής μυρωδιάς, ρινόρροιας, βήχα, κακουχίας. που ακολουθήθηκαν από αρκετές ημέρες χαμηλού πυρετού και μετωπιαίου πονοκεφάλου. Τα CF και τα εξουδετερωτικά αντισώματα κατά του CCA δεν ήταν ανιχνεύσιμα στους ορούς του ασθενούς που ελήφθησαν στις 8 Φεβρουαρίου 1956, αλλά ήταν 1:80 στις 22 Φεβρουαρίου 1956. Η μοναδική προσπάθεια ανάκτησης ενός κυτταροπαθογόνου παράγοντα από πλύσεις λαιμού που ελήφθησαν την 6η ημέρα της ασθένειας αυτού του άνδρα δεν ήταν επιτυχής. Τα ορολογικά ευρήματα τα οποία παρουσιάζονται γραφικά στην Εικ. 1 (ασθενής Β1) θεωρούνται ως πιθανή απόδειξη ότι το CCA είχε αιτιολογική σημασία στην ασθένεια του ασθενούς.
Ορολογική αντίδραση του CCA με ορούς που λαμβάνονται από ζώα ανοσοποιημένα έναντι διαφόρων ιών. Οι οροί που ελήφθησαν από ζώα ανοσοποιημένα έναντι διαφόρων ιών εξετάστηκαν σε δοκιμασίες δέσμευσης συμπληρώματος και εξουδετέρωσης ως προς την ικανότητά τους να αντιδρούν με CCA. Οι αντιοροί περιελάμβαναν εκείνους που παρασκευάστηκαν σε πιθήκους έναντι του στελέχους Enders του ιού της ιλαράς* (5) , του ιού του croup του Chanock* (6) και του ιού της ρινίτιδας των χιμπατζήδων 19 54 του Sabin* (7): σε κουνέλια έναντι διαφόρων στελεχών του ιού Coxsackie, (ομάδα Α, τύπος 9 και ομάδα Β. τύποι 1, 2, 3 και 4): σε ορισμένους "ορφανούς" ιούς (8) [πρωτότυποι Walter Reed 7043 (μη τυποποιημένοι), 7045 (ECHO τύπος 6) και 7054 (ECHO τύπος 2)] και τον ιό SV5 των πιθήκων (4) και σε κοτόπουλα κατά του ιού SV59 των πιθήκων (4) .). Όλοι αυτοί οι αντιοροί δεν αντέδρασαν με τον CCA στις δοκιμές δέσμευσης συμπληρώματος ή εξουδετέρωσης.
Σε ακόμη πιο "εξαιρετικά αξιόπιστα" αποτελέσματα δοκιμών αντισωμάτων, οι Morris et al. έδειξαν ότι άτομα που λέγεται ότι είχαν άλλες "ιογενείς" λοιμώξεις διέθεταν επίσης το ίδιο αντίσωμα που λέγεται ότι είναι ειδικό για τον "CCA".
Εμφάνιση αντισωμάτων έναντι του CCA σε ανθρώπινους ορούς. Τα αποτελέσματα των δοκιμών CF για τον προσδιορισμό της εμφάνισης αντισωμάτων CCA σε διάφορες ηλικιακές ομάδες στον ανθρώπινο πληθυσμό παρατίθενται στον Πίνακα III. Οι οροί ελήφθησαν από ασθενείς του Στρατιωτικού Ιατρικού Κέντρου Walter Reed με διάφορες ασθένειες. Είναι προφανές από τα δεδομένα του πίνακα ότι ένας αριθμός ανθρώπων διέθετε αντισώματα CF που αντιδρούν με το αντιγόνο CCA. Επιπλέον, τέτοια αντισώματα ήταν ασυνήθιστα στα παιδιά, αλλά υπήρχαν στο 20% περίπου των ατόμων της μικρής ομάδας εφήβων και νεαρών ενηλίκων που εξετάστηκαν. Έχει κάποιο ενδιαφέρον το γεγονός ότι οι 40 νέοι ενήλικες που αναφέρονται στον πίνακα ήταν συγκάτοικοι του ασθενούς Β1. Ζευγάρια ορών από ομάδες ασθενών με κοινό κρυολόγημα, βρογχίτιδα, θετική για συγκολλητίνη κρυολογήματος πρωτοπαθή άτυπη πνευμονία και λοίμωξη RI-APC-ARD (3 ζεύγη σε κάθε κατηγορία) εξετάστηκαν για αντισώματα δέσμευσης του συμπληρώματος έναντι CCA. Ορισµένες από αυτές τις δοκιµασίες πραγµατοποιήθηκαν από τον Dr. Sidney Katz στο εργαστήριο του Dr. John Dingle στο Cleveland χρησιµοποιώντας τους ορούς τους και το αντιγόνο που προµηθεύσαµε εµείς. Κανένας από τους ασθενείς δεν παρουσίασε σημαντική αύξηση των αντισωμάτων CCA. Ωστόσο, ορισμένοι από τους ασθενείς διέθεταν καθ' όλη τη διάρκεια της ασθένειάς τους σταθερές ποσότητες αντισωμάτων CCA με τίτλους που κυμαίνονταν έως και 1:80.
Η περίληψη παρέχει μια ωραία επισκόπηση του τρόπου με τον οποίο οι Morris et al. εργάστηκαν σκληρά για να πείσουν τους εαυτούς τους ότι είχαν ανακαλύψει έναν νέο "ιό" από έναν πίθηκο, παρόλο που δεν ήταν παθογόνος για τα πειραματόζωα, θα μπορούσε να συσχετιστεί μόνο κατά τεκμήριο μέσω έμμεσων μη ειδικών αποτελεσμάτων αντισωμάτων με έναν άρρωστο εργαζόμενο εργαστηρίου και θα μπορούσε να θεωρηθεί "ιός" μόνο αν αγνοούνταν όλα τα αντιφατικά στοιχεία που προέκυψαν μέσω ελέγχων. Σημειώστε ότι προσπάθησαν να πουν ότι παρά την αδυναμία τους να συνδέσουν άμεσα τον νέο "ιό" με ανθρώπινη ασθένεια, τα έμμεσα μη ειδικά αποτελέσματα αντισωμάτων που παρατηρήθηκαν σε άτομα με άσχετες αναπνευστικές παθήσεις υποδηλώνουν ότι είχαν έρθει σε επαφή με τον "CCA" ή με έναν άγνωστο σχετικό "ιό".
Περίληψη. Ένας ιός ανακτήθηκε από υλικά του λαιμού ενός χιμπατζή με κορυζά κατά τη διάρκεια επιζωοτίας (αναπνευστική νόσος σε αποικία αυτών των ζώων). Ο νέος παράγοντας παρήγαγε εκφυλιστικές αλλαγές σε καλλιέργεια ιστών, αλλά δεν ήταν παθογόνος για τα κοινά πειραματόζωα. Ο χιμπαντζής-δότης καθώς και άλλοι χιμπαντζήδες που συμμετείχαν στην επιζωοτία ανέπτυξαν ειδικά αντισώματα κατά του παράγοντα της κορυζας κατά τη διάρκεια των μηνών που ακολούθησαν την επιδημία. Οι ευπαθείς χιμπατζήδες μετά από ενδορινική ενστάλαξη υλικών καλλιέργειας ιστών που είχαν μολυνθεί με τον παράγοντα της κορυζας ανέπτυξαν κλινική κορυζα και στη συνέχεια σχημάτισαν ειδικά αντισώματα. Διαπιστώθηκε μια πιθανή αιτιολογική συσχέτιση μεταξύ του νέου παράγοντα και της αναπνευστικής νόσου σε έναν εργαζόμενο εργαστηρίου, αλλά δεν ενοχοποιήθηκε για τις νόσους μικρών ομάδων ασθενών με διάφορους κοινούς τύπους αναπνευστικής νόσου. Ωστόσο, ένας αριθµός ανθρώπων, ιδίως εφήβων και νεαρών ενηλίκων, έχουν αντισώµατα στους ορούς τους έναντι του παράγοντα της κορυζας, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα άτοµα αυτά έχουν υποστεί λοίµωξη από το νέο παράγοντα ή από κάποιον που σχετίζεται στενά µε αυτόν.
doi: 10.3181/00379727-92-22538.
https://viroliegyhome.files.wordpress.com/2022/12/morris1956.pdf
Για να είμαι ειλικρινής, η παραπάνω εργασία μπορεί κάλλιστα να είναι η χειρότερη απόδειξη ενός νέου "ιού" που είχα ποτέ τη δυστυχία να διαβάσω. Η έκταση στην οποία έφτασαν οι Morris et al. προκειμένου να αρνηθούν τα αντιφατικά στοιχεία που παρατηρήθηκαν στους ελέγχους, ώστε να μπορέσουν να πείσουν τους εαυτούς τους ότι είχαν έναν νέο "ιό", ήταν εντυπωσιακή. Προκειμένου να δηλώσουν με καθαρό πρόσωπο ότι είχαν ανακαλύψει έναν "ιό", οι Morris et al. έπρεπε να:
Να αγνοήσουν ότι μπόρεσαν να "απομονώσουν" τον παράγοντα μόνο από 1 στους 14 χιμπατζήδες με τα ίδια συμπτώματα της νόσου
Να παραβλέψουν το γεγονός ότι οι πίθηκοι ελέγχου που χρησιμοποιήθηκαν στα πειράματα παθογένειας ήταν παλαιότεροι και είχαν ήδη πειραματιστεί για την έρευνα του "ιού" της ηπατίτιδας
Να αγνοήσουν ότι τα ίδια "ιικά" εγκλείσματα παρατηρήθηκαν σε καλλιέργειες τόσο από τους "μολυσμένους" όσο και από τους "μη μολυσμένους" πιθήκους ελέγχου
Να κλείσουν τα μάτια στην αδυναμία να αρρωστήσουν πολλά ζώα με διαφορετικούς τρόπους ένεσης
Να απορρίψουν τη διαπίστωση των ίδιων "μη ιογενών αφρωδών παραγόντων" που παρατηρήθηκαν σε προηγούμενες μελέτες με τη χρήση νεφρικών κυττάρων πιθήκων, τα οποία δημιουργούσαν δυσδιάκριτα CPE καθιστώντας δύσκολη την ερμηνεία
Να δικαιολογήσουν γιατί τα υγιή ζώα που δεν παρουσίαζαν σημάδια ασθένειας παρουσίασαν αύξηση των αντισωμάτων.
Να παραβλέψουν το γεγονός ότι μόνο 2 από τα 3 "μολυσμένα" ζώα αρρώστησαν, ενώ 2 από τα 3 "μη μολυσμένα" ζώα ελέγχου αρρώστησαν επίσης.
Να απορρίψουν το γεγονός ότι κυτταροπαθογόνοι "παράγοντες" βρέθηκαν σε 3 ζώα ελέγχου και μόνο σε 2 "μολυσμένα" ζώα
Να παραβλέψουν το γεγονός ότι δεν μπόρεσαν να απομονώσουν έναν "ιό" από έναν εργαζόμενο εργαστηρίου που λέγεται ότι ήταν "μολυσμένος" και μπορούσαν μόνο να υποθέσουν "μόλυνση" με βάση μη ειδικά αποτελέσματα έμμεσων αντισωμάτων
Να αιτιολογήσουν τη διαπίστωση των ίδιων αντισωματικών αποκρίσεων σε περιπτώσεις αναπνευστικής νόσου που δεν λέγεται ότι προκαλείται από τον παράγοντα της κορυζας των χιμπατζήδων τους
Ουσιαστικά, οι Morris et al. αγνόησαν εντελώς τα αντιφατικά στοιχεία από τα πειράματα ελέγχου τους που θα έπρεπε να τους οδηγήσουν στο συμπέρασμα ότι οι πειραματικές συνθήκες δημιούργησαν τα αποτελέσματα που παρατηρήθηκαν και όχι ένας φανταστικός "ιός". Αντ' αυτού, οι Morris et al. βρήκαν τρόπους να προσπαθήσουν να εκλογικεύσουν και να εξηγήσουν τις αντιφάσεις, ώστε να μπορέσουν να ισχυριστούν την επιτυχή "απομόνωση" ενός αόρατου "ιού" που ποτέ δεν παρατήρησαν άμεσα, ούτε μπόρεσαν να αποδείξουν έμμεσα μέσω πειραμάτων. Θα μπορούσαμε να τελειώσουμε αυτή την έρευνα ακριβώς εδώ με το "RSV", καθώς κάθε μελέτη που ακολούθησε στη συνέχεια οικοδομήθηκε πάνω στα απατηλά θεμέλια των αντιεπιστημονικών συμπερασμάτων και στοιχείων που αντλήθηκαν από αυτή τη μοναδική μελέτη.
Ωστόσο, η περιέργειά μου πάντα με κυριεύει. Καθώς η εργασία του 1957 των Chanock et al. αναφερόταν επίσης ως ουσιώδης για την ανακάλυψη του "RSV" στα παιδιά, έπρεπε να ρίξω μια ματιά για να δω τι είδους στοιχεία αποκάλυψαν αυτοί οι ερευνητές ένα χρόνο αργότερα, τα οποία θα μπορούσαν ενδεχομένως να σώσουν το ναυάγιο που μόλις είχα διαβάσει. Στη συνέχεια παρουσιάζεται η πλήρης μελέτη του 1957 με σχόλια.
Ανάρρωση από βρέφη με αναπνευστική νόσο ενός ιού που σχετίζεται με τον παράγοντα της coryza των χιμπατζήδων (CCA). I. Απομόνωση, ιδιότητες και χαρακτηρισμός
Αρχικά, οι Chanock et al. ισχυρίζονται ότι δύο παράγοντες που ανακτήθηκαν από παιδιά με αναπνευστική νόσο ήταν δυσδιάκριτοι από τον CCA των Morris et al. Ως συνήθως, κανένα υποτιθέμενο "ιικό" σωματίδιο δεν καθαρίστηκε ποτέ και δεν απομονώθηκε απευθείας από τα υγρά των άρρωστων παιδιών. Αντ' αυτού, τα επιχρίσματα λαιμού από βρέφη με αναπνευστική νόσο και εκείνα με μη αναπνευστική νόσο εμβαπτίζονταν αμέσως σε 5 ml διαλύματος Hanks που περιείχε 2.000 μονάδες πενικιλλίνης, 2.000 μικρογραμμάρια στρεπτομυκίνης και 150 μονάδες μυκοστατίνης ανά ml. πριν από την καλλιέργεια. Τα δείγματα αυτά προστέθηκαν σε μη καθαρισμένες δημιουργίες καλλιέργειας κυττάρων που αποτελούνταν είτε από:
Ανθρώπινο επιδερμοειδές καρκίνωμα που αναπτύσσεται σε ανθρώπινο ή ιπποειδή ορό, πλένεται σε διάλυμα Hank και διατηρείται σε μέσο Eagles με ορό κοτόπουλου
Ανθρώπινο ηπατικό επιθήλιο που αναπτύχθηκε σε μέσο Eagles με 20% ορό αλόγου, το οποίο συντηρήθηκε επίσης σε μέσο Eagles με 4% ορό αλόγου
Καλλιέργειες ανθρώπινων αμνίων που παρασκευάστηκαν σε μέσο 199 με ορό αλόγου
Καλλιέργειες νεφρών πιθήκων που διατηρήθηκαν σε Medium 199 με προσθήκη ορού μοσχαριού για την ανάπτυξη
Όπως γίνεται αντιληπτό, η διαδικασία αυτή είναι το ακριβώς αντίθετο του καθαρισμού και της απομόνωσης οποιουδήποτε "ιού" και συνίσταται στη δημιουργία ενός τοξικού μείγματος ανθρώπινων και ζωικών υγρών με συνθετικές χημικές ουσίες.
ΕΙΣΑΓΩΓΗ
Η παρούσα μελέτη πραγματοποιήθηκε σε μια προσπάθεια ανάκτησης νέων κυτταροπαθογόνων παραγόντων από βρέφη με σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού συστήματος (βρογχοπνευμονία, βρογχιολίτιδα και λαρυγγοτραχειοβρογχίτιδα) και εκτίμησης της αιτιολογικής τους σημασίας σε αυτό το σύμπλεγμα νόσου. Κατά τη διάρκεια αυτών των ερευνών, ανακτήθηκαν δύο παρόμοιοι ιοί -οι οποίοι αποδείχθηκαν ότι δεν διέφεραν από έναν παράγοντα που σχετίζεται με μια επιδημία κορυζας σε χιμπαντζήδες (ιός CCA), ο οποίος μελετήθηκε από τους Morris, Blount και Savage (1). Σκοπός της παρούσας ανακοίνωσης είναι να περιγράψει την απομόνωση, τις ιδιότητες και τον χαρακτηρισμό των παραγόντων αυτών. Στη δεύτερη ανακοίνωση αυτής της σειράς (2) θα συζητηθούν οι επιδημιολογικές πτυχές της μόλυνσης του ανθρώπου από αυτούς τους ιούς.
ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ
Καλλιέργεια ιστών. Το στέλεχος KB του ανθρώπινου επιδερμοειδούς καρκινώματος καλλιεργήθηκε στο χημικά καθορισμένο μέσο Eagle (3) που περιείχε είτε 10 τοις εκατό κανονικό αδρανοποιημένο (56 C) ανθρώπινο ορό είτε ορό αλόγου. Πριν από τη χρήση, οι καλλιέργειες πλύθηκαν 3 φορές με διάλυμα Hanks. Το μέσο συντήρησης αποτελούνταν από μέσο Eagle με 2 τοις εκατό αδρανοποιημένο ορό κοτόπουλου. Το στέλεχος Chang ανθρώπινου ηπατικού επιθηλίου (4) αναπτύχθηκε σε μέσο Eagle με 20 τοις εκατό αδρανοποιημένο ορό αλόγου και συντηρήθηκε σε μέσο Eagle με 4 τοις εκατό αδρανοποιημένο ορό αλόγου. Το μέσο συντήρησης για τις καλλιέργειες KB και ήπατος άλλαζε κάθε 3 έως 4 ημέρες.
Οι καλλιέργειες ανθρώπινου αμνίου παρασκευάστηκαν σύμφωνα με τη μέθοδο των Takemoto και Lerner (5). Το μέσο συντήρησης για τις καλλιέργειες αυτές αποτελούνταν από το μέσο 199 με 4 τοις εκατό αδρανοποιημένο ορό αλόγου. Οι καλλιέργειες επιθηλιακών νεφρών πιθήκων παρασκευάστηκαν και συντηρήθηκαν σε Medium 199 (6). Για την ανάπτυξη προστέθηκε 2 τοις εκατό αδρανοποιημένος ορός μοσχαριού, ενώ το μέσο συντήρησης δεν περιείχε ορό.
Δείγματα για την απομόνωση του ιού. Τα επιχρίσματα λαιμού από βρέφη με αναπνευστική νόσο και βρέφη με μη αναπνευστική νόσο εμβαπτίζονταν σε 5 ml διαλύματος Hanks που περιείχε 2.000 μονάδες πενικιλλίνης, 2.000 μικρογραμμάρια στρεπτομυκίνης και 150 μονάδες μυκοστατίνης ανά ml. Τα δείγματα εξετάστηκαν αμέσως ή μετά από αποθήκευση στους - 50 C. Δύο δέκατα ml υγρού από επίχρισμα λαιμού εμβολιάστηκαν σε καθεμία από 3 έως 4 καλλιέργειες νεφρικού επιθηλίου πιθήκου, KB και ανθρώπινου αμνίου.
Για άλλη μια φορά, θα παραλείψω την έμμεση δοκιμή μη ειδικών αντισωμάτων και τα αποτελέσματα για τους ίδιους λόγους που εξηγήθηκαν όσον αφορά την προηγούμενη εργασία.
Τιτλοδοτήσεις μολυσματικότητας και δοκιμές εξουδετέρωσης σε καλλιέργεια ιστών. Οι δοκιμές αυτές πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως (7). Είκοσι έως 200 TCD50 του ιού, όπως μετρήθηκαν με ταυτόχρονη τιτλοδότηση, χρησιμοποιήθηκαν στις δοκιμασίες εξουδετέρωσης, οι οποίες διαβάστηκαν την τρίτη ή την τέταρτη ημέρα. Σε όλες τις δοκιμές εξουδετέρωσης χρησιμοποιήθηκαν καλλιέργειες ήπατος Chang.
Συμπληρωματική σταθεροποίηση. Χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος των Osier, Strauss και Mayer (8). Εν συντομία, 0,2 ml αραίωσης ορού, 5 C'H|s0 (50 % αιμολυτική δόση) συμπληρώματος που περιέχονταν σε 0,5 ml και 0,5 ml αντιγόνου επωάστηκαν στους 3 έως 5 C για 18 ώρες και στη συνέχεια για 20 λεπτά στους 37 C, οπότε προστέθηκαν 0,3 ml ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων προβάτου και η δοκιμασία επωάστηκε στους 37 C για 1 ώρα. Σε κάθε δοκιμασία περιλαμβάνονταν θετικοί έλεγχοι ορού, αντισυμπληρωματικοί έλεγχοι και τιτλοδότηση συμπληρώματος.
Τα αντιγόνα σταθεροποίησης συμπληρώματος (CF) παρασκευάστηκαν από μολυσμένες καλλιέργειες KB οι οποίες καταψύχθηκαν και αποψύχθηκαν δύο φορές και φυγοκεντρήθηκαν στις 1.500 στροφές ανά λεπτό για 30 λεπτά. Το υπερκείμενο υγρό που περιείχε το αντιγόνο αποθηκεύτηκε στους 50 C.
Σε αυτή την επόμενη ενότητα, μπορούμε να δούμε ότι το μέγεθος του "ιού" εκτιμήθηκε έμμεσα, καθώς δεν παρατηρήθηκαν ποτέ πραγματικά "ιικά" σωματίδια.
Μέτρηση του μεγέθους των σωματιδίων. Η διάμετρος των σωματιδίων του ιού εκτιμήθηκε με τροποποίηση της μεθόδου των Pardee και Schwerdt (9), η οποία θα περιγραφεί στο κείμενο. Στα παρόντα πειράματα χρησιμοποιήθηκε ο περιστρεφόμενος ρότορας κάδου (SW 39) της υπερφυγόκεντρου Spinco Model L. Οι τιτλοδοτήσεις για τη μολυσματικότητα πραγματοποιήθηκαν με αραιώσεις 3,2 φορές και 8 σωληνάρια καλλιέργειας ανά αραίωση. Το τυπικό σφάλμα αυτών των τιτλοδοτήσεων, όπως υπολογίστηκε με τη μέθοδο Pizzi (10), ήταν μικρότερο από 10v0,2.
Οι Chanock et al. χρησιμοποίησαν την πυκνότητα και τη διάμετρο των σωματιδίων της "καθαρισμένης πολιομυελίτιδας" για τον προσδιορισμό της σταθεράς φυγοκέντρησης. Ωστόσο, υπάρχει ένα μικρό πρόβλημα, καθώς η πολιομυελίτιδα δεν καθαρίστηκε ούτε απομονώθηκε ποτέ, όπως εξηγείται εδώ, εδώ και εδώ.
Η σταθερά φυγοκέντρησης (Κ) προσδιορίστηκε πειραματικά με καθαρισμένο πολιοϊό τύπου 1 του οποίου η πυκνότητα και η διάμετρος των σωματιδίων είναι γνωστές. Χρησιμοποιήθηκε εναιώρημα που περιείχε 1.000 PFU (μονάδες σχηματισμού πλάκας) ανά ml. Οι τιτλοδοτήσεις μολυσματικότητας πραγματοποιήθηκαν σε τριπλάσιες αραιώσεις με τέσσερις πλάκες μονοστρωματικής νεφρικής στοιβάδας πιθήκου (Erythrocebus patus) 100 χιλιοστών ανά αραίωση. Η τιμή του Κ που λήφθηκε ήταν 3,1 X 10^6.
Κοιτάξτε τις γελοίες και ασυνεπείς μεθόδους που χρησιμοποιούνται για τη δημιουργία αντιορού. Γιατί δόθηκαν στα κουνέλια περισσότερες ενέσεις από ό,τι στα ινδικά χοιρίδια και γιατί υπήρχαν πρόσθετα όπως 2 ml μείγματος Mycobacterium, butyricum, παραφινέλαιο και arlacel; Σημειώστε επίσης ότι ο παράγοντας CCA παρασχέθηκε στους Chanock et al. από τους Morris et al. όπως συνέβη και με τον αντιορό άλλων "ιών", οι οποίοι παρασχέθηκαν όλοι από διαφορετικούς ερευνητές (συμπεριλαμβανομένου του Enders) που χρησιμοποίησαν τις δικές τους μεθόδους και συνταγές για τη δημιουργία αυτών των ουσιών.
Παραγωγή αντιορού. Τα ινδικά χοιρίδια ανοσοποιήθηκαν με 3 εβδομαδιαίους ενδοπεριτοναϊκούς εμβολιασμούς 1 ml μολυσμένου υγρού ιστοκαλλιέργειας. Στα κουνέλια χορηγήθηκαν 3 εβδομαδιαίες ενδοφλέβιες εμβολιασμοί του 1 ml έκαστος και ακολούθησαν 2 εβδομαδιαίες ενδομυϊκές εμβολιασμοί του 1 ml μολυσμένου υγρού καλλιέργειας σε συνδυασμό με 2 ml μείγματος Mycobacterium, butyricum, παραφινέλαιο και arlacel.
Άλλοι ιοί. Ο παράγοντας της κορυζας των χιμπαντζήδων (CCA) παραχωρήθηκε ευγενικά από τους Dr. J. A. Morris και Maj. E. Buescher.
Ανοσοποιητικοί οροί για άλλους ιούς. Ειδικός αντιορός για διάφορους ιούς παραχωρήθηκε ευγενικά από τους ακόλουθους ερευνητές: οροί χιμπατζήδων για τον ιό CCA από τον Dr.'J. A. Morris και Maj. E. Buescher- ορός πιθήκου για την ιλαρά από τον Dr. J. F. Enders, ορός κουνελιού και κοτόπουλου για την παρωτίτιδα από τον Dr. F. B. Bang- ανθρώπινος ορός για την ψιττακίαση από τον Dr. A. G. Osier- και ορός κουνελιού και ανθρώπου για τον ιό της πρωτοπαθούς άτυπης πνευμονίας (PAP) από τους Dr. Chien Liu και M. D. Eaton.
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Οι Chanock et al. βασίστηκαν στον "ιό" τους σε 2 περιπτώσεις ΚΠΕ (CPE) που παρατηρήθηκαν σε 2 από τους 59 ασθενείς (ο ένας με βρογχοπνευμονία και ο άλλος με λαρυγγοτραχειοβρογχίτιδα), οι οποίες μπορούσαν να παραχθούν μόνο στις καλλιέργειες KB και ήπατος, αλλά όχι στις καλλιέργειες νεφρού πιθήκου ή ανθρώπινου αμνίου. Οι υπόλοιποι 57 ασθενείς που υπέφεραν από τα ίδια ακριβώς συμπτώματα δεν πρέπει να είχαν κανέναν "ιό" με βάση αυτά τα ευρήματα. Σημειώθηκε ότι η σειριακή διέλευση της καλλιέργειας οδήγησε σε ταχύτερη παρατήρηση του ΚΠΕ. Ωστόσο, είναι γνωστό ότι η σειριακή πάσαση επηρεάζει την κυτταροκαλλιέργεια, καθώς διαταράσσεται και ανανεώνονται οι τοξικές χημικές ουσίες που οδηγούν σε ταχύτερο κυτταρικό θάνατο.
Απομόνωση των παραγόντων. Ένας ασυνήθιστος κυτταροπαθογόνος παράγοντας ανακτήθηκε σε καλλιέργεια KB από το επίχρισμα του λαιμού ενός από τους 41 ασθενείς με βρογχοπνευμονία (ασθενής Long) και από ένα από τα 18 άτομα με λαρυγγοτραχειοβρογχίτιδα (ασθενής Snyder). Στο εξής οι παράγοντες αυτοί θα αναφέρονται ως ιός Long και ιός Snyder. Οι προσπάθειες ανάκτησης αυτών των παραγόντων μετά από εμβολιασμό υγρού από επίχρισμα λαιμού σε καλλιέργειες νεφρού πιθήκου και ανθρώπινου αμνίου ήταν ανεπιτυχείς, αν και οι καλλιέργειες αυτές διατηρήθηκαν για 3 έως 4 εβδομάδες σε καλή κατάσταση.
Η συμπεριφορά αυτών των παραγόντων κατά τη διάρκεια των πρώιμων διελεύσεών τους σε καλλιέργειες ιστών παρουσιάζεται στον πίνακα 1. Το χρονικό διάστημα πριν παρατηρηθούν κυτταροπαθογόνα αποτελέσματα μετά τον εμβολιασμό του ιού Long μειώθηκε κατά τη διάρκεια του δεύτερου και του τρίτου περάσματος KB. Η συμπεριφορά του ιού κατά το τρίτο πέρασμα KB ήταν χαρακτηριστική του ιού στα επόμενα περάσματα.
Ο ιός Long απομονώθηκε εκ νέου από το αρχικό υγρό επιχρίσματος λαιμού σε καλλιέργειες ανθρώπινου ηπατικού επιθηλίου (στέλεχος Chang). Είναι ενδιαφέρον ότι η περίοδος επώασης κατά το πρώτο πέρασμα στο ήπαρ ήταν μικρότερη από εκείνη που παρατηρήθηκε στην καλλιέργεια KB.
Ο ασθενής Long ανέπτυξε τόσο ΚΠ (τίτλος < 1 προς 4 στον οξύ ορό και 1 προς 80 στον ορό ανάρρωσης) όσο και εξουδετερωτικά αντισώματα (τίτλος < 1 προς 4 στον οξύ ορό και 1 προς 64 στον ορό ανάρρωσης) για τον ιό Long. Ο ασθενής Snyder ανέπτυξε αντισώματα CF για τον ιό Long ( τίτλος < 1 προς 4 στον οξεία ορό και 1 προς 8 στον ορό ανάρρωσης), αλλά δεν κατέστη δυνατή η διενέργεια δοκιμών με τον ομόλογο ιό λόγω ανεπάρκειας ορού.
Εδώ βλέπουμε σε τι σημείο φτάνουν οι ερευνητές προκειμένου να δημιουργήσουν το κυτταροπαθογενετικό αποτέλεσμα που θέλουν να παρατηρήσουν. Ενώ οι Chanock et al. δεν μπόρεσαν να καλλιεργήσουν τον "ιό" τους σε ανθρώπινα αμνιακά κύτταρα από τα υγρά από τα επιχρίσματα του λαιμού των ασθενών, ισχυρίστηκαν ότι μετά την καλλιέργεια του "ιού" σε κύτταρα KB μπορούσαν να έχουν επίδραση σε ανθρώπινα αμνιακά κύτταρα, αν και μετά από πολύ μεγαλύτερη περίοδο καλλιέργειας και ποτέ δεν είχαν ολοκληρωμένη επίδραση. Με άλλα λόγια, δημιούργησαν ένα μη καθαρισμένο μείγμα σε κύτταρα KB και το πρόσθεσαν στην καλλιέργεια ανθρώπινου αμνίου, το οποίο ήταν προφανώς πιο τοξικό για τα κύτταρα από τα αρχικά δείγματα επιχρίσματος λαιμού που περιείχαν λιγότερες προσμίξεις και ισχυρίστηκαν ότι πέτυχαν, παρόλο που η ΚΠΕ χρειάστηκε πολύ περισσότερο χρόνο για να παρατηρηθεί και ήταν ελλιπής.
Κυτταροπαθογόνο αποτέλεσμα σε καλλιέργεια ιστών. Και οι δύο παράγοντες Long και Snyder παρήγαγαν κυτταροπαθογόνα αποτελέσματα σε καλλιέργειες ήπατος και KB. Με το μη αραιωμένο υγρό ιστοκαλλιέργειας οι επιδράσεις αυτές παρατηρήθηκαν μέσα σε 2 έως 3 ημέρες, ενώ οι ελάχιστες ποσότητες του ιού απαιτούσαν 5 έως 8 ημέρες. Μετά την απομόνωση σε καλλιέργειες KB, ο ιός Long παρήγαγε επίδραση σε καλλιέργεια ανθρώπινου αμνίου. Απαιτήθηκε μεγαλύτερο χρονικό διάστημα σε καλλιέργειες αμνίων πριν παρατηρηθούν κυτταροπαθογενετικές αλλαγές και η εξέλιξη ήταν πολύ αργή. Έτσι, το πέρασμα 1 του Long KB, όταν εμβολιάστηκε σε καλλιέργειες KB, παρήγαγε αποτέλεσμα εντός 3 ημερών και σχεδόν πλήρης καταστροφή του κυτταρικού φύλλου συνέβη την πέμπτη ημέρα, ενώ οι καλλιέργειες αμνίων που εμβολιάστηκαν ταυτόχρονα με το ίδιο υλικό δεν παρουσίασαν αποτέλεσμα πριν από 9 έως 14 ημέρες και ολόκληρο το κυτταρικό φύλλο δεν είχε εμπλακεί μέχρι την εικοστή δεύτερη ημέρα.
Η ευαισθησία των καλλιεργειών KB και του ήπατος για τον ιό Long ήταν η ίδια. Η ταυτόχρονη τιτλοδότηση του Long KB πέρασμα 5 σε καλλιέργειες ήπατος και KB έδωσε τον ίδιο τίτλο, δηλαδή 10^5 TCDv50 ανά ml.
Τα κύτταρα KB, τα οποία υπέκυψαν ταχύτερα στην τοξική συνταγή, αποδείχθηκε ότι είχαν περαιτέρω βλάβη από τις καλλιέργειες ήπατος και αμνίου με την εμφάνιση εκφυλισμού στρογγυλών κυττάρων.
Η πιο εντυπωσιακή επίδραση του ιού Long στην καλλιέργεια ιστών ήταν ο σχηματισμός συγκυριακών περιοχών. Στα κύτταρα KB εμφανίστηκε επίσης εκφυλισμός στρογγυλών κυττάρων, αλλά υπερίσχυσε ο σχηματισμός συγκυτίων. Σε καλλιέργειες ήπατος και αμνίων παρατηρήθηκαν μόνο συγκυτιοειδείς περιοχές. Οι συγκυτιακές περιοχές χαρακτηρίζονταν από απώλεια των ορίων των κυττάρων και συσσώρευση ποικίλου αριθμού άθικτων πυρήνων σε μια περιοχή ομοιογενούς κυτταροπλάσματος (εικόνες 1 και 2). Το μοτίβο της χρωματίνης του πυρήνα ήταν τροποποιημένο (εικόνα 3). Παχιά σκέλη χρωματίνης εμφανίζονταν να ακτινοβολούν περιφερικά από μια παχιά κεντρική μάζα που δεν μπορούσε να διακριθεί από ένα σώμα εγκλεισμού. Οι εμπλεκόμενες περιοχές των μολυσμένων ηπατικών καλλιεργειών ήταν παρόμοιες με εκείνες που παρατηρήθηκαν σε καλλιέργειες KB.
Οι κυτταροπαθογενετικές μεταβολές παρατηρήθηκαν αρχικά ως μικρές περιγεγραμμένες συγκυτιακές περιοχές που ήταν τυχαία κατανεμημένες και οι οποίες διευρύνθηκαν σε διάστημα 24 ωρών, οπότε και έκαναν την εμφάνισή τους πολυάριθμες άλλες συγκυτιακές περιοχές. Συνήθως, μέσα σε 1 έως 4 ημέρες εμπλέκεται ολόκληρο το κυτταρικό φύλλο.
Καθώς δεν παρατηρήθηκαν ποτέ "ιϊκά" σωματίδια, οι Chanock et al. χρησιμοποίησαν έμμεσα μέσα για να εκτιμήσουν το μέγεθος των αόρατων σωματιδίων. Έκαναν παρέκταση (η ενέργεια της εκτίμησης ή του συμπεράσματος για κάτι υποθέτοντας ότι οι υπάρχουσες τάσεις θα συνεχιστούν ή ότι μια τρέχουσα μέθοδος θα παραμείνει εφαρμόσιμη) από τη φυγοκέντρηση σε διαλύματα σακχαρόζης. Οι ερευνητές παραδέχθηκαν ότι η μέθοδος που χρησιμοποίησαν ήταν μια πρόχειρη εκτίμηση και χρειαζόταν επιβεβαίωση με πιο εκλεπτυσμένες μετρήσεις. Ίσως θα βοηθούσε η οπτική διάθεση των πραγματικών "ιικών" σωματιδίων;
Φυσικές ιδιότητες. Η διάμετρος του ιού Long προσδιορίστηκε με φυγοκέντρηση σε διαλύματα σακχαρόζης ποικίλων συγκεντρώσεων με τροποποίηση της μεθόδου των Pardee και Schwerdt (9). Τα υπερκείμενα υγρά τιτλοδοτήθηκαν για την υπολειπόμενη μολυσματικότητα. Όταν το ποσοστό του ιού που δεν είχε καθιζάνει σε σχέση με την πυκνότητα της σακχαρόζης, προέκυψε με παρέκταση η πυκνότητα της σακχαρόζης στην οποία είχε καθιζάνει όλος ο ιός. Η πυκνότητα σακχαρόζης στην οποία δεν καθιζάνει κανένας ιός προέκυψε επίσης με παρέκταση. Το ιξώδες που αντιστοιχεί στις τιμές πυκνότητας σακχαρόζης που προεκτάθηκαν υπολογίστηκε από τα δεδομένα που δίνει ο Bates (11). Από τις τιμές αυτές προέκυψε η διάμετρος των σωματιδίων με τον τύπο που παρατίθεται στον πίνακα 2. Σε δύο ανεξάρτητα πειράματα προέκυψαν διαμέτρους σωματιδίων 105 και 107 χιλιοστομικρών. Οι αντίστοιχες τιμές πυκνότητας των ενυδατωμένων σωματιδίων ήταν 1,19 και 1,26. Εάν αυτές οι τιµές πυκνότητας ληφθούν ως εύρος, τότε η διάµετρος των σωµατιδίων µπορεί να εκτιµηθεί ότι κυµαίνεται µεταξύ 90 και 130 χιλιοστόµετρων. Πρέπει να σηµειωθεί ότι η µέθοδος που χρησιµοποιήθηκε για τον προσδιορισµό του µεγέθους παρέχει απλώς µια πρόχειρη εκτίµηση που θα απαιτήσει επιβεβαίωση µε πιο εκλεπτυσµένες µεθόδους.
Το αντιγόνο που είναι υπεύθυνο για τη δέσμευση του συμπληρώματος φαίνεται να έχει μικρότερη σταθερά καθίζησης από το μολυσματικό σωματίδιο. Έτσι, η φυγοκέντρηση στις 30.000 σ.α.λ. για 2,5 ώρες στον αριθµό 30 του στροφείου της υπερφυγόκεντρου Model L Spinco (78.410 X G κατά µέσο όρο) απέτυχε να µειώσει τον τίτλο του αντιγόνου CF του υπερκείµενου υγρού. Μετά από πρόσθετη φυγοκέντρηση στις 40.000 r.p.m. για 3 ώρες στο στροφείο αριθμού 40 (105.000 X G κατά μέσο όρο) η ισχύς του αντιγόνου CF στο υπερκείμενο υγρό παρέμεινε αμετάβλητη.
Ήταν δυνατόν να διαχωριστεί η μολυσματικότητα και η δραστικότητα του αντιγόνου CF με φυγοκέντρηση, όπως φαίνεται στον πίνακα 3. Το αντιγόνο CF ανακτήθηκε ποσοτικά από το υπερκείμενο υγρό, ενώ τα σφαιρίδια περιείχαν το 90 % του ανακτήσιμου μολυσματικού ιού χωρίς ανιχνεύσιμο αντιγόνο CF.
Σε αυτό το τμήμα, οι Chanock et al. προσπάθησαν με κάθε τρόπο να κάνουν τον "ιό" τους να μολύνει κοτόπουλα ή να πολλαπλασιαστεί σε εμβρυοποιημένα αυγά, αλλά απέτυχαν σε κάθε προσπάθεια. Επίσης, δεν μπόρεσαν να κάνουν τον "ιό" τους να νοσήσει ποντίκια μιας ημέρας με ένεση στον εγκέφαλο ή στο χώρο μεταξύ των μυών και των οργάνων στην κοιλιά.
Άλλες ιδιότητες. Η έκθεση του ιού Long σε 20% αιθέρα για 16 ώρες στους 4 C είχε ως αποτέλεσμα την πλήρη απώλεια της μολυσματικότητας. Οι προσπάθειες να αποδειχθεί μια αιμοσυγκολλητίνη για τα ερυθροκύτταρα "Ο" κοτόπουλου ή ανθρώπου ήταν ανεπιτυχείς. Δεν παρατηρήθηκαν στίγματα 3 ημέρες μετά τον εμβολιασμό 10 και 100 TCDv50. του ιού Long στη χοριοαλλαντοϊκή μεμβράνη του εμβρυοποιημένου αυγού 11 ημερών. Ο πολλαπλασιασμός του ιού Long δεν μπόρεσε να αποδειχθεί όταν εμβρυοποιημένα αυγά 9 ημερών εμβολιάστηκαν με 10.000 TCD50 στον αμνιακό σάκο και επωάστηκαν για 6 ημέρες. Ο ιός Long δεν ήταν παθογόνος για ποντίκια ηλικίας 1 ημέρας με ενδοεγκεφαλική ή ενδοπεριτοναϊκή οδό. Ο ιός Long μπορούσε να διηθηθεί μέσω μεμβρανών gradocol με μέση διάμετρο πόρων 590 και 960 χιλιοστομικρών.
Οι Chanock et al. επιχείρησαν να συνδέσουν τον "ιό" των Long και Snyder με τον CCA των Morris et al. μέσω του μοτίβου του CPE που παρατηρήθηκε σε καλλιέργειες ήπατος και KB, καθώς και των αποτελεσμάτων έμμεσων μη ειδικών αντισωμάτων. Σημειώστε ότι ούτε ο CCA ούτε οι "ιοί" Long/Snyder είχαν ποτέ παρατηρηθεί προκειμένου να χαρακτηριστούν ή να συγκριθούν. Οι ερευνητές χρησιμοποίησαν επίσης αυτά τα ίδια έμμεσα μέσα, βασιζόμενοι κυρίως στα αποτελέσματα αντισωμάτων, για να ισχυριστούν ότι ο "ιός" τους δεν είχε σχέση με άλλους "ιούς".
Σχέση με τον ιό CCA. Ο ιός CCA παραλήφθηκε στο εργαστήριο μετά την απομόνωσητου Long ιού. Ο ιός CCA παρήγαγε κυτταροπαθογόνο αποτέλεσμα σε καλλιέργειες ήπατος και KB, το οποίο ήταν πανομοιότυπο με αυτό που παρατηρήθηκε με τους ιούς Long και Snyder. Με δοκιμές CF με ζευγαρωμένους ορούς ανθρώπων και χιμπατζήδων (πίνακας 4) οι ιοί Long και Snyder ήταν δυσδιάκριτοι από τον ιό CCA. Σε δοκιμές εξουδετέρωσης με ορούς από ανοσοποιημένα ινδικά χοιρίδια και κουνέλια (πίνακας 5). Οι ιοί Long, Snyder και CCA αντέδρασαν με παρόμοιο τρόπο, εκτός από τις δοκιμές με ορό ανοσοποιημένου ινδικού χοιριδίου CCA. Παρόλο που ο ανοσοποιημένος ορός CCA ινδικού χοιριδίου εξουδετέρωσε τον ιό Long, ο ομόλογος τίτλος με τον ιό CCA ήταν 8 φορές υψηλότερος.
Σχέση με άλλους ιούς. Οι κυτταροπαθογόνες επιδράσεις που παρήγαγε ο ιός Long ήταν διαφορετικές από εκείνες που χαρακτηρίζουν την ομάδα των αδενοϊών. Ο ιός Long δεν σχετιζόταν αντιγονικά με τους αδενοϊούς, όπως έδειξε η μη συσχέτιση των αυξήσεων των αντισωμάτων CF για τον ιό Long και τους αδενοϊούς σε βρέφη με ή χωρίς αναπνευστική νόσο (πίνακας 6). Το ιστορικό αυτών των βρεφών θα περιγραφεί πληρέστερα στη συνοδευτική ανακοίνωση (2).
Ο ιός Long δεν είχε αντιγονική συγγένεια με άλλους ανθρώπινους ιούς που προκαλούν συγκυριακές μεταβολές σε καλλιέργεια ιστών (πίνακας 7).
Ο ιός Long διέφερε από τον ιό της πρωτοπαθούς άτυπης πνευμονίας (PAP) των Liu και Eaton (12). Μια αραίωση 1 προς 4 ενός ορού από ανοσοποιητικό κουνέλι PAP (ομόλογος τίτλος 1 προς 256) απέτυχε να εξουδετερώσει τον ιό Long. Επιπλέον, δεν ανιχνεύθηκε αντίσωμα CF για τον ιό Long ούτε παρατηρήθηκε μεταβολή του εξουδετερωτικού αντισώματος Long με ζεύγη δειγμάτων ορού από ασθενή με PAP, ο οποίος ανέπτυξε εξουδετερωτικό αντίσωμα για τον ιό PAP κατά τη διάρκεια της ανάρρωσης.
Ο ιός Long vims δεν σχετιζόταν με την ομάδα ιών psittacosis-LGV, δεδομένου ότι ένας ανθρώπινος ορός με τίτλο CF psittacosis 1 προς 160 απέτυχε να δεσμεύσει το συμπλήρωμα σε αραίωση l προς 5 με αντιγόνο CF Long.
ΣΥΖΗΤΗΣΗ
Στην ενότητα της συζήτησης, λαμβάνουμε τη δήλωση ότι οι ΚΠΕ και οι αντιγονικές ιδιότητες μεταξύ των Long/Snyder και CCA ήταν παρόμοιες (όχι ταυτόσημες όπως αναφέρθηκε προηγουμένως) και παρόλα αυτά ισχυρίζονται ότι οι παράγοντες τους ήταν δυσδιάκριτοι μεταξύ τους. Ωστόσο, έγινε μια αρκετά αποκαλυπτική δήλωση όπου οι Chanock et al. παραδέχονται ότι τα ευρήματά τους δεν απέδειξαν ότι οι "ιοί" των Long και Snyder ήταν υπεύθυνοι για τις σχετικές ασθένειες στα βρέφη. Αρκετά ειπώθηκε.
Οι Morris, Blount και Savage ανέκτησαν έναν ιό (CCA) από ένα ξέσπασμα ήπιας αναπνευστικής νόσου σε χιμπατζήδες (1). Η ασθένεια αυτή, αναπαράχθηκε σε ευαίσθητους χιμπατζήδες με ενδορινική ενστάλαξη ιού CCA ιστικής καλλιέργειας. Στην παρούσα μελέτη, δύο ιοί (Long και Snyder), οι οποίοι ήταν παρόμοιοι ως προς την κυτταροπαθογόνο δράση και τις αντιγονικές ιδιότητες με τον ιό CCA, ανακτήθηκαν από βρέφη με σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού. Η ανάπτυξη αντισωμάτων έναντι του ιού Long κατά τη διάρκεια της ανάρρωσης αυτών των βρεφών επιβεβαίωσε ότι οι ιοί Long και Snyder προέρχονται από ανθρώπινες πηγές. Είναι σαφές, επομένως, ότι παράγοντες που δεν διαφέρουν από τον ιό CCA είναι ικανοί να προκαλέσουν ανθρώπινη λοίμωξη. Ωστόσο, αυτό δεν αποδεικνύει ότι οι ιοί Long και Snyder ήταν υπεύθυνοι για τις σχετικές ασθένειες σε αυτά τα βρέφη. Το πρόβλημα αυτό και ο ρόλος αυτής της ομάδας παραγόντων στις αναπνευστικές νόσους της βρεφικής ηλικίας θα εξεταστούν στη συνοδευτική ανακοίνωση (2).
Η πιο εντυπωσιακή ιδιότητα των ιών Long και Snyder ήταν η ικανότητά τους να παράγουν μεγάλες συγκυριακές περιοχές σε καλλιέργειες KB και ήπατος. Από τους ιούς που µολύνουν τον άνθρωπο µόνο οι ιοί της ιλαράς, της παρωτίτιδας και του CA έχουν αποδειχθεί προηγουµένως ότι παράγουν συγκυτιακές µεταβολές σε καλλιέργειες διαφόρων τύπων (7, 13, 14). Αντιγονικά οι ιοί αυτοί είναι διαφορετικοί από τους παράγοντες που αποµονώθηκαν στην παρούσα µελέτη. Επιπλέον, οι ιοί παρωτίτιδας και CA μπορούν να διακριθούν από την ικανότητά τους να συγκολλούν ανθρώπινα ερυθροκύτταρα και ερυθροκύτταρα κοτόπουλου. Ο ιός της ιλαράς προκαλεί συγκυριακές μεταβολές στις καλλιέργειες KB αλλά απαιτούνται τουλάχιστον 5 εβδομάδες για την πλήρη καταστροφή των κυττάρων (15) ενώ οι ιοί Long και Snyder καταστρέφουν το κυτταρικό φύλλο μέσα σε 3 έως 6 ημέρες.
Παρόµοια µε τους αδενοϊούς, ο ιός Long παράγει ένα αντιγόνο CF που διαφέρει από το µολυσµατικό σωµατίδιο. Ωστόσο, ο τύπος της κυτταροπαθογόνου επίδρασης που παράγεται σε καλλιέργειες KB, η ευαισθησία στον αιθέρα και η έλλειψη αντιγονικής σχέσης σε δοκιμές CF με ανθρώπινους ορούς διακρίνουν σαφώς τον ιό Long από την ομάδα των αδενοϊών.
ΠΕΡΙΛΗΨΗ
Δύο ιοί, οι οποίοι ήταν δυσδιάκριτοι από έναν παράγοντα που σχετίζεται με την κορίαση στους χιμπατζήδες (ιός CCA), ανακτήθηκαν από βρέφη με νόσο του κατώτερου αναπνευστικού. Οι παράγοντες που απομονώθηκαν σε αυτή τη μελέτη χαρακτηρίστηκαν από την εμφάνιση συγκυτιακού κυτταροπαθογόνου αποτελέσματος σε καλλιέργεια ιστού KB ή ανθρώπινου ήπατος και από την παραγωγή ενός αντιγόνου CF, το οποίο μπορούσε να διαχωριστεί από το μολυσματικό σωματίδιο με φυγοκέντρηση. Η διάμετρος του σωματιδίου εκτιμήθηκε σε 90 έως 130 χιλιοστόμετρα. Οι παράγοντες αυτοί δεν είχαν σχέση με την ομάδα των αδενοϊών ούτε με άλλους γνωστούς σήμερα ιούς που προκαλούν αναπνευστικές ασθένειες.
https://doi.org/10.1093/oxfordjournals.aje.a119901
Κατεβάστε το εδώ: https://viroliegyhome.files.wordpress.com/2022/12/chanock1957.pdf
Αυτό που πήραμε από την πρώτη δημοσίευση των Chanock et al. από το 1957 ήταν το συνηθισμένο παρασκεύασμα κυτταροκαλλιέργειας που προφανώς ήταν πολύ δύσκολο να δημιουργηθεί. Χρειάστηκαν πολλές κυτταρικές σειρές και διάφορα τεχνάσματα από τους ερευνητές για να προσπαθήσουν να πετύχουν το προκαθορισμένο κυτταροπαθογενετικό αποτέλεσμα που ήθελαν να δουν. Ακόμη και τότε, οι ερευνητές ήταν σε μεγάλο βαθμό ανεπιτυχείς με τις προσπάθειές τους και έπρεπε να βασιστούν σε έμμεσα μη ειδικά αποτελέσματα αντισωμάτων για να προσπαθήσουν να ισχυριστούν ότι ο "ιός" ήταν παρών και ότι σχετιζόταν με κάποιο τρόπο με τον "ιό" CCA που οι Morris et al. "ανακάλυψαν" σε χιμπατζήδες ένα χρόνο πριν. Είναι επομένως κατανοητό, δεδομένων των απίστευτα σαθρών στοιχείων που ελήφθησαν, γιατί οι Chanock et al. δήλωσαν ότι τα στοιχεία τους δεν αποδείκνυαν ότι οι "ιοί" Long και Snyder ήταν υπεύθυνοι για τις σχετικές ασθένειες στα βρέφη. Έτσι, άφησαν σε μια δεύτερη εργασία να τους παράσχει αυτά τα στοιχεία. Κατά ειρωνικό τρόπο, δεν έκανε κάτι τέτοιο.
Με τη δεύτερη εργασία των Chanock et al. από το 1957, θα δείτε ότι η "απόδειξη" που υποσχέθηκαν ήταν εξίσου φτωχή, αν όχι περισσότερο, από εκείνη που παρουσιάστηκε μέσα στην πρώτη εργασία. Παρέχω σχόλια και επισημάνσεις για τις σχετικές πληροφορίες, αλλά έχω επεξεργαστεί μεγάλο μέρος των άκυρων αποτελεσμάτων των αντισωμάτων. Αν επιθυμείτε να δείτε την προσπάθεια των ερευνητών να χρησιμοποιήσουν μια υποθετική οντότητα για να προσπαθήσουν να αποδείξουν μια άλλη, μπορείτε να κατεβάσετε το έγγραφο που συνδέεται.
Ανάρρωση από βρέφη με αναπνευστική νόσο ενός ιού που σχετίζεται με τον παράγοντα κορυζίας χιμπατζήδων (CCA). II. Επιδημιολογικές πτυχές της λοίμωξης σε βρέφη και μικρά παιδιά
Στην εισαγωγή, οι Chanock κ.ά. προσπαθούν να υποστηρίξουν ότι οι Morris κ.ά. είχαν ανακαλύψει έναν "ιό" σε χιμπατζήδες σε αιχμαλωσία, "βρίσκοντας" στοιχεία για έναν "ιό" σε 1 από τους 14 χιμπατζήδες. Ωστόσο, δεν μπόρεσαν να "απομονώσουν" τον ίδιο "ιό" από έναν άρρωστο εργαζόμενο εργαστηρίου. Ευτυχώς, οι ερευνητές μπόρεσαν να χρησιμοποιήσουν έμμεσα μη ειδικά αποτελέσματα αντισωμάτων για να ισχυριστούν ότι ο αόρατος "ιός" ήταν πραγματικά παρών, παρόλο που δεν μπορούσε να βρεθεί ούτε να παρατηρηθεί.
ΕΙΣΑΓΩΓΗ
"Οι Morris, Blount και Savage (1) μελέτησαν ένα ξέσπασμα κορυζας σε μια αποικία χιμπατζήδων που κρατούνταν υπό παρακολούθηση για 3 έως 24 εβδομάδες πριν από την εκδήλωση της ασθένειας. Ένας ιός (CCA) ανακτήθηκε από έναν από τους 14 προσβεβλημένους χιμπατζήδες και τα υπόλοιπα 13 ζώα ανέπτυξαν αντισώματα έναντι αυτού του ιού κατά τη διάρκεια της ανάρρωσης. Ένα άτομο που εργαζόταν με τους μολυσμένους χιμπατζήδες παρουσίασε στη συνέχεια λοίμωξη του αναπνευστικού συστήματος και, παρόλο που οι προσπάθειες απομόνωσης του ιού ήταν ανεπιτυχείς, παρατηρήθηκε αύξηση των αντισωμάτων για τον ιό CCA κατά τη διάρκεια της ανάρρωσης. Όταν ευαίσθητοι χιμπατζήδες εμβολιάστηκαν ενδορινικά με ιό CCA ιστικής καλλιέργειας, παρατηρήθηκε κορυζάδα μετά από περίοδο επώασης 3 ημερών. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν την πιθανότητα ότι ο CCA ήταν ένας ιός ανθρώπινης προέλευσης που προκάλεσε ένα ξέσπασμα ήπιας αναπνευστικής νόσου όταν εισήχθη σε έναν ευαίσθητο πληθυσμό χιμπατζήδων.
Σχετικά με τα δικά τους ευρήματα, οι Chanock et al. δήλωσαν ότι τα αποτελέσματα αντισωμάτων από παιδιά στα οποία είχαν ανακτηθεί "ιοί" τους οδήγησαν στο συμπέρασμα ότι οι αόρατοι "ιοί" τους δεν μπορούσαν να διακριθούν από τον "ιό" CCA των Morris et al. σε χιμπατζήδες. Ωστόσο, παραδέχθηκαν ότι τα αποτελέσματα δεν μπορούσαν να ερμηνευθούν ότι αυτοί οι "παράγοντες" ήταν η αιτία των ασθενειών στα βρέφη.
Κατά τη διάρκεια μιας μελέτης σε βρέφη με νόσο του κατώτερου αναπνευστικού (2) ανακτήθηκαν δύο παράγοντες (Long και Snyder) που δεν μπορούσαν να διακριθούν από τον ιό CCA. Τα βρέφη από τα οποία ανακτήθηκαν οι ιοί ανέπτυξαν αντισώματα κατά τη διάρκεια της ανάρρωσης. Από αυτά τα ευρήματα είναι σαφές ότι οι ιοί που είναι δυσδιάκριτοι από τον ιό CCA είναι ικανοί να μολύνουν τον άνθρωπο. Τα αποτελέσματα αυτά δεν μπορούν να ερμηνευθούν ότι οι παράγοντες αυτοί ήταν η αιτία των ασθενειών στα βρέφη, δεδομένου ότι η χρονική συσχέτιση της νόσου και της μόλυνσης με έναν παράγοντα είναι μόνο το πρώτο βήμα στην αλυσίδα των αποδείξεων που απαιτούνται για την αιτιολογική σημασία (3).
Παραδόξως, μελετήθηκαν μόνο τα βρέφη που θεωρήθηκε ότι είχαν σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού συστήματος. Τα παιδιά με ήπια αναπνευστική νόσο δεν μελετήθηκαν, καθώς τα συμπτώματα αυτά λέγεται ότι είναι κοινά και πιο δύσκολο να διαγνωστούν με ακρίβεια.
Στην παρούσα ανακοίνωση θα περιγραφούν προκαταρκτικές έρευνες οι οποίες αποσκοπούσαν στην κατανόηση της επιδημιολογίας και της παθογένειας για τα βρέφη της ομάδας παραγόντων CCA-Long-Snyder. Μελετήθηκαν βρέφη με σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού και μια ομάδα ελέγχου βρεφών χωρίς τέτοια νόσο. Οι ήπιες αναπνευστικές παθήσεις δεν μελετήθηκαν λόγω της συχνότητας με την οποία οι παθήσεις αυτές εμφανίζονται κατά τους χειμερινούς μήνες σε αυτή την ηλικιακή ομάδα (4) και δεδομένου ότι η κλινική διάγνωση είναι λιγότερο ακριβής από ό,τι στα βρέφη με σοβαρή νόσο.
ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ
Στην ενότητα "Μέθοδοι" φαίνεται ότι τα παιδιά που μελετήθηκαν ήταν αυτά με σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού και ότι οι έλεγχοι αποτελούνταν από βρέφη και παιδιά χωρίς αναπνευστική νόσο. Τα παιδιά με αναπνευστική νόσο διαγνώστηκαν με μη βακτηριακή πνευμονία, καθώς η νόσος τους λέγεται ότι δεν έμοιαζε με βακτηριακή λοίμωξη, παρόλο που τόσο η βακτηριακή όσο και η "ιογενής" πνευμονία έχουν την ίδια κλινική εικόνα. Οι έλεγχοι διέφεραν από τα περιστατικά αναπνευστικής νόσου στο ότι το ποσοστό των ατόμων που νοσηλεύτηκαν ήταν μικρότερο και ήταν, κατά μέσο όρο, μεγαλύτερης ηλικίας από τους ασθενείς με αναπνευστική νόσο.
Πληθυσμός της μελέτης. Ο πληθυσμός της μελέτης αποτελούνταν από βρέφη και παιδιά ηλικίας κάτω των 4 ετών με σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού και μια ομάδα ελέγχου βρεφών και μικρών παιδιών που δεν είχαν αναπνευστική νόσο κατά τη στιγμή που ελήφθησαν τα δείγματα για την απομόνωση του ιού. Τα άτομα προέρχονταν από χαμηλό κοινωνικοοικονομικό περιβάλλον.
Τα βρέφη και τα μικρά παιδιά ηλικίας έως 4 ετών που εισήχθησαν είτε στο Harriet Lane Home του Νοσοκομείου Johns Hopkins, Βαλτιμόρη, Md., είτε στο Παιδιατρικό Τμήμα των Νοσοκομείων της πόλης της Βαλτιμόρης με τη διάγνωση βρογχοπνευμονίας ή βρογχιολίτιδας αποτέλεσαν την ομάδα νοσοκομειακής αναπνευστικής νόσου. Οι ασθενείς ηλικίας έως 4 ετών με βρογχοπνευμονία που εξετάστηκαν στα εξωτερικά ιατρεία των ίδιων ιδρυμάτων αποτέλεσαν την αναπνευστική ομάδα των εξωτερικών ιατρείων. Η διάγνωση της βρογχοπνευμονίας έγινε όταν εμφανιζόταν ταχύπνοια, λεπτές υγρές αναθυμιάσεις και, στις περισσότερες περιπτώσεις, πνευμονική διήθηση. Η κλινική πορεία των ασθενών που επιλέχθηκαν για τη μελέτη αυτή δεν έμοιαζε με εκείνη της βακτηριακής πνευμονίας. Σε όλους τους ασθενείς του θαλάμου με πνευμονία και στην πλειονότητα των εξωτερικών ασθενών με πνευμονία ελήφθησαν ακτινογραφίες θώρακος. Η βρογχιολίτιδα διαγνώστηκε όταν παρατηρήθηκε ταχύπνοια, εκπνευστικός συριγμός, παράταση της εκπνοής και ενδείξεις εμφυσήματος. Επιπλέον, δεν ήταν ασυνήθιστη η εμφάνιση υγρών ρόγχων και ακτινογραφικών ενδείξεων πνευμονικής διήθησης σε βρέφη με βρογχιολίτιδα.
Οι μάρτυρες ήταν παιδιά με μη αναπνευστικές ασθένειες από τα εξωτερικά ιατρεία των νοσοκομείων Harriet Lane Home και Baltimore City και από την παιδιατρική πτέρυγα του τελευταίου νοσοκομείου. Οι ασθενείς με λοιμώδη νόσο δεν εισήχθησαν σε αυτόν τον θάλαμο.
Η μελέτη διήρκεσε από τον Οκτώβριο του 1956 έως τον Μάρτιο του 1957. Οι αναπνευστικοί ασθενείς και οι μάρτυρες κατανεμήθηκαν σε αυτό το διάστημα των 6 μηνών.
Για τη μελέτη των διαφόρων ομάδων χρησιμοποιήθηκε η ίδια διαδικασία. Κατά την εισαγωγή στο νοσοκομείο ή κατά την πρώτη επίσκεψη στην κλινική λαμβάνονταν ένα επίχρισμα λαιμού και ένα δείγμα αίματος. Έγινε προσπάθεια να ληφθεί ένα δεύτερο δείγμα ορού 4 εβδομάδες αργότερα. Σε πολλές περιπτώσεις δεν μπορούσε να εξασφαλιστεί δεύτερο δείγμα παρά μόνο μετά από διάστημα 6 έως 10 εβδομάδων και σε αρκετές περιπτώσεις 12 εβδομάδων.
Ο πίνακας 1 δείχνει τον αριθμό των παιδιών σε κάθε ομάδα, τη μέση ηλικία τους σε μήνες και τα μέσα διαστήματα μεταξύ των δειγμάτων ορού. Θα φανεί ότι οι έλεγχοι διέφεραν από τα περιστατικά αναπνευστικής νόσου στο ότι το ποσοστό των νοσηλευόμενων ατόμων ήταν μικρότερο. Οι έλεγχοι ήταν, κατά μέσο όρο, μεγαλύτεροι σε ηλικία από τους ασθενείς με αναπνευστική νόσο.
Εργαστηριακές διαδικασίες. Οι τεχνικές για την απομόνωση του ιού, τις δοκιμασίες πρόσδεσης συμπληρώματος (CF) και εξουδετέρωσης σε καλλιέργεια ιστού έχουν περιγραφεί (2)".
Περιέργως, ανακαλύπτουμε ότι ο "ιός" Long μπόρεσε να "απομονωθεί" μόνο από ένα βρέφος με βρογχοπνευμονία. Οι προσπάθειες "απομόνωσης" του "ιού" από 12 βρέφη με βρογχοπνευμονία, 28 βρέφη με πνευμονία και 90 βρέφη με βρογχιολίτιδα ήταν όλες ανεπιτυχείς. Επίσης, δεν μπόρεσαν να "απομονώσουν" τον "ιό" από 151 μάρτυρες. Όταν επιχείρησαν καλλιέργειες επιθηλίου ήπατος για τους ασθενείς με αναπνευστικό και τους μάρτυρες που εμφάνισαν αντισωματική απάντηση, όλα τα αποτελέσματα ήταν αρνητικά εκτός από το ένα βρέφος από το οποίο ανακτήθηκε ο "ιός". Η επίπτωση της "μόλυνσης" από τον "ιό", όπως προσδιορίστηκε από τις δοκιμές CP και εξουδετέρωσης, δεν διέφερε σημαντικά με την ομάδα ελέγχου. Αυτό θα πρέπει να δείχνει ότι τα αποτελέσματα των αντισωμάτων είναι εντελώς ανούσια.
"Σχέση του ιού Long με την πνευμονία και τη βρογχιολίτιδα της βρεφικής ηλικίας. Ο ιός Long απομονώθηκε μία φορά σε καλλιέργεια ιστού KB από το υγρό επιχρίσματος λαιμού ενός βρέφους κλινικής με βρογχοπνευμονία. Δώδεκα άλλες προσπάθειες απομόνωσης με επιχρίσματα λαιμού από κλινικά βρέφη και παιδιά με βρογχοπνευμονία ήταν ανεπιτυχείς, όπως και οι προσπάθειες απομόνωσης με δείγματα από 28 βρέφη με πνευμονία και 90 βρέφη με βρογχιολίτιδα που νοσηλεύτηκαν. Ο ιός Long δεν απομονώθηκε από τα επιχρίσματα λαιμού 151 ατόμων ελέγχου. Τα επιχρίσματα λαιμού των αναπνευστικών ασθενών και των ατόμων ελέγχου που εμφάνισαν αύξηση των αντισωμάτων έναντι του ιού Long εξετάστηκαν σε καλλιέργειες ηπατικού επιθηλίου με αρνητικά αποτελέσματα, εκτός από τον έναν ασθενή από τον οποίο απομονώθηκε ο ιός σε καλλιέργεια KB.
Στην ομάδα των βρεφών που νοσηλεύτηκαν με πνευμονία ή βρογχιολίτιδα η επίπτωση της λοίμωξης από τον ιό Long, όπως προσδιορίστηκε με τη μέθοδο ΚΠ (πίνακας 6) ή την τεχνική εξουδετέρωσης, δεν διέφερε σημαντικά από εκείνη της ομάδας ελέγχου. Η ομάδα ελέγχου δεν ήταν απολύτως ικανοποιητική, δεδομένου ότι η μέση ηλικία ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από τον μέσο όρο των δύο αναπνευστικών ομάδων (πίνακας 1). Ωστόσο, τα βρέφη ελέγχου των οποίων η ηλικία αντιστοιχούσε στην ηλικία των αναπνευστικών ασθενών παρουσίασαν την ίδια συχνότητα ανάπτυξης αντισωμάτων ΚΙ (3 από 12 (25 %)) με τα μεγαλύτερα σε ηλικία βρέφη ελέγχου (4 από 17 (24 %)). Είναι πιθανό ότι ορισμένες από τις αναπνευστικές ασθένειες που απαιτούσαν νοσηλεία στο νοσοκομείο σχετίζονταν με τον ιό Long, αλλά αυτό θα ήταν δύσκολο να διαπιστωθεί λόγω του υψηλού ποσοστού μόλυνσης στην ομάδα ελέγχου.
Η επίπτωση της λοίμωξης από τον ιό Long μεταξύ των εξωτερικών ασθενών με βρογχοπνευμονία και μεταξύ των εξωτερικών ασθενών ελέγχου παρουσιάζεται στον πίνακα 7. Η μέση ηλικία και το μέσο διάστημα μεταξύ των δειγμάτων ορού ήταν παρόμοια και στις δύο ομάδες (πίνακας 1).
Ενώ οι Chanock et al. προσπάθησαν να κάνουν μια σύνδεση μεταξύ του "ιού" τους και της βρογχοπνευμονίας μέσω των έμμεσων μη ειδικών αποτελεσμάτων αντισωμάτων, παραδέχθηκαν ότι το μικρό μέγεθος του δείγματος σήμαινε ότι το συμπέρασμα μπορούσε να είναι μόνο προσωρινό και ότι οποιαδήποτε συσχέτιση μεταξύ των δύο περιμένει μελλοντικές μελέτες.
Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι τα 13 άτομα με βρογχοπνευμονία ήταν κατανεμημένα στην 6μηνη περίοδο της μελέτης και ότι τα περιστατικά βρογχοπνευμονίας με αύξηση αντισωμάτων για τον ιό Long εμφανίστηκαν κατά τη διάρκεια κάθε μήνα εκτός από τον Δεκέμβριο. Το σημαντικά υψηλότερο ποσοστό μόλυνσης μεταξύ των εξωτερικών ασθενών με βρογχοπνευμονία υποδηλώνει ότι υπάρχει αιτιολογική συσχέτιση μεταξύ του ιού Long και ενός συγκεκριμένου τμήματος του συνδρόμου της βρογχοπνευμονίας. Ωστόσο, δεδομένου ότι ο αριθμός των εξωτερικών ασθενών με βρογχοπνευμονία ήταν μικρός (13 άτομα), τα όποια συμπεράσματα που προκύπτουν από τη μελέτη αυτή πρέπει να θεωρηθούν προσωρινά. Η σταθερή εδραίωση μιας αιτιολογικής σχέσης μεταξύ του ιού Long και της βρογχοπνευμονίας πρέπει να περιμένει μελλοντικές μελέτες.
Λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τους 13 ασθενείς της κλινικής με βρογχοπνευμονία δίνονται στον πίνακα 8. Η απομόνωση πνευμονιόκοκκου ή αιμολυτικού στρεπτόκοκκου Β από 3 από τις 10 καλλιέργειες μύτης και λαιμού δεν αποτελεί ασυνήθιστα υψηλό ποσοστό θετικών ευρημάτων κατά τους χειμερινούς μήνες, όπως κρίνεται από τα αποτελέσματα που παρουσίασε ο Babe (5). Η κλινική πορεία των 3 ασθενών από τους οποίους ανακτήθηκαν βακτηριακά παθογόνα ήταν παρόμοια με εκείνη των άλλων ασθενών με πνευμονία και δεν έμοιαζε με βακτηριακή νόσο.
ΣΥΖΗΤΗΣΗ
Στη συζήτηση, μπορούμε να δούμε πώς προσπαθούν να χρησιμοποιήσουν μη ειδικές αντιδράσεις αντισωμάτων για να ισχυριστούν έμμεσα την παρουσία και τη σχέση διαφόρων "ιών". Σε αυτή την περίπτωση, 41 βρέφη με νόσο και 16 βρέφη ελέγχου χωρίς νόσο είχαν κάποια μορφή αντίδρασης αντισωμάτων. Παρόλο που δεν μπόρεσαν να "απομονώσουν" τον "ιό", ισχυρίστηκαν ότι αυτά τα αποτελέσματα αντισωμάτων έδειξαν ότι οι "λοιμώξεις" ήταν συχνές. Συνέκριναν την αδυναμία τους να "απομονώσουν" έναν "ιό" με εκείνη των Morris et al. λες και αυτό σήμαινε κατά κάποιον τρόπο ότι και οι δύο ομάδες ερευνητών κατάφεραν να εντοπίσουν τον ίδιο "ιό", παρόλο που καμία από τις δύο ομάδες δεν μπόρεσε να "καλλιεργήσει" τον "ιό" τακτικά. Είναι ενδιαφέρον ότι οι Chanock et al. παραδέχθηκαν ότι οι αντιδράσεις των αντισωμάτων της ΚΙ υποτίθεται ότι υποδεικνύουν και μετρούν τη μόλυνση και στη συνέχεια προσπάθησαν να βρουν διάφορες εξηγήσεις για τους λόγους για τους οποίους τα αποτελέσματα των αντισωμάτων τους δεν ανταποκρίνονταν στις προσδοκίες τους. Δήλωσαν ότι δεν ήταν δυνατόν να προσδιοριστεί ποια από τις εναλλακτικές λύσεις που επινόησαν προσέφερε τη σωστή εξήγηση.
Η απομόνωση από βρέφη με νόσο του κατώτερου αναπνευστικού δύο ιών που δεν διέφεραν από τον ιό CCA έδειξε ότι οι παράγοντες αυτής της ομάδας είναι ικανοί να μολύνουν τον άνθρωπο (2). Πρόσθετη υποστήριξη για το συμπέρασμα αυτό αποτέλεσε η διαπίστωση ότι 41 βρέφη με νόσο του κατώτερου αναπνευστικού και 16 βρέφη ελέγχου χωρίς αναπνευστική νόσο ανέπτυξαν κατά τη διάρκεια αυτής της μελέτης αντισώματα CF, εξουδετερωτικά αντισώματα ή και τα δύο έναντι του ιού Long.
Η συχνή εμφάνιση της λοίμωξης σε σύγκριση με τη σπάνια απομόνωση του ιού υποδηλώνει ότι ο ιός Long μπορεί να ανακτηθεί από το λαιμό κατά τη διάρκεια ενός πολύ σύντομου χρονικού διαστήματος μετά τη μόλυνση. Ωστόσο, είναι πιθανό ότι πολλές από τις λοιμώξεις που διαγνώστηκαν με ορολογικές μεθόδους σε αυτή τη μελέτη συνέβησαν μετά τη λήψη του επιχρίσματος του λαιμού και κατά τη διάρκεια του διαστήματος μεταξύ της συλλογής των δειγμάτων ορού. Οι Morris, Blount και Savage (1) αντιμετώπισαν παρόμοια δυσκολία στην απομόνωση του ιού CCA από χιμπατζήδες με αναπνευστική νόσο. Στην επιζωοτία της κορυζας που µελέτησαν αυτοί οι ερευνητές, ο ιός ανακτήθηκε µόνο από έναν από τους 14 προσβεβληµένους χιµπατζήδες, 4 ηµέρες µετά τη διαπίστωση των πρώτων αναπνευστικών συµπτωµάτων.
Η απόκτηση εξουδετερωτικού αντισώματος στον ιό Long συνέβη πολύ νωρίς στη ζωή και με γρήγορο ρυθμό. Στον παρόντα πληθυσμό της μελέτης, το 77% των παιδιών ηλικίας 3 ετών και το 80% των παιδιών ηλικίας 4 ετών διέθεταν εξουδετερωτική δραστηριότητα στον ορό τους. Από αυτά τα ευρήματα θα περίμενε κανείς ότι η μόλυνση των μεγαλύτερων ατόμων θα συνέβαινε σπάνια. Ωστόσο, οι Morris, Blount και Savage (1) ανέφεραν ότι το 24 τοις εκατό των ατόμων της ηλικιακής ομάδας 10 έως 18 ετών διέθεταν αντίσωμα CF για τον ιό CCA. Παρατηρήσαμε παρόμοια συχνότητα εμφάνισης αντισωμάτων CF για τον ιό Long σε μια ομάδα 67 κρατουμένων (21 έως 29 ετών) από μια ομοσπονδιακή φυλακή στο Οχάιο.
Υποθέτοντας ότι τα αντισώματα CF είναι ένα μέτρο πρόσφατης ή επίμονης λοίμωξης, τα ευρήματα που μόλις περιγράφηκαν θα μπορούσαν να προκύψουν από: (α) την εμφάνιση επαναμόλυνσης κατά τη δεύτερη και τρίτη δεκαετία σε μια εποχή κατά την οποία τα επίπεδα εξουδετερωτικών αντισωμάτων έχουν μειωθεί κάτω από ένα ορισμένο κρίσιμο επίπεδο, (5) την εμφάνιση επίμονης λοίμωξης σε ένα ορισμένο ποσοστό ατόμων, (γ) διαφορές στη σύνθεση των διαφόρων πληθυσμών της μελέτης ή (δ) την εμφάνιση αντιγονικά συγγενών αλλά διαφορετικών παραγόντων που μοιράζονται ένα κοινό αντιγόνο CF με τον ιό Long. Προς το παρόν δεν είναι δυνατόν να προσδιοριστεί ποια από αυτές τις εναλλακτικές λύσεις προσφέρει τη σωστή εξήγηση".
Σε αυτή την επόμενη ενότητα, έχουμε μια αρκετά κραυγαλέα παραδοχή από τους Chanock et al. καθώς παραδέχονται ότι δεν μπόρεσαν να αποδείξουν συσχέτιση μεταξύ του "ιού" τους και της νόσου του κατώτερου αναπνευστικού στα βρέφη. Σήμερα, ο "RSV" θεωρείται η κύρια αιτία της νόσου του κατώτερου αναπνευστικού στα βρέφη, οπότε είναι αρκετά χαρακτηριστικό ότι δεν μπόρεσαν να αποδείξουν μια σχέση. Οι ερευνητές θεώρησαν ότι δεν μπόρεσαν να κάνουν μια σύνδεση λόγω του υψηλού ποσοστού "μόλυνσης" στην ομάδα ελέγχου. Παραδέχθηκαν επίσης ότι δεν μπορούσαν να κάνουν καμία οριστική δήλωση σχετικά με το παθογενετικό φάσμα του "ιού" στον άνθρωπο. Το μόνο που μπορούσαν να πουν ήταν ότι από τη μελέτη τους, στην πλειονότητα των βρεφών, η "μόλυνση" είχε ως αποτέλεσμα είτε ήπια ασθένεια είτε καμία διακριτή νόσο. Το μόνο που μπορούσαν να δηλώσουν οι ερευνητές ήταν ότι υποπτεύονταν μια συσχέτιση με ασθένειες του κατώτερου αναπνευστικού συστήματος στα βρέφη.
"Η συσχέτιση μεταξύ του ιού Long και της νόσου του κατώτερου αναπνευστικού σε νοσηλευόμενα βρέφη δεν ήταν αποδεδειγμένη. Ενδεχομένως, ωστόσο, μια τέτοια συσχέτιση να υπάρχει, αλλά να επισκιάστηκε από το υψηλό ποσοστό μόλυνσης στην ομάδα νοσοκομειακού ελέγχου. Το χαμηλότερο ποσοστό λοίμωξης μεταξύ της ομάδας ελέγχου της κλινικής ήταν σημαντικά μικρότερο από εκείνο των εξωτερικών ασθενών με βρογχοπνευμονία. Παρόλο που αυτή η παρατηρούμενη διαφορά φαίνεται να είναι σημαντική, ο αριθμός των ασθενών με βρογχοπνευμονία στην κλινική ήταν αρκετά μικρός (13 άτομα) ώστε τα συμπεράσματα που προκύπτουν από τα δεδομένα πρέπει να θεωρούνται προσωρινά.
Προς το παρόν δεν μπορεί να γίνει οριστική δήλωση σχετικά με το φάσμα της παθογένειας του ιού Long για τον άνθρωπο. Είναι δυνατόν να δηλωθεί ότι ο ιός αυτός ήταν διαδεδομένος μεταξύ των μικρών παιδιών στην κοινότητα αυτή κατά την περίοδο μελέτης και ότι στην πλειονότητα των βρεφών η μόλυνση είχε ως αποτέλεσμα είτε ήπια ασθένεια είτε καμία διακριτή νόσο.
Δεδομένου ότι (α) ο ιός CCA έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί ήπια νόσο του ανώτερου αναπνευστικού σε χιμπατζήδες, (β) οι ιοί Long και Snyder ανακτήθηκαν από το λαιμό βρεφών με νόσο του κατώτερου αναπνευστικού, (γ) οι ιοί Long και Snyder δεν διακρίνονται από τον ιό CCA, (δ) ο ιός Long είναι ύποπτος για συσχέτιση με βρογχοπνευμονία στη βρεφική ηλικία, και (ε) το εντυπωσιακό χαρακτηριστικό αυτών των ιών είναι η παραγωγή συγκυτιακών περιοχών σε καλλιέργεια ιστών, προτείνεται να ομαδοποιηθούν αυτοί οι παράγοντες και να ονομαστεί "αναπνευστικός συγκυτιακός" (RS) ιός μέχρι να κατανοηθεί καλύτερα η επιδημιολογία και η παθογένειά τους.
ΠΕΡΙΛΗΨΗ
Στην περίληψη, οι Chanock et al. θέλησαν να μας υπενθυμίσουν ότι η σαθρή υπόθεσή τους στηρίχθηκε σε στοιχεία που βασίστηκαν στην "ανάκτηση" ενός "ιού" από ένα βρέφος με βρογχοπνευμονία και ότι δεν μπόρεσε να αποδειχθεί συσχέτιση του Long "ιού" με σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού σε νοσηλευόμενους ασθενείς. Με άλλα λόγια, δεν είχαν τίποτα.
Πραγματοποιήθηκε μια μελέτη για τη διαλεύκανση της επιδημιολογίας ενός παράγοντα (ιός Long), ο οποίος ανακτήθηκε από ένα βρέφος με βρογχοπνευμονία και αποδείχθηκε ότι δεν διαφέρει από τον παράγοντα της κορυζίας των χιμπατζήδων (CCA). Διαπιστώθηκε ότι η δοκιμασία εξουδετέρωσης είναι δύο φορές πιο ευαίσθητη από την τεχνική πρόσδεσης του συμπληρώματος στην ορολογική διάγνωση της λοίμωξης σε βρέφη και μικρά παιδιά. Στον παρόντα πληθυσμό της μελέτης, το 80 % των παιδιών ηλικίας 4 ετών διέθεταν στον ορό τους εξουδετερωτική δραστηριότητα για τον ιό Long. Επτά τοις εκατό των μη νοσοκομειακών βρεφών και παιδιών ελέγχου, χωρίς εμφανή αναπνευστική νόσο κατά τη στιγμή της αρχικής αιμορραγίας, ανέπτυξαν αντίσωμα για τον ιό Long κατά τη διάρκεια ενός μέσου διαστήματος 6 εβδομάδων κατά τους χειμερινούς μήνες. Το ποσοστό μόλυνσης μεταξύ μιας παρόμοιας ομάδας ελέγχου που νοσηλεύτηκε σε θάλαμο που δεν δέχθηκε ασθενείς με λοιμώδη νόσο ήταν 6 φορές μεγαλύτερο από ό,τι μεταξύ των εξωτερικών ασθενών ελέγχου του ίδιου νοσοκομείου.
Δεν μπόρεσε να αποδειχθεί συσχέτιση του ιού Long με σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού σε νοσηλευόμενους ασθενείς, πιθανώς λόγω του υψηλού ποσοστού μόλυνσης που σημειώθηκε στην ομάδα ελέγχου του θαλάμου. Τα δεδομένα υπέδειξαν συσχέτιση μεταξύ του ιού Long και της βρογχοπνευμονίας που εμφανίζεται σε εξωτερικούς ασθενείς. Ωστόσο, ο αριθμός των εξωτερικών ασθενών με βρογχοπνευμονία ήταν μικρός (13 άτομα) και συνεπώς τα συμπεράσματα που προκύπτουν από αυτά τα δεδομένα πρέπει να θεωρούνται προσωρινά.
Προτείνεται οι παράγοντες που απομονώθηκαν στην παρούσα μελέτη και ο ιός CCA να ομαδοποιηθούν και να ονομαστεί "αναπνευστικός συγκυτιακός" (RS) ιός".
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/13478579/
chanock1957-1Download
Συνοπτικά:
Ο "RSV", το "Covid" και η "γρίπη" έχουν συμπτώματα που μοιάζουν, γεγονός που μπορεί να κάνει δύσκολη τη διάκρισή τους
Οι τρεις "ιοί" λέγεται ότι μοιάζουν περισσότερο μεταξύ τους παρά διαφέρουν ως προς τα συμπτώματά τους
Η απουσία ενός από τα συμπτώματα δεν σημαίνει ότι ο ασθενής δεν έχει έναν συγκεκριμένο "ιό" και ο μόνος τρόπος για να είστε σίγουροι είναι να υποβληθείτε σε εξετάσεις
Εάν κάποιος έχει γενικά συμπτώματα, όπως πυρετός, βήχας, ρινική καταρροή, δεν υπάρχει πραγματικός τρόπος να διακρίνει κανείς ποιο είναι ποιο χωρίς εξέταση
Το CDC επιβεβαίωσε ότι τα κλινικά συμπτώματα του "RSV" είναι μη ειδικά και μπορεί να επικαλύπτονται με άλλες "ιογενείς" λοιμώξεις του αναπνευστικού, καθώς και με ορισμένες βακτηριακές λοιμώξεις
Ο "RSV" ανακαλύφθηκε το 1956, αλλά αρχικά δεν συσχετίστηκε με αναπνευστική νόσο μεταξύ βρεφών
Ο Morris και οι συνεργάτες του "απομόνωσαν" έναν νέο "ιό" από χιμπατζήδες που αρχικά ονομάστηκε παράγοντας coryza χιμπατζήδων (CCA)
Στη συνέχεια, ο Chanock και οι συνεργάτες του "επιβεβαίωσαν" ότι ο παράγοντας προκαλούσε αναπνευστική νόσο στον άνθρωπο όταν έλαβαν "απομονωμένα" δείγματα από δύο παιδιά
Οι Morris et al. δήλωσαν ότι η εργασία περιγράφει την "απομόνωση" ενός "ιού" με προφανή αιτιολογική σημασία (
που φαίνεται να είναι πραγματικός ή αληθινός, αλλά όχι απαραίτητα) στην επιζωοτίαθεώρησαν ότι είχαν αποδείξει μια αιτιολογική συσχέτιση μεταξύ του παράγοντα της κορυζας των χιμπαντζήδων και της αναπνευστικής νόσου σε έναν μόνο εργαζόμενο εργαστηρίου
Ο Morris παρουσίασε ορολογικά δεδομένα που υποδηλώνουν ότι ένας αριθμός ανθρώπων παρουσίασε λοίμωξη από τον "ιό" της κορυζας του χιμπατζή ή από έναν παράγοντα που σχετίζεται στενά με αυτόν (
πάει περίπατο κάθε ισχυρισμός εξειδίκευσης)Τα επιχρίσματα του λαιμού από 14 από 20 νεαρούς πιθήκους με coryza (φλεγμονή του βλεννογόνου) παρείχαν το υλικό που χρησιμοποιήθηκε για μελέτες "απομόνωσης του ιού".
Μια άλλη ομάδα κάπως μεγαλύτερων σε ηλικία χιμπατζήδων χρησιμοποιήθηκε για τη μελέτη της πειραματικής μεταδοτικότητας της κορυζίας και τα 6 ζώα αυτής της ομάδας είχαν προηγουμένως εμβολιαστεί με υλικό που εικάζεται ότι περιείχε τον "ιό" της ανθρώπινης λοιμώδους ηπατίτιδας (
έτσι ακυρώθηκαν ως έγκυρος έλεγχος).Καλλιέργειες ιστών επιθηλιοειδών κυττάρων που προέρχονται από ανθρώπινο ήπαρ αναπτύχθηκαν σε κυλινδρικούς σωλήνες σε θρεπτικό μέσο που αποτελούνταν από 8 μέρη βασικού μέσου Eagle, 2 μέρη αδρανοποιημένου ορού αλόγου και 0,2 μέρη L-γλουταμίνης μαζί με πενικιλλίνη (100 μονάδες/ml) και στρεπτομυκίνη (20 ug/ml) που προστέθηκαν για τον έλεγχο τυχαίων βακτηριακών προσμίξεων.
Ένα επίχρισμα λαιμού από έναν χιμπατζή (Sue) που εμπλέκεται στην επιζωοτία πλύθηκε σε 2 ml θρεπτικού υγρού καλλιέργειας ιστών που περιείχε αντιβιοτικά
Μετά από 4 ημέρες επώασης το αρχικό θρεπτικό υλικό των κυττάρων αντικαταστάθηκε με φρέσκο θρεπτικό υλικό/αντιβιοτικά
4 ημέρες αργότερα, παρατηρήθηκε η κυτταροπαθογόνος δράση καθώς το κύτταρο πέθανε και υποστηρίχθηκε ότι "απομονώθηκε" ένας "ιός"
Παρόμοιες προσπάθειες "απομόνωσης", οι οποίες έγιναν με υλικά που ελήφθησαν από άλλους 13 άρρωστους χιμπατζήδες, έδωσαν αρνητικά αποτελέσματα (
δηλαδή μπόρεσαν να "απομονώσουν" τον "ιό" μόνο από 1 από τους 14 πιθήκους)Από το ένα δείγμα καλλιέργειας παρατηρήθηκε CPE μετά από 8 ημέρες και στην εμβολιασμένη καλλιέργεια παρατηρήθηκαν σωματίδια που μοιάζουν με εγκλείσματα (
δηλαδή συσσωματώματα σωματιδίων "ιού" ή πρωτεϊνών που προκαλούνται από "ιούς" ή ειδικές δομές χαρακτηριστικές της μόλυνσης από "ιούς" είτε στο κυτταρόπλασμα είτε στον πυρήνα)Ωστόσο, παρόμοια σωμάτια που μοιάζουν με εγκλείσματα καταδείχθηκαν σε μη εμβολιασμένα κύτταρα, που καλλιεργήθηκαν σε αδρανοποιημένο ορό αλόγου
Οι ερευνητές δεν γνώριζαν τη σημασία των δομών που έμοιαζαν με εγκλείσματα και βρέθηκαν σε μολυσμένα και μη μολυσμένα κύτταρα και ότι τίποτα δεν μπορούσε να δηλωθεί με βεβαιότητα
Με άλλα λόγια, βρήκαν ακριβώς τις ίδιες "ιϊκές" δομές στις μη εμβολιασμένες καλλιέργειες ελέγχου που παρατηρήθηκαν στη μία εμβολιασμένη καλλιέργεια αποδεικνύοντας έτσι ότι το αποτέλεσμα αυτό δεν εξαρτιόταν από την παρουσία ενός φανταστικού "ιού"Με εξαίρεση ένα μόνο ινδικό χοιρίδιο που ανέπτυξε επίμονο πυρετό από την 3η ημέρα, κανένα από τα εμβολιασμένα ζώα ή τα εμβρυοποιημένα αυγά, εκτός από τους χιμπατζήδες, δεν ανέπτυξε σημάδια ασθένειας κατά τη διάρκεια περιόδων παρατήρησης που κυμαίνονταν έως και 28 ημέρες
Η αιτιολογία του πυρετού στο ινδικό χοιρίδιο εντοπίστηκε τελικά σε βακτηριακή λοίμωξη.
Τα κύτταρα των νεφρών των πιθήκων υπέστησαν πλήρη εκφυλισμό 8 ημέρες μετά τη μόλυνση με CCA, αλλά η κυτταροπαθογόνος επίδραση που επιτεύχθηκε ήταν δύσκολο να ερμηνευθεί λόγω της παρουσίας στις καλλιέργειες τυχαίων "ιών" πιθήκων.
Η CCA βρέθηκε να σχετίζεται µε την επιζωοτική ασθένεια των χιµπατζήδων στο παράρτηµα Forest Glen του WRAIR µε τη χρήση ορολογικών τεχνικών.
Τέσσερα άλλα ζώα που δεν έπασχαν από κλινική κορίαση παρήγαγαν ομοίως αντισώματα, επομένως, πιθανώς υπέστησαν μη αναγνωρισμένη μόλυνση
Τα υπόλοιπα 2 ζώα προφανώς διέφυγαν της μόλυνσης- ούτε υπέστησαν κλινική νόσο ούτε ανέπτυξαν αντίσωμα CCA CF
Τρεις πίθηκοι εμβολιάστηκαν ενδορινικά με τη σούπα του "ιού" και τρεις ημέρες αργότερα, 2 από τους 3 χιμπατζήδες που έλαβαν CCA εμφάνισαν αναπνευστικές ασθένειες που χαρακτηρίζονταν από φτέρνισμα, βήχα και στη συνέχεια βλεννοπυώδη ρινική έκκριση
Δύο από τους 3 χιμπατζήδες ελέγχου που στεγάστηκαν με ζώα που είχαν εμβολιαστεί με CCA εμφάνισαν επίσης νόσο μετά τη λήψη των μη μολυσματικών κυτταρικών καλλιεργειών
Με άλλα λόγια, δεν ήταν απαραίτητος κανένας "ιός" για την πειραματική αναδημιουργία αναπνευστικής νόσου με τη χρήση είτε "μολυσματικών" είτε "μη μολυσματικών" τοξικών κυτταροκαλλιεργειών που εγχύθηκαν απευθείας στις ρινικές κοιλότητες των πιθήκωνΑπό καθέναν από τους 4 χιμπατζήδες που εμφάνισαν εμφανή αναπνευστική νόσο, δηλαδή 2 πειραματόζωα και 2 ζώα ελέγχου, ανακτήθηκε ένας "παράγοντας" κυτταροπαθογόνου για τα ηπατικά κύτταρα από τα επιχρίσματα λαιμού που ελήφθησαν στις 8 Φεβρουαρίου.
Επιπλέον, ένας κυτταροπαθογόνος παράγοντας ανακτήθηκε στις 15 Φεβρουαρίου από υλικά του λαιμού του τρίτου χιμπατζή που έλαβε μη μολυσματικά υλικά.
Έτσι, παρατηρήθηκε η ίδια κυτταροπαθητικη επίδραση (ΚΠΕ-CPE) στις κυτταροκαλλιέργειες που παρασκευάστηκαν από τα 3 "μη μολυσμένα" ζώα ελέγχου με αυτό που παρατηρήθηκε στα 2 "μολυσμένα" ζώα, γεγονός που αποδεικνύει για άλλη μια φορά ότι δεν είναι απαραίτητος ο "ιός" για να παραχθεί αυτό το αποτέλεσμαΗ µοναδική προσπάθεια ανάκτησης ενός κυτταροπαθογόνου "παράγοντα" από πλύσεις λαιµού εργαζοµένου εργαστηρίου που παρουσίασε αναπνευστικά συµπτώµατα δεν ήταν επιτυχής.
Έτσι, τα έμμεσα μη-ειδικά ορολογικά ευρήματα θεωρήθηκαν ως πιθανή απόδειξη ότι το CCA είχε αιτιολογική σημασία στην ασθένεια του ασθενούς
Ζευγάρια ορών από ομάδες ασθενών με κοινό κρυολόγημα, βρογχίτιδα, θετική συγκολλητίνη του κρυολογήματος πρωτοπαθή άτυπη πνευμονία και λοίμωξη RI-APC-ARD (3 ζεύγη σε κάθε κατηγορία) εξετάστηκαν για αντισώματα δέσμευσης του συμπληρώματος έναντι CCA
Κανένας από τους ασθενείς δεν εμφάνισε σημαντική αύξηση των αντισωμάτων CCA, ωστόσο ορισμένοι ασθενείς είχαν καθ' όλη τη διάρκεια της ασθένειάς τους σταθερές ποσότητες αντισωμάτων CCA με τίτλους που κυμαίνονταν έως και 1:80.
Με άλλα λόγια, τα αντισώματα που ισχυρίζονται ότι είναι ειδικά για το "CCA" βρέθηκαν σε ασθενείς που δεν λέγεται ότι έπασχαν από "CCA".
Κατά τη διάρκεια των ερευνών των Chanock et al., ανακτήθηκαν δύο παρόμοιοι "ιοί", οι οποίοι, όπως ισχυρίστηκαν, αποδείχθηκαν ότι δεν διέφεραν από έναν παράγοντα που σχετίζεται με ένα ξέσπασμα κορυζας σε χιμπατζήδες (CCA)
Το στέλεχος KB του ανθρώπινου επιδερμοειδούς καρκινώματος αναπτύχθηκε στο χημικά καθορισμένο μέσο Eagle που περιείχε είτε 10 τοις εκατό φυσιολογικό αδρανοποιημένο ανθρώπινο ή ιπποδύναμο ορό
Πριν από τη χρήση, οι καλλιέργειες πλύθηκαν 3 φορές με διάλυμα Hanks και διατηρήθηκαν σε μέσο αποτελούμενο από μέσο Eagle με 2 τοις εκατό αδρανοποιημένο ορό κοτόπουλου
Το στέλεχος Chang του ανθρώπινου ηπατικού επιθηλίου αναπτύχθηκε σε μέσο Eagle με 20 τοις εκατό αδρανοποιημένο ορό αλόγου και διατηρήθηκε σε μέσο Eagle με 4 τοις εκατό αδρανοποιημένο ορό αλόγου
Το μέσο συντήρησης για τις καλλιέργειες KB και ήπατος άλλαζε κάθε 3 έως 4 ημέρες
Οι καλλιέργειες ανθρώπινου αμνίου παρασκευάστηκαν σύμφωνα με τη μέθοδο των Takemoto και Lerner με μέσο συντήρησης για τις καλλιέργειες αυτές που αποτελούνταν από μέσο 199 με 4 τοις εκατό αδρανοποιημένο ορό αλόγου.
Κυτταροκαλιέργειες με επιθηλιακό νεφρό πιθήκου παρασκευάστηκαν και συντηρήθηκαν σε Medium 199 ενώ προστέθηκε 2 τοις εκατό αδρανοποιημένος ορός μοσχαριού για την ανάπτυξη
Τα επιχρίσματα λαιμού από βρέφη με αναπνευστική νόσο και βρέφη με μη αναπνευστική νόσο εμβαπτίστηκαν σε 5 ml διαλύματος Hanks που περιείχε 2.000 μονάδες πενικιλλίνης, 2.000 μικρογραμμάρια στρεπτομυκίνης και 150 μονάδες μυκοστατίνης ανά ml.
Η διάµετρος των σωµατιδίων του "ιού" εκτιµήθηκε µε τροποποίηση της µεθόδου των Pardee και Schwerdt (
καθώς δεν παρατήρησαν ποτέ σωµατίδια "ιού").Η σταθερά φυγοκέντρησης (Κ) προσδιορίστηκε πειραματικά με "καθαρισμένο" "πολιοϊό" τύπου 1 του οποίου η πυκνότητα και η διάμετρος των σωματιδίων λέγεται ότι είναι γνωστές (
αυτό είναι περίεργο καθώς ο "πολιοϊός" δεν καθαρίστηκε ποτέ ούτε απομονώθηκε....)Για τη δημιουργία αντιορού, πειραματόζωα ανοσοποιήθηκαν με 3 εβδομαδιαίους ενδοπεριτοναϊκούς εμβολιασμούς 1 ml μολυσμένου υγρού καλλιέργειας ιστού, ενώ στα κουνέλια χορηγήθηκαν 3 εβδομαδιαίοι ενδοφλέβιοι εμβολιασμοί 1 ml ο καθένας και ακολούθησαν 2 εβδομαδιαίοι ενδομυϊκοί εμβολιασμοί 1 ml μολυσμένου υγρού καλλιέργειας σε συνδυασμό με 2 ml μείγματος Mycobacterium, butyricum, παραφινέλαιο και arlacel
Ένας ασυνήθιστος κυτταροπαθογόνος "παράγοντας" ανακτήθηκε σε καλλιέργεια KB από το επίχρισμα του λαιμού ενός από τους 41 ασθενείς με βρογχοπνευμονία (ασθενής Long) και από ένα από τα 18 άτομα με λαρυγγοτραχειοβρογχίτιδα (ασθενής Snyder)
Οι προσπάθειες ανάκτησης αυτών των παραγόντων μετά από εμβολιασμό υγρού από επίχρισμα λαιμού σε καλλιέργειες νεφρού πιθήκου και ανθρώπινου αμνίου ήταν ανεπιτυχείς
Με άλλα λόγια, μπόρεσαν να βρουν τον "ιό" μόνο σε 2 από τους 59 ασθενείς που έπασχαν από τα ίδια συμπτώματα της νόσου και μπόρεσαν να τον καλλιεργήσουν μόνο σε καλλιέργειες ΚΒ και ήπατος αλλά όχι σε καλλιέργειες νεφρών πιθήκου ούτε σε καλλιέργειες ανθρώπινων αμνίωνΤο χρονικό διάστημα πριν παρατηρηθούν κυτταροπαθογενετικά αποτελέσματα μετά τον εμβολιασμό του Long "ιού" μειώθηκε κατά τη διάρκεια της δεύτερης και της τρίτης διέλευσης KB (
δεν αποτελεί έκπληξη, καθώς η σειριακή διέλευση επιταχύνει τον κυτταρικό θάνατο καθώς η καλλιέργεια διαταράσσεται και ανανεώνονται οι τοξικές χημικές ουσίες)ΚΠΕ- CPE μπορούσε να παρατηρηθεί μόνο σε καλλιέργειες ανθρώπινου αμνίου μετά την προσθήκη του Long "ιού" που "απομονώθηκε" πρώτα σε καλλιέργειες KB, αν και πολύ πιο αργά και ατελώς
Στα κύτταρα KB σημειώθηκε εκφυλισμός στρογγυλών κυττάρων που δεν παρατηρήθηκε στις καλλιέργειες ήπατος και αμνίων.
Οι κυτταροπαθογενετικές αλλαγές παρατηρήθηκαν αρχικά ως μικρές περιγεγραμμένες συγκυτιακές περιοχές οι οποίες ήταν τυχαία κατανεμημένες και οι οποίες διευρύνθηκαν σε διάστημα 24 ωρών, οπότε έκαναν την εμφάνισή τους πολυάριθμες άλλες συγκυτιακές περιοχές (εξ’ ου και η ονομασία του "ιού")
Το μέγεθος των σωματιδίων προεκτάθηκε (
δηλαδή η ενέργεια της εκτίμησης ή του συμπεράσματος κάποιου πράγματος υποθέτοντας ότι οι υπάρχουσες τάσεις θα συνεχιστούν ή ότι μια τρέχουσα μέθοδος θα παραμείνει εφαρμόσιμη) χρησιμοποιώντας φυγοκέντρηση και διαλύματα διαβάθμισης σακχαρόζης χωρίς καμία οπτική ένδειξη των σωματιδίων που υποτίθεται ότι μετρούσανΟι Chanock et al. δήλωσαν ότι θα πρέπει να σημειωθεί ότι η μέθοδος που χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό του μεγέθους παρείχε απλώς μια πρόχειρη εκτίμηση που απαιτούσε επιβεβαίωση με πιο εκλεπτυσμένες μεθόδους
Οι προσπάθειες να αποδειχθεί μια αιμοσυγκολλητίνη για τα ερυθροκύτταρα "Ο" του κοτόπουλου ή του ανθρώπου ήταν ανεπιτυχείς.
Ο πολλαπλασιασμός του ιού Long "virus" δεν μπόρεσε να αποδειχθεί όταν εμβρυακά αυγά 9 ημερών εμβολιάστηκαν με 10.000 TCD50 στον αμνιακό σάκο και επωάστηκαν για 6 ημέρες.
Ο "ιός Long" δεν ήταν επίσης παθογόνος για ποντίκια ηλικίας 1 ημέρας με ενδοεγκεφαλική ή ενδοπεριτοναϊκή οδό
Οι Chanock et al. προσπάθησαν να αποδείξουν ότι ο "ιός" Long/Snyder ήταν ο ίδιος με τον CCA των Morris et al. μέσω έμμεσων μοτίβων CPE και αποτελεσμάτων αντισωμάτων και βασίστηκαν κυρίως σε αναξιόπιστα αποτελέσματα αντισωμάτων για να ισχυριστούν ότι δεν σχετίζονται με άλλους "ιούς"
Στη συζήτηση, οι Chanock et al. άλλαξαν την περιγραφή των CPE και των αντιγονικών ιδιοτήτων που παρατηρήθηκαν μεταξύ του "ιού" τους και του CCA ως παρόμοιες αντί της προηγούμενης περιγραφής ως ταυτόσημες
Ενώ στη συνέχεια ισχυρίστηκαν ότι οι παράγοντες ήταν δυσδιάκριτοι από τον "ιό" CCA και ήταν ικανοί να προκαλέσουν ανθρώπινη λοίμωξη, παραδέχθηκαν ότι αυτό δεν αποδείκνυε ότι οι "ιοί" των Long και Snyder ήταν υπεύθυνοι για τις σχετικές ασθένειες σε αυτά τα βρέφη
Από τους "ιούς" που μολύνουν τον άνθρωπο μόνο η "ιλαρά", η "παρωτίτιδα" και οι "ιοί CA" είχαν προηγουμένως αποδειχθεί ότι προκαλούν συγκυριακές μεταβολές σε καλλιέργειες διαφόρων τύπων δείχνοντας έτσι ότι το φαινόμενο αυτό δεν είναι ειδικό για τον "RSV" και η μόνη διαφορά μεταξύ των "ιών" είναι τα αναξιόπιστα ορολογικά αποτελέσματα
Οι Chanock et al. ισχυρίστηκαν ότι οι Morris et al. ανέκτησαν έναν "ιό" (CCA) από έναν από τους 14 προσβεβλημένους χιμπατζήδες.
Δήλωσαν ότι ο "ιός" συνδέθηκε με έναν άρρωστο εργαζόμενο εργαστηρίου, παρόλο που οι προσπάθειες απομόνωσης του "ιού" ήταν ανεπιτυχείς
Δήλωσαν ότι τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν την πιθανότητα ότι ο CCA ήταν ένας "ιός" ανθρώπινης προέλευσης που προκάλεσε μια επιδημία ήπιας αναπνευστικής νόσου όταν εισήχθη σε έναν ευαίσθητο πληθυσμό χιμπατζήδων.
Μελετήθηκαν μόνο βρέφη με σοβαρή νόσο του κατώτερου αναπνευστικού και μια ομάδα ελέγχου βρεφών χωρίς τέτοια νόσο, καθώς οι ήπιες αναπνευστικές νόσοι δεν λήφθηκαν υπόψη λόγω της συχνότητας με την οποία οι νόσοι αυτές εμφανίζονται κατά τους χειμερινούς μήνες σε αυτή την ηλικιακή ομάδα και δεδομένου ότι η κλινική διάγνωση είναι λιγότερο ακριβής από ό,τι σε βρέφη με σοβαρή νόσο
Λάβετε υπόψη ότι οι ερευνητές μελετούσαν τις ασθένειες του κατώτερου αναπνευστικού με τον πρόσφατα ανακαλυφθέντα "ιό" τους, καθώς αυτό θα είναι σημαντικό αργότεραΟι έλεγχοι διέφεραν από τα περιστατικά αναπνευστικής νόσου στο ότι το ποσοστό των ατόμων που νοσηλεύτηκαν σε νοσοκομείο ήταν μικρότερο και ήταν, κατά μέσο όρο, μεγαλύτερης ηλικίας από τους ασθενείς με αναπνευστική νόσο
Ο Long"ιός" "απομονώθηκε" μία φορά σε καλλιέργεια ιστού KB από το υγρό επιχρίσματος λαιμού ενός βρέφους κλινικής με βρογχοπνευμονία
Ωστόσο, δώδεκα άλλες προσπάθειες "απομόνωσης" με επιχρίσματα λαιμού από κλινικά βρέφη και παιδιά με βρογχοπνευμονία ήταν ανεπιτυχείς, όπως και οι προσπάθειες "απομόνωσης" με δείγματα από 28 βρέφη με πνευμονία και 90 βρέφη με βρογχιολίτιδα που νοσηλεύονταν στο νοσοκομείο
Τα επιχρίσματα του λαιμού των αναπνευστικών ασθενών και των ατόμων ελέγχου που εμφάνισαν αύξηση των αντισωμάτων έναντι του "ιού" Long εξετάστηκαν σε καλλιέργειες ηπατικού επιθηλίου με αρνητικά αποτελέσματα, εκτός από τον έναν ασθενή από τον οποίο "απομονώθηκε" ο "ιός" σε καλλιέργεια KB
Η επίπτωση της "μόλυνσης" με τον Long "ιό", όπως προσδιορίστηκε με την ΚΠ ή την τεχνική εξουδετέρωσης, δεν διέφερε σημαντικά από εκείνη της ομάδας ελέγχου
Οι ερευνητές θεώρησαν ότι ήταν πιθανό ορισμένες από τις αναπνευστικές ασθένειες που απαιτούσαν νοσηλεία να σχετίζονται με τον "ιό" Long, αλλά αυτό ήταν δύσκολο να διαπιστωθεί λόγω του υψηλού ποσοστού μόλυνσης στην ομάδα ελέγχου
Θεώρησαν ότι το σημαντικά υψηλότερο ποσοστό μόλυνσης μεταξύ των εξωτερικών ασθενών με βρογχοπνευμονία υποδηλώνει ότι υπήρχε αιτιολογική συσχέτιση μεταξύ του Long "ιού" και ενός συγκεκριμένου τμήματος του συνδρόμου της βρογχοπνευμονίας
Ωστόσο, παραδέχθηκαν ότι, δεδομένου ότι ο αριθμός των εξωτερικών ασθενών με βρογχοπνευμονία ήταν μικρός (13 άτομα), τα όποια συμπεράσματα εξήχθησαν από τη μελέτη αυτή πρέπει να θεωρηθούν ως προσωρινής φύσεως
Η σταθερή εδραίωση μιας αιτιολογικής συσχέτισης μεταξύ του Long "ιού" και της βρογχοπνευμονίας απαιτούσε μελλοντικές μελέτες
Πνευμονιόκοκκος ή αιμολυτικός στρεπτόκοκκος Β απομονώθηκε από 3 από τις 10 καλλιέργειες μύτης και λαιμού
Η κλινική πορεία των 3 ασθενών από τους οποίους ανακτήθηκαν βακτηριακά παθογόνα ήταν παρόμοια με εκείνη των άλλων ασθενών με πνευμονία και δεν έμοιαζε με βακτηριακή νόσο
Ποια ακριβώς ήταν η διαφορά μεταξύ μιας βακτηριακής πνευμονίας και μιας "ιογενούς" πνευμονίας δεν καθορίστηκε και πιθανώς για καλό λόγο, καθώςαναφέρεταιότι η διάκριση μεταξύ "ιογενούς" και βακτηριακής περίπτωσης μπορεί να είναι δύσκολη, καθώς και οι δύο μοιράζονται παρόμοια συμπτώματα και βιοδείκτες.Οι ερευνητές επιχείρησαν να ισχυριστούν ότι τα αποτελέσματα των αντισωμάτων έδειξαν την παρουσία και τη σχέση του "ιού" τους με την CCA όταν 41 βρέφη με νόσο του κατώτερου αναπνευστικού και 16 βρέφη ελέγχου χωρίς αναπνευστική νόσο ανέπτυξαν αντίσωμα CF, εξουδετερωτικό αντίσωμα ή και τα δύο
Η συχνή εμφάνιση της λοίμωξης σε σύγκριση με τη σπάνια "απομόνωση" του "ιού" τους υπέδειξε ότι ο μακρύς "ιός" ήταν ανακτήσιμος από το λαιμό κατά τη διάρκεια ενός πολύ σύντομου διαστήματος μετά τη μόλυνση
Επανέλαβαν ότι οι Morris, Blount και Savage αντιμετώπισαν παρόμοια δυσκολία στην "απομόνωση του ιού CCA" από χιμπατζήδες με αναπνευστική ασθένεια
Οι Chanock et al. παραδέχθηκαν ότι αποτελούσε υπόθεση ότι τα αντισώματα CF ήταν ένα μέτρο πρόσφατης ή επίμονης λοίμωξης
Από τα ευρήματά τους, ανέμεναν ότι η μόλυνση των ηλικιωμένων ατόμων θα συνέβαινε σπάνια, ωστόσο αυτό δεν συνέβη
Προσέφεραν πιθανές εξηγήσεις για την αντίφαση αυτή, αλλά κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι δεν ήταν δυνατόν να προσδιοριστεί ποια από τις εναλλακτικές λύσεις προσέφερε τη σωστή εξήγηση
Οι Chanock et al. παραδέχθηκαν ότι δεν ήταν αποδεδειγμένη η συσχέτιση μεταξύ του "ιού Long" και της νόσου του κατώτερου αναπνευστικού σε νοσηλευόμενα βρέφη
Θυμάστε που σας είπα να κρατήσετε στο μυαλό σας τις πληροφορίες σχετικά με τη μελέτη που εξετάζει τη συσχέτιση με τη νόσο του κατώτερου αναπνευστικού; Οι Chanock et al. παραδέχθηκαν ευθέως ότι δεν μπορούσαν να αποδείξουν την ύπαρξη μιας τέτοιας σχέσης με τον "ιό" τους. Το παιχνίδι τελείωσε.Θεώρησαν ότι μια τέτοια συσχέτιση θα μπορούσε να υπάρχει αλλά επισκιάστηκε από το υψηλό ποσοστό "μόλυνσης" μεταξύ της ομάδας ελέγχου του νοσοκομείου
Δεν μπορούσε να γίνει οριστική δήλωση σχετικά με το φάσμα της παθογένειας του Long "ιού" για τον άνθρωπο
Στην πλειονότητα των βρεφών, η "μόλυνση" είχε ως αποτέλεσμα είτε ήπια ασθένεια είτε καμία διακριτή νόσο
Προκειμένου να αποδεχτούμε την ανακάλυψη του "RSV", πρέπει να θέσουμε στον εαυτό μας μερικά ερωτήματα. Είναι η "απομόνωση" ενός αόρατου παράγοντα από έναν χιμπατζή, ενώ αποτυγχάνει με 13 άλλους, αρκετά ισχυρή απόδειξη για να δηλώσουμε την ύπαρξη ενός νέου "ιού"; Η αδυναμία δημιουργίας της ίδιας ασθένειας σε διάφορα ζώα οδηγεί λογικά στο συμπέρασμα ότι ο νέος "ιός" ήταν παθογόνος; Πρέπει να θεωρηθούν οι έμμεσες κυτταροπαθογόνες επιδράσεις σε κυτταροκαλλιέργειες και τα μη ειδικά αποτελέσματα αντισωμάτων έγκυρο υποκατάστατο της άμεσης απόδειξης της ύπαρξης αυτού του "ιού"; Είναι η "απομόνωση" ενός "ιού" από ένα μόνο βρέφος από μια άλλη ομάδα ερευνητών που επίσης βασίστηκε σε έμμεσες κυτταροπαθογόνες επιδράσεις και σε μη ειδικά αποτελέσματα αντισωμάτων απόδειξη ότι οι δύο αόρατοι "ιοί" είναι συγγενείς; Θα πρέπει να αγνοηθούν ή/και να εξηγηθούν τα αντιφατικά αποτελέσματα από πειράματα ελέγχου προκειμένου να διατηρηθεί ζωντανή η πίστη στη νέα "ανακάλυψη του ιού"; Εάν οι αρχικοί ερευνητές παραδέχθηκαν ότι δεν μπορούσαν να αποδείξουν αιτιολογική σχέση μεταξύ του "ιού" των χιμπατζήδων τους και της ασθένειας στους ανθρώπους, τι λέει αυτό για την ικανότητα της αόρατης οντότητας να προκαλεί ασθένειες στους ανθρώπους; Κι αν η δεύτερη ομάδα ερευνητών παραδεχόταν επίσης ότι δεν ήταν σε θέση να αποδείξει μια σχέση μεταξύ της ανθρώπινης εκδοχής τους αυτής της αόρατης οντότητας και της νόσου του κατώτερου αναπνευστικού συστήματος με την οποία προσπαθούσαν να τη συσχετίσουν;
Για όποιον εξετάζει κριτικά και λογικά τα θεμελιώδη στοιχεία για τον "RSV", είναι σαφές ότι δεν αποδείχθηκε ποτέ ότι υπάρχει κανένας "ιός" ούτε ότι προκαλεί ασθένεια στον άνθρωπο. Αντιθέτως, μας παρουσιάστηκαν τα ίδια μη καθαρισμένα δημιουργήματα από καλλιέργειες κυττάρων, μικρά μεγέθη δειγμάτων, αντιφατικά αποτελέσματα από ελέγχους, έμμεσες και μη ειδικές μετρήσεις αντισωμάτων και αδυναμία να τεκμηριωθεί μια αιτιολογική σχέση μεταξύ της αόρατης οντότητας και της ασθένειας που μελετάται. Με άλλα λόγια, άλλη μια τυπική ημέρα στην ψευδοεπιστήμη που είναι γνωστή ως ιολογία.
Αν σας άρεσε αυτό το άρθρο και θα θέλατε να βοηθήσετε να στηρίξετε το συνεχές έργο μου, ο παρακάτω σύνδεσμος είναι μια επιλογή.
Παρακαλώ βοηθήστε να στηρίξετε το έργο μου. 🙏
----Δικτυογραφία :
Respiratory Syncytial “Virus” (RSV) – ViroLIEgy
https://viroliegy.com/2023/01/18/respiratory-syncytial-virus-rsv/