Η Καταστροφή του PCR : Η Γένεση και η Εξέλιξη του "τεστ Drosten"
Από Illa - 50 Ερωτήσεις & Απαντήσεις - Unbekoming Περίληψη Βιβλίου
Σας ευχαριστώ θερμά για το ενδιαφέρον σας και την αναδημοσίευση των άρθρων μου. Θα εκτιμούσα ιδιαίτερα αν, κατά την κοινοποίηση, σ̲υ̲μ̲π̲ε̲ρ̲ι̲λ̲α̲μ̲β̲ά̲ν̲α̲τ̲ε̲ ̲κ̲α̲ι̲ ̲τ̲ο̲ν̲ ̲σ̲ύ̲ν̲δ̲ε̲σ̲μ̲ο̲ ̲(̲l̲i̲n̲k̲)̲ ̲τ̲ο̲υ̲ ̲ά̲ρ̲θ̲ρ̲ο̲υ̲ ̲μ̲ο̲υ̲. Αυτό όχι μόνο αναγνωρίζει την πηγή, αλλά επιτρέπει και σε άλλους να ανακαλύψουν περισσότερο περιεχόμενο. Η υποστήριξή σας είναι πολύτιμη για τη συνέχιση της δουλειάς μου.
Απόδοση στα ελληνικά: Απολλόδωρος - Unbekoming | 8 Φεβρουαρίου 2025
Το τεστ είναι το κλειδί για όλα. Χωρίς τεστ, δεν υπάρχει πανδημία. Χωρίς τεστ δεν υπάρχουν κρούσματα, και χωρίς κρούσματα δεν υπάρχει πανδημία.
Πάντα επρόκειτο για το τεστ PCR. Χρησίμευε ως το πρωταρχικό στήριγμα της ψευδαίσθησης. Το τεστ μετέτρεπε ένα υγιές άτομο (ασυμπτωματικό) σε ένα άρρωστο άτομο (ένα "κρούσμα"). Ήταν αλχημεία: μετατροπή του νερού σε κρασί.
Αυτό το βιβλίο εξηγεί αποτελεσματικά πώς "μείωσαν τους στόχους των γονιδίων " (Q7) από νωρίς, διογκώνοντας αμέσως τους αριθμούς των κρουσμάτων. Ωστόσο, το βιβλίο προϋποθέτει δύο βασικές παραδοχές: ότι υπήρχε μια νέα ασθένεια που ονομαζόταν COVID-19 και ότι προκλήθηκε από έναν "νέο" ιό. Οι λογικοί άνθρωποι μπορούν να διαφωνήσουν και με τις δύο υποθέσεις.
Πιστεύω ότι η ιστορική τεκμηρίωση της διαφθοράς και της απάτης του PCR που παρουσιάζεται στο βιβλίο είναι σημαντική και αξίζει να εξεταστεί. Αυτό που μου είναι ασαφές είναι τι ακριβώς προκάλεσε το τεστ για να δώσει θετικά αποτελέσματα. Μας είπαν ότι "ανίχνευσε γονίδια", αλλά τα γονίδια, τελικά, είναι απλώς χημικές αλληλουχίες.
Ακόμα και αν δεχτούμε την επίσημη αφήγηση, το τεστ PCR δεν ανίχνευσε ποτέ τον "πλήρη ιό" - ανίχνευσε μόνο θραύσματα. Ως εκ τούτου, το τεστ δεν θα μπορούσε ποτέ να καθορίσει αν ο ανιχνευόμενος "ιός" σε κάποιον ήταν πράγματι μολυσματικός. Το όλο σκηνικό είναι ένα χάος από ψέματα και απάτες, και ακόμη και μέσα στο πλαίσιό τους, δεν βγάζει νόημα.
Αλλά αν δεν υπήρχε καμία νέα ασθένεια, όπως αποδεικνύουν ο Rancourt και η ομάδα του, και κανένας νέος ιός, όπως αποδεικνύεται από την έλλειψη ενός πραγματικά και σωστά απομονωμένου "ιού", τίθεται ένα προφανές ερώτημα: Τι ακριβώς ανίχνευε το τεστ;
Παραμένω ανοιχτός στην ιδέα ότι οι ασθένειες μπορούν να προκληθούν τεχνητά σε πληθυσμούς - είτε μέσω ηλεκτρομαγνητικών πεδίων (EMF-ΗΜΠ), είτε μέσω τοξινών, είτε μέσω του ψεκασμού χημικών παραγόντων. Αυτός θα ήταν ένας απλός τρόπος για να πυροδοτηθεί ο δημόσιος πανικός, ο οποίος θα μπορούσε στη συνέχεια να ενισχυθεί από την αδιάκοπη εκστρατεία φόβου των μέσων ενημέρωσης. Είναι μια απλή φόρμουλα.
Το γεγονός ότι το τεστ επισήμανε τους υγιείς ανθρώπους υποδηλώνει ότι η σκανδάλη είναι καθολική, ενσωματωμένη σε όλους. Θα μπορούσε ο ίδιος ο φόβος να δημιουργήσει μια χημική αντίδραση που ενεργοποιεί το τεστ PCR; Ή μήπως ανιχνεύει φυσιολογικά κυτταρικά υπολείμματα που προκαλούνται από ηλεκτρομαγνητικά πεδία;
Ποια ακριβώς είναι αυτή η σκανδάλη, δεν ξέρω - θα μπορούσε να είναι οτιδήποτε. Είναι αλχημεία, άλλωστε.
Σχετικές αναρτήσεις
No Pandemic - Lies are Unbekoming
Was there a pandemic? - Lies are Unbekoming
The Final Pandemic - Lies are Unbekoming
Italy 2020: Inside Covid’s Ground Zero
Virus - Lies are Unbekoming
Viruses, Lies, and Disaster Capitalism: The Engine of Modern Control
Settling the Virus Debate - Lies are Unbekoming
Repocalypse - Lies are Unbekoming
Negative Interest Rates - Lies are Unbekoming
Αναλογία
Φανταστείτε ότι μια εταιρεία ασφαλείας υψηλού κύρους αναπτύσσει έναν νέο ανιχνευτή κίνησης για σπίτια. Ο εφευρέτης τον σχεδίασε αρχικά για να ανιχνεύει μεγάλες κινήσεις, όπως ανθρώπους που περπατούν μέσα σε δωμάτια. Ωστόσο, η εταιρεία ανακαλύπτει ότι μπορεί να το κάνει πολύ πιο ευαίσθητο - τόσο ευαίσθητο που μπορεί να ανιχνεύσει μια μύγα που προσγειώνεται στο περβάζι ενός παραθύρου ή σκόνη που αιωρείται στον αέρα.
Η εταιρεία βιάζεται να διαθέσει στην αγορά αυτόν τον υπερευαίσθητο ανιχνευτή κατά τη διάρκεια ενός εγκληματικού πανικού, παρακάμπτοντας τις συνήθεις διαδικασίες δοκιμών. Συνεργάζεται με έναν παγκόσμιο διανομέα ηλεκτρονικών ειδών, ο οποίος αρχίζει τη μαζική παραγωγή και την αποστολή αυτών των ανιχνευτών σε όλο τον κόσμο πριν ολοκληρωθούν οι ανεξάρτητες δοκιμές. Η εταιρεία τροποποιεί επίσης τον ανιχνευτή ώστε να γίνεται λιγότερο διακριτικός με την πάροδο του χρόνου - στην αρχή απαιτούσε τρεις διαφορετικές κινήσεις για να ενεργοποιήσει συναγερμό, μετά δύο, μετά μόνο μία.
Σύντομα, εκατομμύρια από αυτούς τους υπερευαίσθητους ανιχνευτές εγκαταστάθηκαν σε σπίτια, επιχειρήσεις και κυβερνητικά κτίρια σε όλο τον κόσμο. Δημιουργούν αμέτρητους συναγερμούς, αλλά κανείς δεν μπορεί να πει αν ανιχνεύουν πραγματικούς εισβολείς ή αν απλώς πιάνουν αθώες κινήσεις, όπως κουρτίνες που λικνίζονται στο αεράκι. Όταν οι ιδιοκτήτες σπιτιών ή οι ειδικοί σε θέματα ασφάλειας εκφράζουν ανησυχίες σχετικά με τους ψευδείς συναγερμούς, η εταιρεία και οι κυβερνητικοί αξιωματούχοι αποφεύγουν να απαντήσουν σε άμεσες ερωτήσεις σχετικά με την ακρίβεια του ανιχνευτή.
Εν τω μεταξύ, η αστυνομία και οι υπεύθυνοι χάραξης πολιτικής αρχίζουν να αντιμετωπίζουν κάθε συναγερμό ως επιβεβαιωμένη διάρρηξη, εφαρμόζοντας απαγόρευση κυκλοφορίας και περιορισμούς που βασίζονται αποκλειστικά σε στατιστικά στοιχεία συναγερμών, χωρίς να επιβεβαιώνουν αν έχουν συμβεί πραγματικά εγκλήματα. Η εταιρεία ασφαλείας και ο διανομέας κερδίζουν τεράστια ποσά, ενώ η κοινωνία επωμίζεται το κόστος της ανταπόκρισης σε μια ατελείωτη ροή ανεπιβεβαίωτων συναγερμών.
Αυτό αντικατοπτρίζει τον τρόπο με τον οποίο η δοκιμή PCR - ένα εργαλείο που σχεδιάστηκε για την έρευνα - προσαρμόστηκε σε μια υπερευαίσθητη διαγνωστική δοκιμή, προωθήθηκε εσπευσμένα στην αγορά μέσω εμπορικών συνεργασιών, απλοποιήθηκε σταδιακά και χρησιμοποιήθηκε για να καθοδηγήσει πολιτικές αποφάσεις χωρίς κατάλληλη επικύρωση ή προθυμία να αντιμετωπιστούν οι ανησυχίες σχετικά με την ακρίβεια. Ακριβώς όπως ένας υπερευαίσθητος ανιχνευτής κίνησης δεν μπορεί να διακρίνει μεταξύ ενός εισβολέα και ενός αιωρούμενου σωματιδίου σκόνης, μια υπερ-ενισχυμένη δοκιμή PCR μπορεί να μην κάνει ουσιαστική διάκριση μεταξύ μολυσματικού ιού και άσχετων γενετικών θραυσμάτων.
Με το PCR, αν το κάνεις καλά, μπορείς να βρεις σχεδόν τα πάντα σε οποιονδήποτε - αρχίζει να σε κάνει να πιστεύεις στην, κατά κάποιο τρόπο, βουδιστική αντίληψη ότι τα πάντα περιέχονται σε όλα τα άλλα. Θέλω να πω, αν ενισχύσετε ένα μόνο μόριο σε κάτι που μπορείτε πραγματικά να μετρήσετε - κάτι που μπορεί να κάνει η PCR - τότε υπάρχουν πολύ λίγα μόρια που δεν έχετε τουλάχιστον ένα από αυτά στο σώμα σας...
Σας επιτρέπει να παίρνετε μια πολύ μικρή ποσότητα από οτιδήποτε και να το κάνετε μετρήσιμο και στη συνέχεια να μιλάτε γι' αυτό σε συσκέψεις και άλλα πράγματα σαν να είναι σημαντικό. Βλέπετε, αυτό δεν είναι κατάχρηση, είναι απλά ένα είδος παρερμηνείας...
Όλα αυτά τα τεστ βασίζονται σε πράγματα που είναι αόρατα και τα αποτελέσματα συνάγονται, κατά μία έννοια. Η PCR είναι ξεχωριστή από αυτό, είναι απλώς μια διαδικασία που χρησιμοποιείται για να φτιάξουμε ένα σωρό πράγματα από κάτι. Δεν σας λέει ότι είστε άρρωστοι και δεν σας λέει ότι το πράγμα που καταλήξατε θα σας έβλαπτε πραγματικά ή κάτι τέτοιο.
Kary Mullis
Εφευρέτης της PCR και βραβευμένος με βραβείο Νόμπελ (1944–2019)
Περίληψη 12 σημείων
Οι θεμελιώδεις περιορισμοί της τεχνολογίας PCR: Το τεστ PCR, αν και ισχυρό για την έρευνα, δεν σχεδιάστηκε ποτέ για τη διάγνωση ασθενειών. Ο εφευρέτης της Kary Mullis προειδοποίησε ρητά ότι θα μπορούσε να βρει "σχεδόν τα πάντα σε οποιονδήποτε" αν ενισχυθεί με αρκετούς κύκλους, γεγονός που την καθιστά παραπλανητική όταν χρησιμοποιείται για μαζικές κλινικές εξετάσεις.
Ταχύτητα της επιστημονικής διαδικασίας: Η ανάπτυξη και δημοσίευση του πρωτοκόλλου δοκιμής Drosten-Landt COVID-19 PCR πραγματοποιήθηκε με πρωτοφανή ταχύτητα - από την ιδέα μέχρι τη δημοσίευση από τον ΠΟΥ σε μόλις λίγες ημέρες, ενώ η δημοσίευση στο περιοδικό έγινε σε 27 ώρες. Αυτός ο ρυθμός παρέκαμψε τις συνήθεις επιστημονικές διαδικασίες επικύρωσης και τις διαδικασίες αξιολόγησης από ομοτίμους.
Εμπορικές επιρροές: Η ταχεία ανάπτυξη των δοκιμών αποκάλυψε ισχυρά εμπορικά συμφέροντα. Κιτ δοκιμών με αριθμούς παραγγελίας της Roche υπήρχαν πριν από την επιστημονική δημοσίευση του πρωτοκόλλου, γεγονός που υποδηλώνει ότι η εμπορική παραγωγή προηγήθηκε της κατάλληλης επικύρωσης. Η συνεργασία μεταξύ της TIB Molbiol και της Roche κατέδειξε πώς τα επιχειρηματικά συμφέροντα διαμόρφωσαν την ανταπόκριση στις δοκιμές.
Εξέλιξη των προτύπων δοκιμών: Οι απαιτήσεις δοκιμών απλοποιήθηκαν σταδιακά, μεταβαίνοντας από τις δοκιμές τριών γονιδίων στις δοκιμές ενός γονιδίου. Αυτή η εξέλιξη έδωσε προτεραιότητα στην ταχύτητα και τη σχέση κόστους-αποτελεσματικότητας έναντι της ακρίβειας, αυξάνοντας τα ψευδώς θετικά ποσοστά και μειώνοντας την ικανότητα διάκρισης μεταξύ ενεργών λοιμώξεων και απλών ιϊκών θραυσμάτων.
Ανησυχίες σχετικά με το κατώτατο όριο κύκλων: Το πρωτόκολλο όριζε 45 κύκλους ενίσχυσης, υπερβαίνοντας το τυπικό ανώτατο όριο των 40 που συνιστούν οι εμπειρογνώμονες. Αυτό το υψηλό όριο θα μπορούσε να ανιχνεύσει ασήμαντες ποσότητες γενετικού υλικού, δημιουργώντας θετικά αποτελέσματα με αμφίβολη κλινική σημασία.
Ιστορικό μοτίβο: Η αντίδραση στις δοκιμές του COVID-19 ακολούθησε ένα μοτίβο που καθιερώθηκε σε προηγούμενες επιδημίες όπως ο SARS και η γρίπη των χοίρων, όπου η ταχεία ανάπτυξη δοκιμών και τα εμπορικά συμφέροντα διαμόρφωσαν την αντίδραση. Ωστόσο, η δοκιμή COVID-19 ήταν μοναδική ως προς την κλίμακα και τον αντίκτυπό της στις πολιτικές αποφάσεις.
Αποτυχία κανονιστικής εποπτείας: Οι κυβερνητικές υπηρεσίες επέδειξαν απροθυμία να αντιμετωπίσουν τις ανησυχίες σχετικά με την ακρίβεια των δοκιμών. Η μη ανταπόκριση του γερμανικού Υπουργείου Υγείας σε επίσημα ερωτήματα και οι υπεκφυγές του Ινστιτούτου Robert Koch υποδηλώνουν συστηματική αποφυγή των ερωτημάτων εγκυρότητας των δοκιμών.
Συγκρούσεις συμφερόντων: Κατά την ανάπτυξη και τη δημοσίευση του τεστ προέκυψαν σημαντικές μη δημοσιοποιημένες συγκρούσεις συμφερόντων. Αυτές περιλάμβαναν τους διπλούς ρόλους των βασικών προσώπων ως συγγραφέων και συντακτών του περιοδικού, καθώς και εμπορικά συμφέροντα στην παραγωγή και διανομή του τεστ.
Θέματα ποιοτικού ελέγχου: ιδιαίτερα με τους κορονοϊούς του κοινού κρυολογήματος. Παρά τα ευρήματα αυτά, τα μέτρα ποιοτικού ελέγχου συχνά μειώνονταν αντί να ενισχύονται καθώς εξελισσόταν η πανδημία.
Αντίκτυπος του ορισμού των κρουσμάτων: Η εξάρτηση μόνο από τη δοκιμή PCR για τον ορισμό των κρουσμάτων σηματοδότησε μια σημαντική απόκλιση από την παραδοσιακή επιδημιολογία, όπου προηγουμένως απαιτούνταν κλινικά συμπτώματα και επιδημιολογικές συνδέσεις. Η αλλαγή αυτή άλλαξε ριζικά τον τρόπο μέτρησης και διαχείρισης της πανδημίας.
Παγκόσμιο δίκτυο διανομής: Ένα εξελιγμένο παγκόσμιο σύστημα διανομής αναπτύσσει ταχέως τις δοκιμές παγκοσμίως μέσω εμπορικών καναλιών, αναπτυξιακής βοήθειας και διεθνών οργανισμών. Το δίκτυο αυτό κατέδειξε την ενσωμάτωση των επιστημονικών, εμπορικών και πολιτικών συμφερόντων στην αντιμετώπιση της πανδημίας.
Ασυνέπειες τεκμηρίωσης: Η τεκμηρίωση των δοκιμών αποκάλυψε ασυνέπειες, ιδίως στις μεταφράσεις και στις περιγραφές προβλεπόμενης χρήσης. Η γερμανική έκδοση παρέλειψε κυρίως κρίσιμους περιορισμούς που υπήρχαν σε άλλες γλωσσικές εκδόσεις, εγείροντας ερωτήματα σχετικά με τη διαφάνεια και την ορθή χρήση της δοκιμής.
50 Ερωτήσεις & Απαντήσεις
1. Τι είναι η τεχνολογία PCR και πώς εφευρέθηκε αρχικά;
Η PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) εφευρέθηκε από τον Kary Mullis το 1983 μέσω αυτού που περιέγραψε ως "έναν απίθανο συνδυασμό συμπτώσεων, αφέλειας και τυχερών λαθών", ενώ οδηγούσε κατά μήκος ενός ορεινού δρόμου υπό το φως του φεγγαριού. Η τεχνική επιτρέπει τη δημιουργία δισεκατομμυρίων αντιγράφων ενός μόνο μορίου DNA μέσα σε λίγες ώρες χρησιμοποιώντας μόνο έναν δοκιμαστικό σωλήνα, απλά αντιδραστήρια και θερμότητα. Μπορεί να λειτουργήσει με καθαρό DNA ή σύνθετα βιολογικά υλικά από διάφορες πηγές.
Η ισχύς της μεθόδου έγκειται στην ικανότητά της να βρίσκει και να ενισχύει ένα μόνο μόριο σε ένα δείγμα, πολλαπλασιάζοντάς το επί 100 δισεκατομμύρια φορές - συγκεκριμένα, λειτουργεί με ένα τμήμα μορίου από το οποίο συνάγεται η παρουσία ολόκληρου του μορίου. Για αυτή την πρωτοποριακή εφεύρεση, ο Mullis έλαβε το βραβείο Νόμπελ το 1993.
2. Γιατί ο αριθμός των κύκλων PCR είναι σημαντικός στις δοκιμές;
Κάθε κύκλος PCR διπλασιάζει την ποσότητα του DNA-στόχου, δημιουργώντας μια εκθετική αύξηση. Σε 10 κύκλους, ένα μόριο γίνεται περίπου 1.000 αντίγραφα- σε 20 κύκλους, γίνεται περίπου 1 εκατομμύριο- σε 30 κύκλους, περίπου 1 δισεκατομμύριο- και σε 40 κύκλους, περίπου 1 τρισεκατομμύριο αντίγραφα. Ο εφευρέτης Kary Mullis δήλωσε ότι οτιδήποτε πάνω από 40 κύκλους υποδεικνύει σοβαρά προβλήματα με τη διαδικασία PCR.
Το κατώτατο όριο των κύκλων καθίσταται κρίσιμο, διότι πάρα πολλοί κύκλοι μπορούν να δημιουργήσουν ψευδώς θετικά και αναξιόπιστα αποτελέσματα. Οι κατευθυντήριες γραμμές MIQE (ελάχιστα πρότυπα για πειράματα PCR) υποδεικνύουν ότι τιμές άνω των 40 κύκλων είναι ύποπτες λόγω της υπονοούμενης χαμηλής απόδοσης και γενικά δεν πρέπει να αναφέρονται. Ορισμένοι εμπειρογνώμονες προτείνουν ακόμη και τον περιορισμό των κύκλων σε 35.
3. Ποια είναι τα βασικά συστατικά που απαιτούνται για τη δοκιμή PCR;
Η PCR απαιτεί ένα δείγμα δίκλωνου DNA που περιέχει την προς ενίσχυση αλληλουχία-στόχο, μαζί με εκκινητές που καθορίζουν τα σημεία εκκίνησης της ενίσχυσης. Η διαδικασία χρειάζεται το ένζυμο πολυμεράση, το οποίο αντιγράφει το DNA, και τα τέσσερα νουκλεοτίδια (A, T, G, C) που χρησιμεύουν ως δομικά στοιχεία για νέες αλυσίδες DNA.
Η αντίδραση λαμβάνει χώρα σε μια συσκευή που ονομάζεται θερμοκυκλοποιητής, η οποία ελέγχει τις μεταβολές της θερμοκρασίας που απαιτούνται για τον διαχωρισμό των κλώνων του DNA (πάνω από 90°C) και τη σύνθεση νέων κλώνων (κάτω από 60°C). Ειδικά για την εξέταση COVID-19, απαιτείται ένα πρόσθετο βήμα για τη μετατροπή του ιικού RNA σε DNA πριν από την έναρξη της PCR.
4. Ποιοι είναι οι βασικοί περιορισμοί της PCR, όπως τους περιέγραψε ο εφευρέτης της;
Ο Kary Mullis δήλωσε ρητά ότι η PCR δεν μπορεί να πει αν κάποιος είναι άρρωστος ή αν αυτό που βρέθηκε θα τον βλάψει. Τόνισε ότι η PCR απλώς δημιουργεί πολλά αντίγραφα από κάτι και ότι τα αποτελέσματα συνάγονται και όχι παρατηρούνται άμεσα. Σύμφωνα με τον Mullis, η PCR θα μπορούσε να βρει "σχεδόν οτιδήποτε σε οποιονδήποτε" αν ενισχυθεί αρκετά.
Ο Mullis ήταν ιδιαίτερα επικριτικός ως προς τη χρήση της PCR για τη διάγνωση ιών, σημειώνοντας ότι η εύρεση ιϊκών θραυσμάτων δεν αποδεικνύει την αιτιώδη συνάφεια της νόσου. Τόνισε ότι η ικανότητα της PCR να ενισχύει μικροσκοπικές ποσότητες γενετικού υλικού μπορεί να οδηγήσει σε παρερμηνείες όταν τα αποτελέσματα συζητούνται σαν να είναι σημαντικά σημαντικά.
5. Πώς λειτουργεί μαθηματικά η ενίσχυση με PCR;
Η ενίσχυση με PCR ακολουθεί ένα εκθετικό μοτίβο όπου κάθε κύκλος διπλασιάζει την ποσότητα του DNA-στόχου. Ξεκινώντας από ένα μόνο γονιδιακό τμήμα, μετά από έναν κύκλο υπάρχουν δύο αντίγραφα και ο διπλασιασμός συνεχίζεται με κάθε κύκλο: 10 κύκλοι παράγουν περίπου 1.000 αντίγραφα, 20 κύκλοι περίπου 1 εκατομμύριο, 30 κύκλοι περίπου 1 δισεκατομμύριο, 40 κύκλοι περίπου 1 τρισεκατομμύριο και 50 κύκλοι περίπου 1 τετράκις εκατομμύριο.
Η μαθηματική εξέλιξη δείχνει γιατί ο αριθμός των κύκλων είναι κρίσιμος - η διαφορά μεταξύ 40 και 45 κύκλων αντιπροσωπεύει μια τεράστια αύξηση της ενίσχυσης, από 1 τρισεκατομμύριο σε 35 τρισεκατομμύρια αντίγραφα. Αυτή η εκθετική αύξηση εξηγεί επίσης γιατί πάρα πολλοί κύκλοι μπορούν να ενισχύσουν ακόμη και ελάχιστες ποσότητες υλικού-στόχου ή μόλυνσης σε φαινομενικά σημαντικά αποτελέσματα.
6. Πώς αναπτύχθηκε το τεστ Drosten-Landt COVID-19 τον Ιανουάριο του 2020;
Το τεστ αναπτύχθηκε με πρωτοφανή ταχύτητα στις αρχές Ιανουαρίου 2020, πριν καν δημοσιευθεί η αλληλουχία του ιού. Οι Drosten και Landt δημιούργησαν το τεστ τους χρησιμοποιώντας το SARS και άλλους γνωστούς κορονοϊούς ως αναφορές. Μέχρι τις 9 Ιανουαρίου είχαν σχεδιάσει το πρώτο τους κιτ δοκιμής και μέχρι τις 11 Ιανουαρίου ο Landt έστειλε τα κιτ στο CDC της Ταϊβάν και στη Roche στο Χονγκ Κονγκ χωρίς οδηγίες.
Η διαδικασία ανάπτυξης κινήθηκε από το πρώτο πρωτόκολλο του ΠΟΥ στις 13 Ιανουαρίου (δοκιμή τριών γονιδίων) σε μια τροποποιημένη έκδοση στις 17 Ιανουαρίου (δοκιμή δύο γονιδίων), με αποκορύφωμα τη δημοσίευση της Eurosurveillance στις 23 Ιανουαρίου. Αυτή η ταχεία ανάπτυξη συνέβη προτού καν υπάρξουν ασθενείς προς εξέταση στην Ταϊβάν και το Χονγκ Κονγκ, καθώς τα πρώτα κρούσματα αναφέρθηκαν μόλις στις 21 και 22 Ιανουαρίου.
7. Ποια ήταν η σημασία της μείωσης των γονιδιακών στόχων από τρεις σε έναν;
Η μείωση από τρία γονίδια σε ένα αντιπροσώπευε σημαντική μείωση των διαγνωστικών προτύπων. Αρχικά, το πρωτόκολλο απαιτούσε τη δοκιμή του γονιδίου Ε, του γονιδίου RdRp και του γονιδίου Ν, με το γονίδιο Ε να χρησιμεύει ως αρχική δοκιμασία διαλογής και τα άλλα ως επιβεβαίωση. Η μείωση εξάλειψε αρχικά το γονίδιο Ν και στη συνέχεια κατέστησε το γονίδιο RdRp προαιρετικό, αφήνοντας μόνο τη δοκιμή του γονιδίου Ε.
Αυτή η απλούστευση έκανε τις δοκιμές ευκολότερες και φθηνότερες, αλλά μείωσε σημαντικά την ειδικότητα. Η εξέταση του γονιδίου Ε από μόνη της δεν μπορεί να κάνει διάκριση μεταξύ του SARS-CoV-2 και άλλων κοροναϊών (sarbecoviruses). Οι επιστήμονες επέκριναν αυτή τη μείωση, σημειώνοντας ότι η εξέταση πολλαπλών γονιδίων σε όλο το ιικό γονιδίωμα παρέχει καλύτερες αποδείξεις για έναν άθικτο, μολυσματικό ιό έναντι απλών θραυσμάτων.
8. Πώς άλλαξαν οι συστάσεις του ΠΟΥ για τις εξετάσεις με την πάροδο του χρόνου;
Οι συστάσεις του ΠΟΥ εξελίχθηκαν από την απαίτηση πολλαπλών γονιδιακών στόχων στην αποδοχή δοκιμών ενός γονιδίου. Τον Ιανουάριο, τα πρωτόκολλά τους ζητούσαν τη δοκιμή πολλαπλών γονιδίων με βήματα επιβεβαίωσης. Μέχρι τον Μάρτιο του 2020, ο ΠΟΥ δημοσίευσε νέες οδηγίες που αναφέρουν ότι σε περιοχές με καθιερωμένη κυκλοφορία του ιού COVID-19, ο έλεγχος με RT-PCR ενός μόνο διακριτικού στόχου θα μπορούσε να θεωρηθεί επαρκής.
Αυτή η αλλαγή αναπτύχθηκε με τη συμβολή πολλών συμβούλων, συμπεριλαμβανομένων των Drosten, Koopmans και Zambon, οι οποίοι ήταν όλοι συν-συγγραφείς των αρχικών πρωτοκόλλων και του άρθρου του Eurosurveillance. Η απλουστευμένη προσέγγιση διευκόλυνε τον έλεγχο, αλλά έθεσε σε κίνδυνο την ακρίβεια και την ειδικότητα.
9. Γιατί επιλέχθηκε το γονίδιο Ε για τη δοκιμή ενός γονιδίου;
Το γονίδιο Ε επιλέχθηκε επειδή οι εξετάσεις που στοχεύουν σε αυτό είναι φθηνές και έχουν υψηλή ευαισθησία. Ωστόσο, η επιλογή αυτή ήταν αμφιλεγόμενη επειδή το γονίδιο Ε δεν είναι ειδικό για τον SARS-CoV-2, αλλά είναι κοινό σε άλλους κοροναϊούς (σαρβεκοϊούς). Αρχικά, η εξέταση του γονιδίου Ε προοριζόταν μόνο ως ένα αρχικό βήμα διαλογής που θα επιβεβαιωνόταν με πιο ειδικές εξετάσεις.
Όταν διακόπηκε η επιβεβαιωτική εξέταση για τις ενδημικές περιοχές κατόπιν σύστασης του ΠΟΥ, πολλά εργαστήρια, ιδίως τα μικρότερα, άρχισαν να χρησιμοποιούν από τον Απρίλιο του 2020 μόνο την εξέταση Ε-γονιδίων. Η επιλογή αυτή έδωσε προτεραιότητα στο κόστος και την ευκολία έναντι της ειδικότητας, οδηγώντας σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα από την ανίχνευση άλλων κορονοϊών.
10. Ποιες διαδικασίες επικύρωσης απαιτήθηκαν για τις δοκιμές;
Για τις εμπορικές δοκιμές, οι διαδικασίες επικύρωσης θα έπρεπε να περιλαμβάνουν τον προσδιορισμό των δεδομένων αναλυτικής απόδοσης, τη συλλογή στο πλαίσιο της επικύρωσης της ανάλυσης και την επαλήθευση μέσω των δοκιμών του κατασκευαστή. Οι εσωτερικές δοκιμές απαιτούσαν επικύρωση από το ίδιο το εκτελούν εργαστήριο, σύμφωνα με εθνικές και διεθνείς κατευθυντήριες γραμμές όπως το RiliBäK και το DIN EN ISO 15189.
Ωστόσο, η ταχεία ανάπτυξη των δοκιμών, ιδίως τον Ιανουάριο του 2020, δημιούργησε ερωτήματα σχετικά με το κατά πόσον ακολουθήθηκαν οι κατάλληλες διαδικασίες επικύρωσης. Το χρονοδιάγραμμα μεταξύ της ανάπτυξης των δοκιμών και της διανομής, ιδίως για τις πρώτες δοκιμές TIB Molbiol/Roche, υποδηλώνει ότι η ολοκληρωμένη επικύρωση μπορεί να διακυβεύτηκε υπέρ της ταχύτητας.
11. Ποια είναι η ιστορική σχέση μεταξύ Drosten και Landt;
Η συνεργασία τους ξεκίνησε κατά τη διάρκεια της επιδημίας SARS το 2003, σχηματίζοντας μια κερδοφόρα εταιρική σχέση που διήρκεσε σε πολλαπλά ξεσπάσματα ασθενειών. Μετά την αρχική τους επιτυχία με τις δοκιμές PCR για τον SARS, συνεργάστηκαν σε δοκιμές για τη γρίπη των πτηνών, τη γρίπη των χοίρων, τον MERS και τον Zika. Η δοκιμή SARS σηματοδότησε την αρχή της ανάδειξης του Drosten και του χάρισε τον πρώτο του Ομοσπονδιακό Σταυρό Αξίας.
Η συνεργασία τους αποδείχθηκε ιδιαίτερα επικερδής κατά τη διάρκεια της επιδημίας της γρίπης των χοίρων το 2009, όπου η εταιρεία TIB Molbiol του Landt διπλασίασε τον ετήσιο κύκλο εργασιών της. Αυτό το μοτίβο συνεργασίας για τις αναδυόμενες ιογενείς απειλές δημιούργησε ένα πρότυπο που θα επαναλαμβανόταν με το COVID-19, συνδυάζοντας το επιστημονικό κύρος του Drosten με τις εμπορικές δυνατότητες παραγωγής δοκιμών της Landt.
12. Πώς συνδέονται η TIB Molbiol και η Roche;
Η TIB Molbiol και η Roche διατηρούν μια συμβιωτική σχέση που χρονολογείται από την εισαγωγή της συσκευής LightCycler της Roche το 1998. Η TIB Molbiol σχεδιάζει κιτ δοκιμών ειδικά για τον εξοπλισμό της Roche, ενώ τα προϊόντα της φέρουν αριθμούς παραγγελίας της Roche και διανέμονται μέσω του παγκόσμιου δικτύου της Roche. Η συνεργασία αυτή εντάθηκε μετά την εξαγορά της Boehringer Mannheim από τη Roche, η οποία είχε αρχικά συνεργαστεί με την TIB Molbiol.
Η σχέση αυτή απέκτησε ιδιαίτερη σημασία κατά τη διάρκεια ξεσπασμάτων ασθενειών, όπου η ικανότητα της TIB Molbiol να αναπτύσσει ταχέως δοκιμές συνδυάστηκε με το παγκόσμιο δίκτυο διανομής της Roche και την κυρίαρχη θέση της στην αγορά των διαγνωστικών. Αυτή η συμφωνία έδωσε και στις δύο εταιρείες ένα "πλεονέκτημα πρωτοπόρου" στην αντιμετώπιση νέων εστιών ασθενειών, όπως αποδείχθηκε με το SARS, τη γρίπη των χοίρων και αργότερα το COVID-19.
13. Ποιος ήταν ο ρόλος του ΠΟΥ στην ανάπτυξη του πρωτοκόλλου δοκιμών;
Ο ΠΟΥ χρησίμευσε ως ο κύριος δίαυλος για την παγκόσμια διανομή του πρωτοκόλλου PCR Drosten-Landt. Ο οργανισμός δημοσίευσε το πρώτο πρωτόκολλο στις 13 Ιανουαρίου 2020, ακολουθούμενο από μια τροποποιημένη έκδοση στις 17 Ιανουαρίου, και τα δύο γραμμένα από τον Drosten. Αυτά τα πρωτόκολλα θέτουν το διεθνές πρότυπο για τις δοκιμές COVID-19, παρά την έλλειψη παραδοσιακών διαδικασιών επικύρωσης.
Η συμμετοχή του ΠΟΥ έδωσε στα πρωτόκολλα άμεση παγκόσμια αξιοπιστία και εμβέλεια. Ο οργανισμός τροποποίησε αργότερα τις συστάσεις του για να επιτρέψει τη δοκιμή ενός γονιδίου σε περιοχές με διαπιστωμένη κυκλοφορία του COVID-19, γεγονός που αποτελεί σημαντική χαλάρωση των προτύπων δοκιμής. Η απόφαση αυτή ελήφθη με τη συμβολή αρκετών βασικών προσώπων που συμμετείχαν στην αρχική ανάπτυξη του πρωτοκόλλου, μεταξύ των οποίων ο Drosten.
14. Πώς συμμετείχε η Charité στην ανάπτυξη των δοκιμών;
Το Charité, μέσω του Ινστιτούτου Ιολογίας που διευθύνει ο Drosten, διαδραμάτισε κεντρικό ρόλο στην ανάπτυξη της εξέτασης COVID-19 PCR. Η συμμετοχή του ινστιτούτου επεκτάθηκε πέρα από την καθαρή έρευνα μέσω του εμπορικού του βραχίονα, της Labor Berlin-Charité Vivantes GmbH, η οποία είχε αναλάβει την επίτευξη "βιώσιμης ανάπτυξης" μέσω διαγνωστικών υπηρεσιών.
Αυτός ο διπλός ρόλος τόσο ως προγραμματιστής όσο και ως εμπορικός πάροχος δοκιμών δημιούργησε πιθανές συγκρούσεις συμφερόντων που δεν αποκαλύφθηκαν αρχικά. Η υψηλού κύρους φήμη του Charité προσέδιδε αξιοπιστία στη δοκιμή, ενώ το εμπορικό του εργαστήριο μπορούσε να επωφεληθεί οικονομικά από την ευρεία υιοθέτηση της δοκιμής.
15. Ποιες συγκρούσεις συμφερόντων προέκυψαν κατά την ανάπτυξη των δοκιμών;
Αρκετές σημαντικές συγκρούσεις συμφερόντων προέκυψαν κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης των δοκιμών. Οι Drosten και Reusken ήταν συνεκδότες του Eurosurveillance, ενώ ταυτόχρονα ήταν συγγραφείς του εγγράφου που δημοσιεύθηκε γρήγορα. Η ιδιοκτησία της TIB Molbiol από τον Landt και το εμπορικό του ενδιαφέρον για την παραγωγή δοκιμών δεν αποκαλύφθηκαν αρχικά, όπως και η σύνδεση του Marco Kaiser με μια άλλη εταιρεία Landt.
Η εμπορική σχέση μεταξύ της Labor Berlin (όπου εργάζονταν οι Drosten και Corman) και της εφαρμογής των δοκιμών δεν αποκαλύφθηκε επίσης. Οι συγκρούσεις αυτές δημιούργησαν ερωτήματα σχετικά με την αντικειμενικότητα της διαδικασίας ανάπτυξης και επικύρωσης του τεστ, ιδίως δεδομένης της πρωτοφανούς ταχύτητας της δημοσίευσης και της ευρείας υιοθέτησης.
16. Πόσο γρήγορα δημοσιεύθηκε το πρωτόκολλο Drosten στην Eurosurveillance;
Το πρωτόκολλο δημοσιεύθηκε με εξαιρετική ταχύτητα - υποβλήθηκε στις 21 Ιανουαρίου, έγινε δεκτό στις 22 Ιανουαρίου και δημοσιεύθηκε στις 23 Ιανουαρίου 2020. Αυτή η ταχύτητα των 27 ωρών από την υποβολή έως τη δημοσίευση ήταν πρωτοφανής στην ιστορία του περιοδικού, όπου ακόμη και οι ταχείες ανακοινώσεις χρειάζονταν συνήθως 20-30 ημέρες και τα κανονικά άρθρα κατά μέσο όρο περίπου 100 ημέρες για την αναθεώρηση και τη δημοσίευση.
Η στατιστική ανάλυση του χρονοδιαγράμματος δημοσίευσης της Eurosurveillance έδειξε ότι αυτό το έγγραφο αποτελεί δραματική εξαίρεση, καθώς επεξεργάζεται περίπου 100 φορές γρηγορότερα από τα τυπικά έγγραφα. Αυτή η πρωτοφανής ταχύτητα δημιούργησε σοβαρά ερωτήματα σχετικά με τη σχολαστικότητα της αξιολόγησης από ομοτίμους και την πιθανή επιρροή των συντακτικών θέσεων των συγγραφέων στο περιοδικό.
17. Ποιες ανησυχίες εκφράστηκαν σχετικά με τη διαδικασία αξιολόγησης από ομοτίμους;
Οι επικριτές επεσήμαναν ότι η κατάλληλη αξιολόγηση από ομοτίμους θα ήταν αδύνατη στο διάστημα των 27 ωρών που μεσολάβησε μεταξύ της υποβολής και της δημοσίευσης. Η παρουσία δέκα σημαντικών μεθοδολογικών ατελειών υποδήλωνε ανεπαρκή αξιολόγηση. Ο διπλός ρόλος των Drosten και Reusken ως συγγραφείς και συντάκτες του περιοδικού έθεσε ερωτήματα σχετικά με την ακεραιότητα της διαδικασίας αναθεώρησης.
Οι επιστήμονες που ζήτησαν αργότερα την ανάκληση σημείωσαν ότι αυτή η ταχεία δημοσίευση φαινόταν να παρακάμπτει τα συνήθη μέτρα ποιοτικού ελέγχου. Υποστήριξαν ότι τα ελαττώματα της δημοσίευσης θα είχαν εντοπιστεί με την κατάλληλη αξιολόγηση από ομοτίμους, γεγονός που υποδηλώνει ότι η ταχύτητα της δημοσίευσης είχε προτεραιότητα έναντι της επιστημονικής αυστηρότητας.
18. Πώς ανταποκρίθηκε η Eurosurveillance στις επικρίσεις;
Η Eurosurveillance χρειάστηκε πάνω από δύο μήνες για να απαντήσει στην επίσημη κριτική του εγγράφου, εκδίδοντας τελικά μια υπεράσπιση την οποία οι επικριτές χαρακτήρισαν απορριπτική και χωρίς επιστημονική ουσία. Αντί να αντιμετωπίσει συγκεκριμένες τεχνικές ανησυχίες, το περιοδικό προσέφερε γενικές δηλώσεις σχετικά με τις συνθήκες έκτακτης ανάγκης και τη χρησιμότητα του εγγράφου για την αντιμετώπιση της πανδημίας.
Η απάντηση του περιοδικού επικεντρώθηκε κυρίως στην υπεράσπιση του γρήγορου χρονοδιαγράμματος δημοσίευσης και στην αντιμετώπιση ζητημάτων σύγκρουσης συμφερόντων, ενώ απέφυγε σε μεγάλο βαθμό να ασχοληθεί με τις τεχνικές και μεθοδολογικές επικρίσεις που διατυπώθηκαν. Η απάντηση αυτή θεωρήθηκε από τους επικριτές ως περαιτέρω απόδειξη των συμβιβασμένων επιστημονικών προτύπων.
19. Τι ήταν ασυνήθιστο στο χρονοδιάγραμμα δημοσίευσης;
Πέρα από την πρωτοφανή ταχύτητα των 27 ωρών, το χρονοδιάγραμμα της δημοσίευσης αποκάλυψε αρκετές ανωμαλίες. Η δημοσίευση εμφανίστηκε προτού η αλληλουχία του ιού γίνει δημόσια διαθέσιμη και προτού υπάρξουν επιβεβαιωμένα κρούσματα σε πολλές περιοχές όπου στάλθηκε το τεστ. Το χρονοδιάγραμμα υποδηλώνει ότι η παραγωγή του τεστ ήταν ήδη σε εξέλιξη πριν από την επίσημη δημοσίευση ή την αξιολόγηση από ομοτίμους.
Η τεκμηρίωση έδειξε ότι εμπορικά κιτ δοκιμών με αριθμούς παραγγελίας της Roche υπήρχαν πριν από τη δημοσίευση του πρωτοκόλλου, γεγονός που υποδηλώνει παράλληλη εμπορική ανάπτυξη παράλληλα με την επιστημονική διαδικασία. Αυτό το ασυνήθιστο χρονοδιάγραμμα υποδηλώνει συντονισμό μεταξύ εμπορικών και επιστημονικών συμφερόντων που προηγήθηκε της επίσημης επιστημονικής επικύρωσης.
20. Ποιος ήταν ο ρόλος των συντακτών του περιοδικού στη δημοσίευση;
Δύο από τους συγγραφείς του εγγράφου, οι Drosten και Reusken, διετέλεσαν συντάκτες του Eurosurveillance, δημιουργώντας σαφή σύγκρουση συμφερόντων στη διαδικασία δημοσίευσης. Ο διπλός τους ρόλος ως συγγραφείς και συντάκτες δημιούργησε ερωτήματα σχετικά με την ανεξαρτησία και την αντικειμενικότητα της διαδικασίας αναθεώρησης, ιδίως δεδομένης της πρωτοφανούς ταχύτητας δημοσίευσης του εγγράφου.
Η θέση των συντακτών στο περιοδικό φάνηκε να διευκολύνει μια εξαιρετικά ταχεία διαδικασία δημοσίευσης που παρέκαμπτε τις συνήθεις διαδικασίες αναθεώρησης. Όταν εμφανίστηκε κριτική, η απάντηση της συντακτικής επιτροπής υποδήλωνε μια προστατευτική στάση απέναντι στο έγγραφο παρά μια αντικειμενική αξιολόγηση των επιστημονικών ανησυχιών που διατυπώθηκαν.
21. Ποιοι είναι οι τρεις πρωταρχικοί γονιδιακοί στόχοι στις δοκιμές PCR;
Το αρχικό πρωτόκολλο PCR επικεντρώθηκε σε τρία γονίδια: το γονίδιο Ε (που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη του ιικού περιβλήματος), το γονίδιο RdRP (μέρος του συμπλόκου αντιγραφής του ιού) και το γονίδιο Ν (που παράγει την πρωτεΐνη του νουκλεοκαψιδίου). Κάθε γονίδιο είχε συγκεκριμένους σκοπούς στην ανίχνευση του ιού - το γονίδιο Ε χρησίμευε ως αρχικό εργαλείο διαλογής, ενώ τα γονίδια RdRP και N προορίζονταν για την επιβεβαίωση των θετικών αποτελεσμάτων.
Τα γονίδια επιλέχθηκαν με βάση τους διαφορετικούς ρόλους τους στη δομή και τη λειτουργία του ιού. Το γονίδιο Ε είναι κοινό σε όλους τους κορονοϊούς, γεγονός που το καθιστά χρήσιμο για ευρεία ανίχνευση αλλά λιγότερο ειδικό. Το γονίδιο RdRP, που εμπλέκεται στην αντιγραφή του ιού, και το γονίδιο N, το οποίο σχηματίζει το πρωτεϊνικό κέλυφος γύρω από το γενετικό υλικό του ιού, επιλέχθηκαν για τη μεγαλύτερη εξειδίκευσή τους στον SARS-CoV-2.
22. Πώς επηρεάζει το όριο κύκλου τα αποτελέσματα των δοκιμών;
Το κατώφλι κύκλων αντιπροσωπεύει τον αριθμό των κύκλων ενίσχυσης που απαιτούνται για την ανίχνευση του γενετικού υλικού του ιού. Κάθε κύκλος διπλασιάζει την ποσότητα του DNA-στόχου, δημιουργώντας εκθετική αύξηση. Ο μεγαλύτερος αριθμός κύκλων, ενώ τεχνικά αυξάνει την ευαισθησία, αυξάνει επίσης τον κίνδυνο ανίχνευσης κλινικά ασήμαντων ποσοτήτων ιϊκού υλικού ή δημιουργίας ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων.
Το πρωτόκολλο Drosten όριζε 45 κύκλους, υπερβαίνοντας το τυπικό μέγιστο των 40 κύκλων που συνιστάται από τον εφευρέτη της PCR και άλλους εμπειρογνώμονες. Αυτό το υψηλότερο όριο θα μπορούσε να ανιχνεύσει εξαιρετικά μικρές ποσότητες ιικού υλικού, αλλά δημιούργησε ερωτήματα σχετικά με την κλινική σημασία. Όπως σημείωσε ο David Crowe, "αν το όριο ήταν 20, όλοι θα ήταν αρνητικοί. Αν το κόψετε στα 50, μπορεί όλοι να είναι θετικοί".
23. Ποια είναι η σημασία του σχεδιασμού των εκκινητών;
Οι εκκινητές είναι σύντομες αλληλουχίες DNA που καθορίζουν πού αρχίζει και πού τελειώνει η ενίσχυση με PCR στο γονιδίωμα-στόχο. Ο σχεδιασμός των εκκινητών του πρωτοκόλλου Drosten επικρίθηκε ότι καλύπτει μόνο το μισό περίπου γονιδίωμα του ιού, χάνοντας σημαντικές ιικές περιοχές και αυξάνοντας τα ποσοστά ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων. Ο ιδανικός σχεδιασμός εκκινητών θα στόχευε και στα δύο άκρα του ιικού γονιδιώματος, ώστε να γίνεται καλύτερη διάκριση μεταξύ πλήρους, μολυσματικού ιού και απλών θραυσμάτων.
Η τοποθέτηση των εκκινητών σε εξαιρετικά μεταβλητές περιοχές του ιικού γονιδιώματος δημιούργησε πρόσθετα προβλήματα. Αυτή η σχεδιαστική επιλογή κατέστησε τη δοκιμή πιο ευαίσθητη στις γενετικές παραλλαγές και λιγότερο αξιόπιστη με την πάροδο του χρόνου καθώς ο ιός μεταλλάσσεται. Οι επικριτές υποστήριξαν ότι πιο σταθερές περιοχές του γονιδιώματος θα παρείχαν πιο συνεπή αποτελέσματα.
24. Πώς τα διάφορα γονίδια υποδεικνύουν την παρουσία του ιού;
Διαφορετικά ιϊκά γονίδια εξυπηρετούν διαφορετικές λειτουργίες στην επιβεβαίωση της παρουσίας του ιού. Το γονίδιο Ε, αν και ανιχνεύεται ευκολότερα, είναι λιγότερο ειδικό, καθώς είναι κοινό σε πολλούς κορονοϊούς. Το γονίδιο RdRP, ειδικό για τον μηχανισμό αντιγραφής του ιού, και το γονίδιο N, που κωδικοποιεί τη δομή του ιού, παρέχουν πιο συγκεκριμένες αποδείξεις για την παρουσία του SARS-CoV-2.
Η δοκιμή πολλαπλών γονιδίων σε όλο το ιϊκό γονιδίωμα αυξάνει την εμπιστοσύνη στην ανίχνευση ενός ακέραιου, μολυσματικού ιού και όχι μόνο τμημάτων. Η προοδευτική μείωση από τη δοκιμή τριών γονιδίων στη δοκιμή ενός γονιδίου αντιπροσώπευε έναν σημαντικό συμβιβασμό στην ικανότητα διάκρισης μεταξύ ενεργού λοίμωξης και απλής παρουσίας γενετικού υλικού του ιού.
25. Ποιες τεχνικές ατέλειες εντοπίστηκαν στο πρωτόκολλο;
Οι επιστήμονες εντόπισαν δέκα σημαντικές μεθοδολογικές ατέλειες στο πρωτόκολλο Drosten, συμπεριλαμβανομένου προβληματικού σχεδιασμού εκκινητών, ανεπαρκών πρωτοκόλλων θερμοκρασίας και ακατάλληλων ορίων κύκλου. Η συγκέντρωση του πρωτοκόλλου σε γονιδιακές περιοχές που υπόκεινται σε παραλλαγές το καθιστούσε λιγότερο αξιόπιστο για μακροχρόνια χρήση. Επιπλέον, το υψηλό όριο των 45 κύκλων υπερέβαινε τα καθιερωμένα ανώτατα όρια.
Αυτά τα τεχνικά ζητήματα επιδεινώθηκαν από την έλλειψη κατάλληλων μελετών επικύρωσης και τον ανεπαρκή προσδιορισμό των θετικών και αρνητικών ελέγχων. Η ταχεία ανάπτυξη και εφαρμογή του πρωτοκόλλου σήμαινε ότι αυτά τα ελαττώματα δεν εντοπίστηκαν μέσω των συνήθων διαδικασιών αξιολόγησης από ομοτίμους, με αποτέλεσμα να υπάρξουν πιθανές παγκόσμιες επιπτώσεις στην ακρίβεια των δοκιμών.
26. Πώς συγκρίθηκαν οι εξετάσεις SARS το 2003 με τις εξετάσεις COVID-19;
Οι εξετάσεις SARS το 2003 λειτουργούσαν βάσει αυστηρότερων κριτηρίων, απαιτώντας τόσο κλινικά συμπτώματα όσο και επιδημιολογικούς συνδέσμους πριν από τις εξετάσεις. Ο ιός μπορούσε να ανιχνευθεί μόνο στο 40% των ύποπτων περιπτώσεων, γεγονός που οδήγησε σε επιστημονική συζήτηση σχετικά με το ρόλο του ως αιτιολογικού παράγοντα. Ωστόσο, ο έλεγχος περιορίστηκε σε συμπτωματικές περιπτώσεις, αποτρέποντας τον εντοπισμό ασυμπτωματικών "κρουσμάτων".
Αντίθετα, ο έλεγχος COVID-19 το 2020 διεξήχθη πολύ ευρύτερα, περιλαμβάνοντας ασυμπτωματικά άτομα. Ο ορισμός του "κρούσματος" άλλαξε ώστε να βασίζεται αποκλειστικά σε θετικά αποτελέσματα PCR, ανεξάρτητα από τα συμπτώματα. Αυτή η θεμελιώδης διαφορά στη στρατηγική δοκιμών και στον ορισμό των κρουσμάτων δημιούργησε πολύ διαφορετικές εικόνες των δύο επιδημιών.
27. Ποια διδάγματα από τη γρίπη των χοίρων του 2009 επηρέασαν τις δοκιμές;
Η πανδημία γρίπης των χοίρων του 2009 έδειξε πώς οι δοκιμές PCR θα μπορούσαν να δημιουργήσουν ένα "κρούσμα" επιδημίας χωρίς αντίστοιχο κλινικό αντίκτυπο. Οι δοκιμές αυξήθηκαν δραματικά κατά τη διάρκεια του κανονικού τέλους της περιόδου γρίπης, δημιουργώντας ένα προφανές "πρώτο κύμα" το καλοκαίρι και ένα "δεύτερο κύμα" το φθινόπωρο, αν και τα ποσοστά θνησιμότητας παρέμειναν χαμηλά.
Η εμπειρία αυτή έδειξε πώς τα πρότυπα δοκιμών μπορούν να δημιουργήσουν την εντύπωση μιας επιδημίας μόνο μέσω των εργαστηριακών αποτελεσμάτων. Η οικονομική επιτυχία των κατασκευαστών δοκιμών και των φαρμακευτικών εταιρειών κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου δημιούργησε ένα πρότυπο που θα επαναλαμβανόταν με το COVID-19, συνδυάζοντας την ταχεία ανάπτυξη δοκιμών με την παγκόσμια διανομή.
28. Πώς οι προηγούμενες επιδημίες ιών διαμόρφωσαν την ανάπτυξη δοκιμών;
Κάθε μεγάλο ξέσπασμα μετά το SARS το 2003 ενίσχυσε τη συνεργασία μεταξύ Drosten και Landt, καθιερώνοντας ένα μοτίβο ταχείας ανάπτυξης και ανάπτυξης δοκιμών. Η ανταπόκρισή τους στη γρίπη των πτηνών, τη γρίπη των χοίρων και τον MERS δημιούργησε ένα πρότυπο για τη γρήγορη παραγωγή και διανομή δοκιμών μέσω καθιερωμένων εμπορικών καναλιών.
Αυτό το ιστορικό συνεργασίας κατέστησε δυνατή την εξαιρετικά ταχεία ανάπτυξη των δοκιμών COVID-19 στις αρχές του 2020. Οι καθιερωμένες σχέσεις μεταξύ των επιστημονικών αρχών, των κατασκευαστών δοκιμών και των παγκόσμιων δικτύων διανομής επέτρεψαν πρωτοφανή ταχύτητα στην ανάπτυξη των δοκιμών, αν και με το κόστος της κατάλληλης επικύρωσης.
29. Ποια μοτίβα εμφανίστηκαν σε διάφορες ιογενείς επιδημίες;
Προέκυψε ένα σταθερό μοτίβο ταχείας ανάπτυξης δοκιμών που ακολουθήθηκε από ευρεία εφαρμογή, συχνά πριν ολοκληρωθούν οι παραδοσιακές διαδικασίες επικύρωσης. Τα εμπορικά συμφέροντα επωφελήθηκαν σταθερά από την έγκαιρη είσοδο στην αγορά, ενώ μετά την εφαρμογή τέθηκαν ερωτήματα σχετικά με την ακρίβεια των δοκιμών και την κλινική καταλληλότητα.
Η οικονομική επιτυχία των κατασκευαστών δοκιμών και των φαρμακευτικών εταιρειών κατά τη διάρκεια κάθε επιδημίας δημιούργησε κίνητρα για ταχεία αντίδραση σε νέες απειλές. Αυτό το μοτίβο κορυφώθηκε στην αντιμετώπιση του COVID-19, όπου οι προηγούμενες σχέσεις και διαδικασίες επέτρεψαν την ανάπτυξη δοκιμών με πρωτοφανή ταχύτητα.
30. Πώς εξελίχθηκε το δοκιμαστικό μάρκετινγκ σε διάφορες επιδημίες;
Το δοκιμαστικό μάρκετινγκ εξελίχθηκε από σχετικά περιορισμένη ανάπτυξη κατά τη διάρκεια του SARS σε όλο και πιο παγκόσμια διανομή με κάθε επόμενη επιδημία. Η συνεργασία μεταξύ της TIB Molbiol και της Roche έγινε πιο εξελιγμένη, συνδυάζοντας την ταχεία ανάπτυξη δοκιμών με παγκόσμια δίκτυα διανομής και στρατηγικές μάρκετινγκ.
Μέχρι τη στιγμή του COVID-19, το σύστημα για την παγκόσμια εμπορία δοκιμών είχε καθιερωθεί, επιτρέποντας την άμεση παγκόσμια διανομή μέσω εμπορικών καναλιών και καναλιών βοήθειας. Η εξέλιξη αυτή αντανακλούσε την αυξανόμενη πολυπλοκότητα στο συνδυασμό της επιστημονικής αυθεντίας με τα εμπορικά συμφέροντα για την αντιμετώπιση κρουσμάτων ασθενειών.
31. Πώς διατέθηκαν οι δοκιμές στο εμπόριο σε παγκόσμιο επίπεδο;
Η TIB Molbiol διένειμε τα τεστ παγκοσμίως μέσω πολλαπλών καναλιών, συμπεριλαμβανομένων των άμεσων πωλήσεων, της συνεργασίας με τη Roche και των κυβερνητικών προγραμμάτων βοήθειας. Η ομάδα ταχείας εμπειρογνωμοσύνης για την υγεία του γερμανικού Υπουργείου Συνεργασίας και Ανάπτυξης βοήθησε στη διανομή κιτ δοκιμών σε όλη την Αφρική, τη Λατινική Αμερική και την Ασία. Η διανομή αυτή υποστηρίχθηκε από εργαστήρια που διοργάνωσαν από κοινού η Roche και η TIB Molbiol σε διάφορες περιοχές.
Οι δοκιμές έφτασαν σε διάφορες τοποθεσίες από τη Μολδαβία έως το Ντουμπάι μέσω των καναλιών του ΠΟΥ και εξαπλώθηκαν σε τοποθεσίες όπως η Μάλτα, το Πουέρτο Ρίκο και το Ιράν μέσω των Ηνωμένων Αραβικών Εμιράτων. Μέχρι τον Μάρτιο του 2020, τα κιτ δοκιμών προετοιμάζονταν για αποστολή στον ΠΟΥ προς περίπου 160 ευρώ το καθένα, με την TIB Molbiol να τρέχει την παραγωγή συνεχώς, συμπεριλαμβανομένων των νυχτερινών και των Σαββατοκύριακων για να καλύψει τη ζήτηση.
32. Ποιος ήταν ο οικονομικός αντίκτυπος της διανομής δοκιμών;
Οι οικονομικές επιπτώσεις ήταν σημαντικές τόσο για την TIB Molbiol όσο και για τη Roche. Η TIB Molbiol είχε προηγουμένως διπλασιάσει τον ετήσιο κύκλο εργασιών της κατά τη διάρκεια της επιδημίας της γρίπης των χοίρων το 2009 και η δοκιμή COVID-19 αντιπροσώπευε μια ακόμη μεγαλύτερη ευκαιρία. Για τη Roche, ως τη μεγαλύτερη φαρμακευτική εταιρεία στον κόσμο με κυρίαρχο τμήμα διαγνωστικών, οι εξετάσεις παρείχαν τόσο άμεσο κέρδος όσο και ένα μέσο απόκτησης νέων πελατών.
Το επιχειρηματικό μοντέλο επεκτάθηκε πέρα από τις δοκιμαστικές πωλήσεις. Η Roche παρείχε μια πλήρη αλυσίδα εφοδιασμού για την πανδημία, συμπεριλαμβανομένων των δοκιμών PCR, των δοκιμών αντισωμάτων και αργότερα των δοκιμών αντιγόνων, σχεδιάζοντας την προμήθεια εκατοντάδων εκατομμυρίων ταχέων δοκιμών μηνιαίως. Αυτή η ολοκληρωμένη προσέγγιση, σε συνδυασμό με την υφιστάμενη κυριαρχία της στην αγορά, δημιούργησε σημαντικές οικονομικές αποδόσεις.
33. Πώς τιμολογήθηκαν και διατέθηκαν στην αγορά οι δοκιμές/τεστ;
Οι δοκιμές προωθήθηκαν μέσω πολλαπλών καναλιών με διαφορετικές στρατηγικές τιμολόγησης. Η TIB Molbiol τοποθετήθηκε ως μια μετριοπαθής οικογενειακή επιχείρηση που προσφέρει λογικές τιμές, παρά το γεγονός ότι αποτελεί μέρος ενός δικτύου εταιρειών εκατομμυρίων δολαρίων με σημαντικές ιδιοκτησίες ακινήτων. Τα βασικά κιτ δοκιμών τιμολογούνταν σε περίπου 160 ευρώ το καθένα για τη διανομή στην ΠΟΥ.
Το μάρκετινγκ έδωσε έμφαση στην ταχύτητα και το πλεονέκτημα του πρωτοπόρου, με την TIB Molbiol και τη Roche να προωθούν την ικανότητά τους να ανταποκρίνονται γρήγορα στις αναδυόμενες απειλές. Οι εταιρείες αξιοποίησαν την εμπειρία τους από προηγούμενες επιδημίες, παρουσιάζοντας τους εαυτούς τους ως αξιόπιστους συνεργάτες στην αντιμετώπιση έκτακτων περιστατικών, ενώ παράλληλα έχτισαν μακροχρόνιες πελατειακές σχέσεις μέσω της υποδομής δοκιμών τους.
34. Ποιος ήταν ο ρόλος της αναπτυξιακής βοήθειας στη διανομή των δοκιμών;
Η αναπτυξιακή βοήθεια έγινε σημαντικός δίαυλος για τη διανομή των δοκιμών, ιδίως μέσω του γερμανικού Υπουργείου Συνεργασίας και Ανάπτυξης. Η ομάδα ταχείας εμπειρογνωμοσύνης για την υγεία του υπουργείου, στην οποία συμμετείχαν το RKI και το BNI, ενισχύθηκε από το προσωπικό του ιολογικού ινστιτούτου Drosten στο Charité για τη διανομή των κιτ δοκιμών TIB Molbiol σε παγκόσμιο επίπεδο.
Αν και παρουσιάστηκε ως ανθρωπιστική βοήθεια, η βοήθεια αυτή χρησίμευσε ουσιαστικά για την ανάπτυξη της αγοράς τόσο για την TIB Molbiol όσο και για τη Roche. Οι εταιρείες διεξήγαγαν εργαστήρια στην Αφρική στις αρχές της πανδημίας, συνδυάζοντας την εκπαίδευση με τη διανομή δοκιμαστικών κιτ, με την υποστήριξη οργανισμών όπως το Ίδρυμα Bill and Melinda Gates.
35. Πώς τα εμπορικά συμφέροντα επηρέασαν την ανάπτυξη δοκιμών;
Τα εμπορικά συμφέροντα διαμόρφωσαν την ανάπτυξη των δοκιμών από τα πρώτα στάδια. Η εξαιρετικά ταχεία ανάπτυξη και εφαρμογή των δοκιμών τον Ιανουάριο του 2020, πριν η αλληλουχία του ιού γίνει δημόσια διαθέσιμη, υποδηλώνει ότι η προετοιμασία είχε αρχίσει νωρίτερα. Η τεκμηρίωση αποκάλυψε ότι κιτ δοκιμών με αριθμούς παραγγελίας της Roche υπήρχαν πριν από τη δημοσίευση του πρωτοκόλλου στο Eurosurveillance.
Η επιρροή των εμπορικών συμφερόντων ήταν επίσης εμφανής στη σταδιακή απλούστευση των απαιτήσεων δοκιμών, καθιστώντας τις δοκιμές φθηνότερες και ευκολότερες στην εκτέλεση, αλλά λιγότερο αξιόπιστες. Η μείωση της εξέτασης από τρία γονίδια σε ένα γονίδιο κατέστησε τη διαδικασία πιο εμπορικά βιώσιμη, ενώ μείωσε την ειδικότητα και την ακρίβειά της.
36. Ποιες διαδικασίες έγκρισης απαιτήθηκαν για τις δοκιμές;
Οι διαδικασίες έγκρισης διέφεραν σημαντικά μεταξύ των διαφορετικών εκδόσεων δοκιμών. Το τεστ E-gene έλαβε τη σήμανση CE τον Φεβρουάριο του 2020, επιτρέποντας τη χρήση του για τη διάγνωση ασθενών στην Ευρώπη. Ωστόσο, άλλα στοιχεία του συστήματος δοκιμών, συμπεριλαμβανομένων των δοκιμών N-gene και RdRP, παρέμειναν ταξινομημένα μόνο για "ερευνητική χρήση", ωστόσο χρησιμοποιήθηκαν ευρέως σε διαγνωστικά περιβάλλοντα.
Αυτό δημιούργησε μια περίπλοκη κατάσταση όπου ορισμένες εξετάσεις χρησιμοποιούνταν διαγνωστικά χωρίς την κατάλληλη έγκριση. Οι απαιτήσεις έγκρισης φάνηκε να παρακάμπτονται σε πολλές περιπτώσεις μέσω εγκρίσεων έκτακτης ανάγκης ή απλώς με το να προχωρούν χωρίς επίσημη έγκριση κατά τη διάρκεια της κηρυχθείσας έκτακτης ανάγκης.
37. Πώς αντιμετωπίστηκαν οι άδειες έκτακτης ανάγκης;
Οι εγκρίσεις έκτακτης ανάγκης διέφεραν ανά περιοχή και δημιούργησαν ένα συνονθύλευμα εγκρίσεων. Ενώ η Roche έλαβε έγκριση χρήσης έκτακτης ανάγκης από το FDA των ΗΠΑ για τη δοκιμή Cobas SARS-CoV-2, οι δοκιμές TIB Molbiol/Roche Diagnostics LightMix Modular δεν έλαβαν αυτή την έγκριση. Ορισμένες χώρες, όπως η Ινδία, διεξήγαγαν τις δικές τους αξιολογήσεις και αρνήθηκαν να εγκρίνουν αυτές τις δοκιμές λόγω χαμηλής συμφωνίας.
Η κατάσταση έκτακτης ανάγκης φάνηκε να υπερισχύει των συνήθων διαδικασιών έγκρισης σε πολλές περιπτώσεις. Οι δοκιμές εφαρμόστηκαν ευρέως προτού λάβουν επίσημες εγκρίσεις, ενώ το επείγον της κατάστασης χρησιμοποιήθηκε για να δικαιολογήσει την παράκαμψη των τυπικών απαιτήσεων επικύρωσης.
38. Ποια τεκμηρίωση απαιτήθηκε για την έγκριση της δοκιμής;
Οι τυπικές απαιτήσεις τεκμηρίωσης περιλάμβαναν δεδομένα αναλυτικών επιδόσεων, μελέτες επικύρωσης και δοκιμές εξειδίκευσης. Ωστόσο, η ταχεία ανάπτυξη των δοκιμών, ιδίως τον Ιανουάριο του 2020, υποδηλώνει ότι οι απαιτήσεις αυτές δεν πληρούνται πλήρως. Το χρονοδιάγραμμα μεταξύ της ανάπτυξης των δοκιμών και της διανομής άφησε ελάχιστο χρόνο για την κατάλληλη τεκμηρίωση και επικύρωση.
Τα εγχειρίδια που συνόδευαν τις δοκιμές αποκάλυψαν ασυνέπειες ως προς την προβλεπόμενη χρήση τους στις διάφορες γλώσσες. Για παράδειγμα, η γερμανική έκδοση παρέλειπε κρίσιμους περιορισμούς που υπήρχαν σε άλλες γλωσσικές εκδόσεις, ιδίως όσον αφορά την απαίτηση για σημαντικά αναπνευστικά συμπτώματα στα υποκείμενα της δοκιμής.
39. Πώς προσέγγισαν οι διάφορες χώρες την έγκριση δοκιμών;
Οι χώρες διέφεραν σημαντικά ως προς την προσέγγισή τους για την έγκριση των δοκιμών. Ορισμένες, όπως η Ινδία, διενήργησαν ανεξάρτητες αξιολογήσεις και απέρριψαν τις δοκιμές που δεν πληρούσαν τα πρότυπά τους. Άλλες φάνηκε να αποδέχονται δοκιμές με βάση τις συστάσεις του ΠΟΥ ή εγκρίσεις έκτακτης ανάγκης από άλλες δικαιοδοσίες χωρίς πρόσθετη επικύρωση.
Ο επείγων χαρακτήρας της κατάστασης οδήγησε πολλές χώρες να δεχθούν δοκιμές χωρίς τις συνήθεις διαδικασίες έγκρισής τους. Αυτό δημιούργησε μια κατάσταση όπου δοκιμές που δεν θα μπορούσαν να εγκριθούν υπό κανονικές συνθήκες εφαρμόστηκαν ευρέως με βάση τις διατάξεις έκτακτης ανάγκης ή τις οδηγίες του ΠΟΥ.
40. Ποια πρότυπα εφαρμόστηκαν για την επικύρωση των δοκιμών;
Ενώ οι τυπικές διαδικασίες επικύρωσης συνήθως απαιτούν εκτεταμένες δοκιμές για την ειδικότητα, την ευαισθησία και τη διασταυρούμενη αντιδραστικότητα, οι απαιτήσεις αυτές φάνηκε να χαλαρώνουν κατά τη διάρκεια της πανδημίας. Οι κατευθυντήριες γραμμές MIQE, οι οποίες καθορίζουν τα ελάχιστα πρότυπα για τα πειράματα PCR, δεν τηρήθηκαν αυστηρά, ιδίως όσον αφορά τα κατώτατα όρια κύκλων και τις διαδικασίες επικύρωσης.
Η ταχεία ανάπτυξη των δοκιμών έδειξε ότι τα ολοκληρωμένα πρότυπα επικύρωσης τέθηκαν σε κίνδυνο προς όφελος της ταχύτητας. Αυτό ήταν ιδιαίτερα εμφανές στην αποδοχή υψηλών ορίων κύκλων (45 κύκλοι) που υπερέβαιναν τα συνιστώμενα μέγιστα και στις μειωμένες απαιτήσεις για επιβεβαιωτικές δοκιμές.
41. Ποια μέτρα ποιοτικού ελέγχου εφαρμόστηκαν;
Ο ποιοτικός έλεγχος των δοκιμών PCR λειτούργησε μέσω διαφορετικών επιπέδων εποπτείας. Οι εργαστηριακοί ιατροί ήταν υποχρεωμένοι να διασφαλίζουν την ποιοτικά διασφαλισμένη αξιολόγηση των δοκιμών και τα εργαστήρια έπρεπε να συμμετέχουν σε τακτικές διεργαστηριακές συγκρίσεις για τη διασφάλιση της ποιότητας. Η INSTAND, μια εταιρεία για τη διασφάλιση της ποιότητας στα ιατρικά εργαστήρια, διεξήγαγε δοκιμές δακτυλίου για την αξιολόγηση της απόδοσης των δοκιμών.
Ωστόσο, αυτά τα μέτρα ποιότητας αποκάλυψαν ανησυχητικά αποτελέσματα. Οι δοκιμές δακτυλίου INSTAND έδειξαν ότι τα δείγματα χωρίς ιούς και τα δείγματα που περιείχαν κορονοϊούς του κοινού κρυολογήματος παρήγαγαν ψευδώς θετικά αποτελέσματα - περίπου 1% για ορισμένα δείγματα και έως 7% για άλλα. Τα ευρήματα αυτά υπέδειξαν ότι τα μέτρα ποιοτικού ελέγχου εντόπιζαν σημαντικά προβλήματα που δεν αντιμετωπίζονταν επαρκώς στην κλινική πρακτική.
42. Πώς αντιμετωπίστηκαν τα ψευδώς θετικά αποτελέσματα;
Τα ψευδώς θετικά αποτελέσματα έλαβαν εκπληκτικά λίγη προσοχή παρά τη δυνητική τους σημασία. Ενώ το Ινστιτούτο Robert Koch απέφυγε να ασχοληθεί άμεσα με ερωτήματα σχετικά με τα ψευδώς θετικά ποσοστά, ορισμένα εργαστήρια αναγνώρισαν το ζήτημα. Για παράδειγμα, ένα μεγάλο εργαστήριο στη Βαυαρία ανέφερε 58 ψευδώς θετικά αποτελέσματα από 60 θετικές εξετάσεις, αποδίδοντας τα σφάλματα σε ελλείψεις αντιδραστηρίων και προβλήματα συμβατότητας.
Είναι αξιοσημείωτο ότι, αντί να αυξηθεί ο έλεγχος των θετικών αποτελεσμάτων, η απάντηση στα ψευδώς θετικά αποτελέσματα ήταν συχνά η μείωση των απαιτήσεων επιβεβαίωσης. Η καθοδήγηση του ΠΟΥ τον Μάρτιο του 2020 που επιτρέπει τη διενέργεια δοκιμών με ένα μόνο γονίδιο σε περιοχές με διαπιστωμένη κυκλοφορία του COVID-19 μείωσε ουσιαστικά τα πρότυπα για την επιβεβαίωση των θετικών αποτελεσμάτων, αυξάνοντας τα ποσοστά ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων.
43. Ποια θέματα διασταυρούμενης αντίδρασης εντοπίστηκαν;
Η διασταυρούμενη αντιδραστικότητα προέκυψε ως σημαντική ανησυχία, ιδίως με το τεστ E-gene. Οι δοκιμές δακτυλίου της INSTAND αποκάλυψαν ότι οι δοκιμές θα μπορούσαν να αντιδράσουν θετικά σε άλλους κορονοϊούς, με έναν κορονοϊό του κοινού κρυολογήματος (HCoV 229E) να παράγει ψευδώς θετικά αποτελέσματα σε σχεδόν 7% των περιπτώσεων. Το ζήτημα αυτό κατέστη ιδιαίτερα σημαντικό δεδομένου ότι το τεστ E-gene χρησιμοποιούνταν όλο και περισσότερο μόνο του χωρίς επιβεβαιωτικές δοκιμές.
Το ενδεχόμενο διασταυρούμενης αντιδραστικότητας δημιούργησε ιδιαίτερες ανησυχίες σχετικά με τις δοκιμές σε περιβάλλοντα όπως τα σφαγεία, όπου μπορεί να υπάρχουν ζωικοί κορονοϊοί, και σχετικά με τα αυξημένα ψευδώς θετικά αποτελέσματα κατά τη διάρκεια των κανονικών περιόδων κρυολογήματος και γρίπης, όταν άλλοι κορονοϊοί κυκλοφορούν ευρύτερα. Παρά τις ανησυχίες αυτές, το θέμα έλαβε ελάχιστη προσοχή στα πρωτόκολλα δοκιμών.
44. Πώς διατηρήθηκαν τα εργαστηριακά πρότυπα;
Τα εργαστηριακά πρότυπα διατηρούνταν θεωρητικά μέσω των απαιτήσεων για εξειδικευμένο προσωπικό, της τακτικής συμμετοχής σε προγράμματα διασφάλισης ποιότητας και της τήρησης των εθνικών και διεθνών κατευθυντήριων γραμμών. Ωστόσο, η πίεση των μεγάλων όγκων δοκιμών και οι ελλείψεις αντιδραστηρίων ανάγκαζαν μερικές φορές τα εργαστήρια να τροποποιούν τις διαδικασίες τους ή να χρησιμοποιούν εναλλακτικούς παράγοντες ανίχνευσης.
Η διατήρηση των προτύπων αποτέλεσε ιδιαίτερη πρόκληση καθώς οι δοκιμές επεκτάθηκαν ταχύτατα και οι απαιτήσεις απλοποιήθηκαν. Η μετάβαση από τη δοκιμή πολλαπλών γονιδίων στη δοκιμή ενός γονιδίου, ενώ έκανε τη διαδικασία ευκολότερη και ταχύτερη, αντιπροσώπευε μια σημαντική μείωση των εργαστηριακών προτύπων που είχαν καθιερωθεί μέσω της προηγούμενης εμπειρίας με τα διαγνωστικά PCR.
45. Ποιες διαδικασίες επικύρωσης απαιτήθηκαν;
Οι επίσημες διαδικασίες επικύρωσης απαιτούσαν εκτεταμένες δοκιμές αναλυτικής και κλινικής ειδικότητας, συμπεριλαμβανομένων ελέγχων διασταυρούμενης αντιδραστικότητας με άλλα παθογόνα. Για τις εμπορικές δοκιμές, οι κατασκευαστές έπρεπε να συλλέγουν δεδομένα επιδόσεων και να επικυρώνουν τις αναλύσεις τους. Οι εσωτερικές δοκιμές απαιτούσαν επικύρωση από το εκτελούν εργαστήριο σύμφωνα με τις εθνικές και διεθνείς κατευθυντήριες γραμμές.
Ωστόσο, η πρωτοφανής ταχύτητα ανάπτυξης και ανάπτυξης των δοκιμών τον Ιανουάριο του 2020 κατέστησε αδύνατη την ενδελεχή επικύρωση. Τα έγγραφα αποκάλυψαν ότι εμπορικά κιτ δοκιμών με αριθμούς παραγγελίας της Roche υπήρχαν πριν από τη δημοσίευση του πρωτοκόλλου, γεγονός που υποδηλώνει ότι η εμπορική παραγωγή προηγήθηκε της κατάλληλης επιστημονικής επικύρωσης.
46. Πώς τα αποτελέσματα των δοκιμών επηρέασαν τους ορισμούς των περιπτώσεων;
Τα αποτελέσματα των δοκιμών άλλαξαν ριζικά τον ορισμό των περιπτώσεων COVID-19. Σε αντίθεση με προηγούμενες επιδημίες όπως ο SARS, όπου ο ορισμός των κρουσμάτων απαιτούσε τόσο κλινικά συμπτώματα όσο και επιδημιολογικούς δεσμούς, τα κρούσματα του COVID-19 ορίστηκαν αποκλειστικά από τα θετικά αποτελέσματα της PCR, ανεξάρτητα από τα συμπτώματα ή την κλινική εικόνα. Αυτό σήμαινε ότι ασυμπτωματικά άτομα με θετικές εξετάσεις υπολογίζονταν ως κρούσματα.
Αυτή η αλλαγή στον ορισμό της υπόθεσης είχε εκτεταμένες επιπτώσεις. Η εξάρτηση μόνο από τη δοκιμή PCR σήμαινε ότι ο αριθμός των "κρουσμάτων" μπορούσε να αυξηθεί δραματικά χωρίς αντίστοιχη κλινική ασθένεια. Η εξέταση ασυμπτωματικών ατόμων, σε συνδυασμό με πιθανά ψευδώς θετικά αποτελέσματα, δημιούργησε μια κατάσταση όπου οι αριθμοί των κρουσμάτων μπορεί να μην αντικατοπτρίζουν την πραγματική επιβάρυνση της νόσου.
47. Ποιος ήταν ο αντίκτυπος των δοκιμών στις πολιτικές αποφάσεις;
Οι δοκιμές έγιναν ο κύριος μοχλός των αντιδράσεων της δημόσιας υγείας και των πολιτικών αποφάσεων. Οι αριθμοί των κρουσμάτων που προέκυψαν από τις δοκιμές PCR επηρέασαν τις αποφάσεις κλειδώματος, τις απαιτήσεις κοινωνικής απομάκρυνσης και άλλα μέτρα περιορισμού. Ωστόσο, οι αποφάσεις αυτές βασίστηκαν σε ακατέργαστους θετικούς αριθμούς δοκιμών χωρίς να λαμβάνονται υπόψη τα ποσοστά ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων ή η κλινική σημασία.
Η εστίαση στα αποτελέσματα των εξετάσεων και όχι στα κλινικά αποτελέσματα αποτέλεσε σημαντική απόκλιση από τις παραδοσιακές επιδημιολογικές προσεγγίσεις. Αυτή η προσέγγιση πολιτικής με επίκεντρο τις δοκιμές συνεχίστηκε ακόμη και όταν προέκυψαν ερωτήματα σχετικά με την ακρίβεια των δοκιμών και την κλινική σημασία των θετικών αποτελεσμάτων σε υψηλά όρια κύκλου.
48. Πώς αντιμετωπίστηκαν οι ασυμπτωματικές περιπτώσεις;
Ο χειρισμός των ασυμπτωματικών κρουσμάτων αποτέλεσε σημαντική απόκλιση από τα προηγούμενα πρωτόκολλα επιδημίας. Ενώ προηγούμενες επιδημίες όπως ο SARS επικεντρώνονταν σε συμπτωματικά κρούσματα, ο έλεγχος του COVID-19 περιελάμβανε εκτεταμένο έλεγχο ασυμπτωματικών ατόμων. Οι θετικές εξετάσεις σε αυτά τα άτομα αντιμετωπίστηκαν ως κρούσματα παρά την απουσία συμπτωμάτων.
Αυτή η προσέγγιση των ασυμπτωματικών περιπτώσεων δημιούργησε ερωτήματα σχετικά με την κλινική σημασία των θετικών αποτελεσμάτων των δοκιμών και την καταλληλότητα της ανίχνευσης επαφών και των μέτρων απομόνωσης για άτομα που δεν παρουσίαζαν σημεία ασθένειας. Η πρακτική αυτή ερχόταν σε αντίθεση με προηγούμενες δηλώσεις εμπειρογνωμόνων, συμπεριλαμβανομένου του Drosten, οι οποίοι είχαν προηγουμένως συστήσει να μην γίνεται δοκιμή PCR σε ασυμπτωματικά άτομα.
49. Ποιος ήταν ο ρόλος των δοκιμών στην αντιμετώπιση της πανδημίας;
Οι δοκιμές αποτέλεσαν τον ακρογωνιαίο λίθο της αντιμετώπισης της πανδημίας, με τα θετικά αποτελέσματα της PCR να καθορίζουν τον αριθμό των κρουσμάτων, τις πολιτικές αποφάσεις και τα μέτρα δημόσιας υγείας. Η δυνατότητα διενέργειας μαζικών δοκιμών με τη χρήση PCR δημιούργησε ένα νέο παράδειγμα όπου τα εργαστηριακά αποτελέσματα και όχι οι κλινικές παρατηρήσεις καθόριζαν την έκταση και τη σοβαρότητα της επιδημίας.
Αυτή η προσέγγιση με επίκεντρο τις δοκιμές αντιπροσώπευε μια σημαντική μετατόπιση από την παραδοσιακή διαχείριση επιδημιών, όπου οι κλινικές περιπτώσεις και τα αποτελέσματα έπαιζαν κεντρικότερο ρόλο. Η εξάρτηση από τις δοκιμές PCR, ιδίως με υψηλά όρια κύκλου και μειωμένες απαιτήσεις επιβεβαίωσης, δημιούργησε μια κατάσταση όπου η αντίδραση στις δοκιμές θα μπορούσε να ενισχύσει την προφανή κλίμακα της πανδημίας.
50. Πώς ανταποκρίθηκαν οι κυβερνητικές υπηρεσίες στις ανησυχίες για τις δοκιμές;
Οι κυβερνητικές υπηρεσίες αποδείχθηκαν συχνά ανθεκτικές στην αντιμετώπιση των ανησυχιών σχετικά με την ακρίβεια και την αξιοπιστία των δοκιμών. Το γερμανικό Υπουργείο Υγείας απέτυχε να απαντήσει σε επίσημα ερωτήματα σχετικά με τα ψευδώς θετικά ποσοστά και την ειδικότητα των εξετάσεων, υπερβαίνοντας τις νόμιμες προθεσμίες απάντησης. Το Ινστιτούτο Robert Koch έδωσε παραπλανητικές απαντήσεις σε παρόμοιες ερωτήσεις, αποφεύγοντας να ασχοληθεί άμεσα με τις ανησυχίες σχετικά με την ακρίβεια των εξετάσεων.
Αυτό το μοτίβο μη ανταπόκρισης ή υπεκφυγής υποδήλωνε μια απροθυμία να εξεταστούν πιθανά προβλήματα με το καθεστώς δοκιμών, ακόμη και όταν υπήρχαν στοιχεία για σημαντικά προβλήματα με τα ψευδώς θετικά αποτελέσματα και την εξειδίκευση των δοκιμών. Η έλλειψη διαφάνειας από τις κυβερνητικές υπηρεσίες καθιστούσε δύσκολη την εκτίμηση του πραγματικού αντίκτυπου των προβλημάτων των δοκιμών στην αντιμετώπιση της πανδημίας.
Αν σας άρεσε αυτό το άρθρο, μοιραστείτε το, εγγραφείτε για να λαμβάνετε περισσότερο περιεχόμενο και αν θέλετε να στηρίξετε το συνεχές έργο μου, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε τον παρακάτω σύνδεσμο.
---Δικτυογραφία :
The PCR Disaster: On the genesis and evolution of the "Drosten test"
