Monkey Business [ Bρωμοδουλειά ] - Ευλογιά των Πιθήκων / Monkey Pox (Mpox)
Φάκελλος "ΙΟΛΟΓΙΑ"
Μετάφραση: Απολλόδωρος
24 Μαΐου 2022 | ViroLIEgy | Διαβάστε το εδώ
Μπορείτε να κάνετε εφάπαξ ή επαναλαμβανόμενες δωρεές μέσω του Ko-Fi:
Αν έχετε προσέξει τις (ψευδείς) ειδήσεις τελευταία, μπορεί να έχετε ακούσει κάτι για την εμφάνιση κρουσμάτων ευλογιάς των πιθήκων σε διάφορα μέρη του κόσμου. Κανονικά, οι περισσότεροι άνθρωποι δεν θα έδιναν σημασία σε τίτλους που αφορούν την ευλογιά των πιθήκων, όμως τα κύρια μέσα ενημέρωσης καταβάλλουν μεγάλη προσπάθεια για να διασφαλίσουν ότι αυτοί οι τίτλοι θα τραβήξουν την προσοχή σας. Όπως φαίνεται, οι συνήθεις ύποπτοι, όπως ο Πρόεδρος Biden, το CDC και ο ΠΟΥ, είναι όλοι εμπλεκόμενοι στην έκκληση συναγερμού για αυτό που θεωρείται μια ήπια και σχετικά δύσκολο να μεταδοθεί "ιογενής" ασθένεια.
Αυτό μας κάνει να αναρωτιόμαστε τι (ή ποιος) μπορεί να κρύβεται πίσω από μια τέτοια προσπάθεια να ενσπείρουν τον φόβο σε έναν πληθυσμό που ήδη βρίσκεται σε κατάσταση υψηλής εγρήγορσης λόγω της εμφάνισης του "6ου κύματος του Covid-19". Δεν είναι σαν να τα έχουν προγραμματίσει όλα αυτά πολύ πριν, έτσι δεν είναι;
Τον Μάρτιο του 2021, η Πρωτοβουλία για την Πυρηνική Απειλή (Nuclear Threat Initiative-NTI), μια μη κερδοσκοπική οργάνωση που δημιουργήθηκε το 2001 από τον Γερουσιαστή Sam Nunn και τον φιλάνθρωπο Ted Turner, διοργάνωσε μια άσκηση πανδημίας ευλογιάς των πιθήκων που προβλέφθηκε ότι θα λάμβανε χώρα τον Μάιο του 2022. Τι ενδιαφέρουσα σύμπτωση, σωστά; Αν δεν γνωρίζετε την NTI, σύμφωνα με την αρχική σελίδα της οργάνωσης, είναι μια "μη κερδοσκοπική, μη κομματική παγκόσμια οργανισμός ασφάλειας που επικεντρώνεται στη μείωση των πυρηνικών και βιολογικών απειλών που θέτουν σε κίνδυνο την ανθρωπότητα." Σύμφωνα με τη σελίδα της Wikipedia, η NTI "λειτουργεί ως Γραμματεία για το 'Project Nuclear Security', σε συνεργασία με το Hoover Institution στο Stanford. Καθοδηγείται από τους πρώην Υπουργούς Εξωτερικών George P. Shultz, πρώην Υπουργό Άμυνας William J. Perry, πρώην Υπουργό Εξωτερικών Henry A. Kissinger και τον Nunn" που είναι συλλογικά γνωστοί ως οι "τέσσερις καβαλάρηδες της πυρηνικής αποκάλυψης." Τίποτα ύποπτο σε αυτό.
Αν δούμε την περίληψη της άσκησης πανδημίας ευλογιάς των πιθήκων, μπορούμε να αποκομίσουμε κάποιες πρόσθετες πληροφορίες:
Ενίσχυση Παγκόσμιων Συστημάτων για την Πρόληψη και Ανταπόκριση σε Βιολογικές Απειλές Υψηλής Σημασίας
"Τον Μάρτιο του 2021, η NTI συνεργάστηκε με τη Διάσκεψη Ασφάλειας του Μονάχου για να πραγματοποιήσει μια επιτραπέζια άσκηση με στόχο τη μείωση των βιολογικών απειλών υψηλής σημασίας. Η άσκηση εξέτασε τα κενά στις εθνικές και διεθνείς αρχιτεκτονικές βιοασφάλειας και προετοιμασίας για πανδημία—εξερευνώντας ευκαιρίες για τη βελτίωση των δυνατοτήτων πρόληψης και ανταπόκρισης σε βιολογικά συμβάντα υψηλής σημασίας. Οι συμμετέχοντες περιλάμβαναν 19 ανώτερους ηγέτες και ειδικούς από την Αφρική, τις Αμερικές, την Ασία και την Ευρώπη με δεκαετίες συνδυασμένης εμπειρίας στη δημόσια υγεία, τη βιοτεχνολογία, την παγκόσμια ασφάλεια και τη φιλανθρωπία."
Περίληψη Άσκησης
"Αναπτύχθηκε σε συνεργασία με τεχνικούς και πολιτικούς εμπειρογνώμονες, το φανταστικό σενάριο της άσκησης παρουσίασε μια θανατηφόρα, παγκόσμια πανδημία που περιλάμβανε ένα ασυνήθιστο στέλεχος του ιού της ευλογιάς των πιθήκων που εμφανίστηκε για πρώτη φορά στο φανταστικό έθνος της Brinia και εξαπλώθηκε παγκοσμίως σε διάστημα 18 μηνών. Τελικά, το σενάριο της άσκησης αποκάλυψε ότι το αρχικό ξέσπασμα προκλήθηκε από τρομοκρατική επίθεση με τη χρήση ενός παθογόνου οργανισμού που κατασκευάστηκε σε εργαστήριο με ανεπαρκείς διατάξεις βιοασφάλειας και βιοασφάλειας και αδύναμη εποπτεία. Μέχρι το τέλος της άσκησης, η φανταστική πανδημία είχε ως αποτέλεσμα περισσότερα από τρία δισεκατομμύρια κρούσματα και 270 εκατομμύρια θανάτους παγκοσμίως.
Οι συζητήσεις καθ' όλη τη διάρκεια της επιτραπέζιας άσκησης δημιούργησαν μια σειρά πολύτιμων πληροφοριών και βασικών ευρημάτων. Το σημαντικότερο, οι συμμετέχοντες στην άσκηση συμφώνησαν ότι, παρά τις βελτιώσεις που επακολούθησαν την παγκόσμια αντίδραση στον COVID-19, το διεθνές σύστημα πρόληψης, ανίχνευσης, ανάλυσης, προειδοποίησης και αντίδρασης στην πανδημία είναι εντελώς ανεπαρκές για την αντιμετώπιση των τρεχουσών και αναμενόμενων μελλοντικών προκλήσεων. Τα κενά στην διεθνή αρχιτεκτονική βιοασφάλειας και προετοιμασίας για πανδημίες είναι εκτεταμένα και θεμελιώδη, υπονομεύοντας την ικανότητα της διεθνούς κοινότητας να προλαμβάνει και να οργανώνει αποτελεσματικές αντιδράσεις σε μελλοντικά βιολογικά γεγονότα—συμπεριλαμβανομένων αυτών που θα μπορούσαν να αντιστοιχούν στις επιπτώσεις του COVID-19 ή να προκαλέσουν ζημίες που είναι σημαντικά πιο σοβαρές."
https://www.nti.org/wp-content/uploads/2021/11/NTI_Paper_BIO-TTX_Final.pdf
Ανοίγοντας την αναφορά του γεγονότος, βρίσκουμε μερικούς ενδιαφέροντες εκπροσώπους μεταξύ των 19 ανώτερων ηγετών και ειδικών που παρακολούθησαν την άσκηση, συμπεριλαμβανομένων των:
1.- Dr. Ruxandra Draghia-Akli,
Παγκόσμια Επικεφαλής, Johnson & Johnson Global Public Health R&D,
Janssen Research & Development
2.- Dr. Chris Elias, Πρόεδρος, Global Development Division, Bill & Melinda Gates Foundation
3.- Sir Jeremy Farrar,
Διευθυντής, Wellcome Trust
4.- Dr. George Gao,
Γενικός Διευθυντής, Κέντρο Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων της Κίνας (China CDC),
Αντιπρόεδρος, National Natural Science Foundation of China (NSFC),
Διευθυντής και Καθηγητής, CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Κοσμήτορας, Ιατρική Σχολή, University of Chinese Academy of Sciences
5.- Dr. John Nkengasong,
Διευθυντής, Africa Centres for Disease Control and Prevention
6.- Dr. Michael Ryan,
Εκτελεστικός Διευθυντής, Πρόγραμμα Υγειονομικών Εκτάκτων Αναγκών του ΠΟΥ
7.- Dr. Petra Wicklandt,
Επικεφαλής Εταιρικών Υποθέσεων, Merck KGaA
Έχουμε εκπροσώπους από φαρμακευτικές εταιρείες (J&J, Merck, GlaxoSmithKline), το Ίδρυμα Bill και Melinda Gates, τα Κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων της Αφρικής και της Κίνας (CDC), καθώς και τον ΠΟΥ. Όπως πάντα φαίνεται να συμβαίνει, οι ίδιοι άνθρωποι που ελέγχουν την αντίδραση και κερδίζουν από αυτές τις "πανδημίες" είναι αυτοί που πραγματοποιούν τις ασκήσεις που "προβλέπουν" τις πανδημίες. Δεν με πιστεύετε; Ας κάνουμε μια αναδρομή στο παρελθόν, στον Οκτώβριο του 2019, με το Event 201:
**Event 201**
"Το Κέντρο Ασφάλειας Υγείας του Johns Hopkins, σε συνεργασία με το Παγκόσμιο Οικονομικό Φόρουμ και το Ίδρυμα Bill και Melinda Gates, διοργάνωσε το Event 201, μια άσκηση πανδημίας υψηλού επιπέδου, στις 18 Οκτωβρίου 2019, στη Νέα Υόρκη. Η άσκηση ανέδειξε περιοχές όπου οι δημόσιες/ιδιωτικές συνεργασίες θα είναι απαραίτητες κατά την ανταπόκριση σε μια σοβαρή πανδημία για να μειωθούν οι μεγάλες οικονομικές και κοινωνικές συνέπειες."
**Το σενάριο του Event 201**
"Το Event 201 προσομοιώνει την εμφάνιση ενός νέου ζωονοτικού κορονοϊού που μεταδίδεται από νυχτερίδες σε χοίρους και έπειτα σε ανθρώπους, καταλήγοντας να γίνεται αποτελεσματικά μεταδοτικός από άνθρωπο σε άνθρωπο, οδηγώντας σε μια σοβαρή πανδημία. Το παθογόνο και η ασθένεια που προκαλεί μοντελοποιούνται κυρίως με βάση το SARS, αλλά είναι πιο μεταδοτικό στην κοινότητα από άτομα με ήπια συμπτώματα."
https://www.centerforhealthsecurity.org/event201/about
Όπως φαίνεται, το Ίδρυμα Bill και Melinda Gates εμπλέκεται και πάλι έντονα σε αυτήν την άσκηση "πανδημίας" που προέβλεψε με ακρίβεια την έξαρση ενός "κορονοϊού", οδηγώντας σε μια πανδημία 6 εβδομάδες πριν την εμφάνιση της "πραγματικής πανδημίας". Μεταξύ των συμμετεχόντων στο Event 201 που επίσης συμμετείχαν στην άσκηση της NTI για την ευλογιά των πιθήκων ήταν:
1.- Dr. Chris Elias, Πρόεδρος,
Global Development Division, Bill & Melinda Gates Foundation
2.- Dr. George Gao,
Γενικός Διευθυντής, Κέντρο Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων της Κίνας (China CDC)
Βρίσκουμε επίσης εκπροσώπους από την Johnson & Johnson (ξανά), τα Ηνωμένα Έθνη και το CDC.
Γιατί βλέπουμε τακτικά τέτοιες ασκήσεις και εκπαιδεύσεις να λαμβάνουν χώρα πριν τα ίδια γεγονότα εκτυλιχθούν; Είναι αυτές οι ασκήσεις πανδημίας, που χρηματοδοτούνται από τους ίδιους παίκτες που με τρόπο ανατριχιαστικό προβλέπουν τον ίδιο τον "ιό" μέσα σε λίγους μήνες, απλώς συμπτώσεις ή κάτι εντελώς διαφορετικό;
Αν και η χρονική συγκυρία αυτών των ασκήσεων πανδημίας θα έπρεπε να θέτει σοβαρά ερωτήματα για το γεγονός ότι αυτή η προώθηση από τα μέσα ενημέρωσης είναι ένα προσεκτικά ελεγχόμενο αφήγημα, η απειλή του "ιού" πίσω από τις ιστορίες των μέσων ενημέρωσης είναι τόσο φανταστική όσο αυτή που παρουσιάζεται στις ασκήσεις. Αν διαβάζετε αυτό το άρθρο, είτε αμφισβητείτε το επίσημο αφήγημα είτε καταλαβαίνετε ότι όποιος και να είναι ο "ιός" που επιλέγεται, δεν έχει ποτέ αποδειχθεί επιστημονικά ότι υπάρχει. Αυτό ισχύει για την ευλογιά των πιθήκων όπως και για οποιονδήποτε άλλο "ιό".
Προηγουμένως, έγραψα για το πώς η ευλογιά των πιθήκων ήταν απλώς η αναδιαμόρφωση και η επανατοποθέτηση της ευλογιάς. Το 1958, ο ΠΟΥ αποφάσισε να προωθήσει την εξάλειψη της ευλογιάς μέσω της χρήσης αυτού που θεωρείται το πιο θανατηφόρο εμβόλιο γνωστό στην ανθρωπότητα, αν και η ευλογιά είχε σταδιακά μειωθεί κατά τις προηγούμενες δεκαετίες. Κατά σύμπτωση (ή όχι), ο "ιός" της ευλογιάς των πιθήκων "ανακαλύφθηκε" σε δύο αποικίες πιθήκων δοκιμών σε ένα δανέζικο εργαστήριο την ίδια χρονιά. Στο προηγούμενο άρθρο μου, δεν αναφέρθηκα στις δημοσιεύσεις που σχετίζονται με την απομόνωση αυτού του "ιού" σε πιθήκους και ανθρώπους, οπότε φαίνεται πως είναι η κατάλληλη στιγμή να το κάνω τώρα. Δεδομένου ότι το αρχικό έγγραφο του 1958 είναι αρκετά μακροσκελές, θα επικεντρωθώ μόνο στις μεθόδους που χρησιμοποιήθηκαν για την "απομόνωση" του "ιού" της ευλογιάς των πιθήκων αρχικά στους πιθήκους. Θα μπορέσετε να δείτε ότι, όπως πάντα, πρόκειται απλώς για μια ακόμη μη καθαρισμένη δημιουργία καλλιέργειας ιστών/κυττάρων που συγκρίθηκε με άλλες μη καθαρισμένες καλλιέργειες μέσω έμμεσων ανοσολογικών δοκιμών. Σε κανένα σημείο τα σωματίδια που θεωρούνταν ευλογιά των πιθήκων δεν καθαρίστηκαν και δεν απομονώθηκαν απευθείας από τα υγρά των πιθήκων. Μετά τον διαχωρισμό από τους πιθήκους, τα δείγματα υποβλήθηκαν αμέσως σε διάφορα χημικά πρόσθετα όπως το φυσιολογικό διάλυμα McIlvain’s και το Bacto-tryptose "Difco" που περιείχαν Πενικιλίνη και Στρεπτομυκίνη.
Τα δείγματα στη συνέχεια εμβολιάστηκαν στη χοριο-αλλαντοειδή μεμβράνη εμβρύων Leghorn ηλικίας 11-12 ημερών και σε κυτταροκαλλιέργειες νεφρού πιθήκου, ανθρώπινου αμνίου και κυττάρων HeLa. Είναι επίσης ενδιαφέρον να σημειωθεί ότι ο "ιός" αναφέρθηκε ότι καλλιεργήθηκε και "απομονώθηκε" από υγιείς πιθήκους, αποδεικνύοντας έτσι ότι ό,τι κι αν "απομόνωναν" δεν ήταν καθόλου παθογόνο, καθώς αποτυγχάνει στο πρώτο αξίωμα του Koch για την απόδειξη ότι ένα μικρόβιο προκαλεί ασθένεια:
1. Ο μικροοργανισμός πρέπει να βρίσκεται σε αφθονία σε όλες τις περιπτώσεις όσων πάσχουν από τη νόσο, αλλά δεν πρέπει να βρίσκεται σε υγιή άτομα.
**Μια ασθένεια που μοιάζει με ευλογιά σε cynomolgus πιθήκους**
"Κατά τη διάρκεια του καλοκαιριού και του φθινοπώρου του 1958 παρατηρήθηκαν δύο ξεσπάσματα μιας μη θανατηφόρας ασθένειας που μοιάζει με ευλογιά σε cynomolgus πιθήκους στην αποικία πιθήκων σε αυτό το ινστιτούτο. Και τα δύο ξεσπάσματα συνέβησαν αρκετά αργά αφότου οι πίθηκοι είχαν παραληφθεί, δηλαδή 51 και 62 ημέρες μετά την άφιξή τους, και μόνο ένα μικρό ποσοστό των εκτεθειμένων ζώων παρουσίασε σημάδια ασθένειας.
Αυτό το έγγραφο παρουσιάζει παρατηρήσεις σχετικά με τις επιδημιολογικές και κλινικές εκδηλώσεις της ασθένειας. Η απομόνωση ενός ιού από τα ασθενή ζώα θα περιγραφεί επίσης, καθώς και μερικές μελέτες σχετικά με τις ιδιότητες του παράγοντα, ο οποίος σε αυτό το έγγραφο θα αναφέρεται ως ιός της ευλογιάς των πιθήκων.
**Υλικά και μέθοδοι**
Απομόνωση του ιού: Υλικό για εμβολιασμό αυγών συλλέχθηκε από τα φλυκταινώδη εξανθήματα και αραιώθηκε περίπου 1:10 σε 0.004 hl. φυσιολογικό διάλυμα McIlvain’s pH 7.2. Υλικό για πειράματα κυτταροκαλλιέργειας συλλέχθηκε από τα φλυκταινώδη εξανθήματα με βαμβακερό στυλεό, ο οποίος βυθίστηκε αμέσως σε 2 ml Bacto-tryptose “Difco”. Και οι δύο διαλύτες περιείχαν Πενικιλίνη (100 mg ανά ml) και Στρεπτομυκίνη (0.1 mg ανά ml). Μετά την αποσαφήνιση μέσω χαμηλής ταχύτητας φυγοκέντρησης, τα υπερκείμενα χρησιμοποιήθηκαν για εμβολιασμό στη χοριο-αλλαντοειδή μεμβράνη εμβρύων Leghorn ηλικίας 11-12 ημερών και σε κυτταροκαλλιέργειες νεφρού πιθήκου, ανθρώπινου αμνίου και κυττάρων HeLa. Συνολικά απομονώθηκαν τρία στελέχη ιού, ένα κατά τη διάρκεια του πρώτου και δύο κατά τη διάρκεια του δεύτερου ξεσπάσματος. Οι περισσότερες μελέτες που θα αναφερθούν πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το στέλεχος που απομονώθηκε πρώτο.
**Στέλεχος ευλογιάς (Vaccinia):** Χρησιμοποιήθηκε το Lot NO. 1/50 111 που ελήφθη από το τμήμα εμβολίων ευλογιάς σε αυτό το ινστιτούτο σε ορισμένα πειράματα για σύγκριση με τον ιό των πιθήκων. Αυτό το στέλεχος διατηρήθηκε για αρκετά χρόνια μέσω σειριακών δερματικών διόδων σε κουνέλια και μοσχάρια. Χρησιμοποιήθηκε είτε το γλυκερινούχο τρίτο πέρασμα μοσχαριού είτε ένα επακόλουθο πρώτο πέρασμα αυτού του υλικού στη χοριο-αλλαντοειδή μεμβράνη.
**Περάσματα αυγών:** Χρησιμοποιήθηκε η τεχνική που περιέγραψαν οι Westwood et al. Μετά τον εμβολιασμό, τα αυγά επωάστηκαν για 48 ώρες στους 37° C όταν χρησιμοποιήθηκε ο ιός της ευλογιάς για μόλυνση και για 72 ώρες όταν χρησιμοποιήθηκε ο ιός των πιθήκων.
**Δοκιμές εξουδετέρωσης στη χοριο-αλλαντοειδή μεμβράνη:** Αδιάλυτος ορός αναμίχθηκε με ίσους όγκους αυξανόμενων αραιώσεων του ιού. Μετά την επώαση για 2-3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, ποσότητες 0.1 ml των μειγμάτων ορού-ιού εμβολιάστηκαν στις χοριο-αλλαντοειδείς μεμβράνες ομάδων πέντε εμβρύων ηλικίας 11-12 ημερών. Οι μεμβράνες συλλέχθηκαν μετά από συνεχή επώαση 48-72 ωρών και καθορίστηκε η μείωση στον αριθμό των χαρακτηριστικών "πυκνών" που προκλήθηκε.
**Κυτταροκαλλιέργειες:** Οι τεχνικές που χρησιμοποιήθηκαν για την προετοιμασία κυτταροκαλλιεργειών για τίτλους μολυσματικότητας και για δοκιμές εξουδετέρωσης έχουν περιγραφεί σε προηγούμενες δημοσιεύσεις. Χρησιμοποιήθηκε εμβόλιο 0.2 ml για περάσματα κυτταροκαλλιέργειας και οι σωλήνες κρατήθηκαν ακίνητοι στους 35° C. Κατά τα πρώτα πειράματα εξετάζονταν καθημερινά για κυτταροπαθητικές αλλαγές, αλλά στα επόμενα γινόταν μικροσκοπική εξέταση μόνο κάθε τέταρτη ή πέμπτη μέρα. Τα σειριακά περάσματα πραγματοποιήθηκαν συνήθως με ποσότητες 0.2 ml μη αραιωμένου θρεπτικού υγρού που συλλέχθηκε 5 ημέρες μετά τον εμβολιασμό.
**Αιμοσυγκόλληση:** Χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος pattern του Salk. Η τεχνική έχει περιγραφεί λεπτομερώς σε προηγούμενες δημοσιεύσεις.
**Δοκιμές σταθεροποίησης συμπληρώματος** διεξήχθησαν σύμφωνα με τη μέθοδο των Fulton & Dumbell, όπως τροποποιήθηκε από τους Svedmyr et al. Τα αντιγόνα παρασκευάστηκαν από θρεπτικό υγρό κυτταροκαλλιεργειών καθώς και από χοριο-αλλαντοειδείς μεμβράνες μολυσμένες με τον ιό της ευλογιάς των πιθήκων ή της ευλογιάς.
**Ανοσοποιητικοί οροί κουνελιών:** Παρασκευάστηκαν υπερανοσοποιητικοί οροί κατά των ιών της ευλογιάς των πιθήκων και της ευλογιάς σε κουνέλια με επανειλημμένες ενδοφλέβιες ενέσεις ποσοτήτων 0.5 έως 2.0 ml από 10% αιωρήματα μολυσμένων χοριο-αλλαντοειδών μεμβρανών. Τα ζώα έλαβαν συνολικά 7 ενδοφλέβιες ενέσεις (στις ημέρες 1, 9, 11, 16, 18, 23 και 25). Αιμορραγήθηκαν 10 ημέρες μετά την τελευταία ένεση.
Χρησιμοποιήθηκε επίσης ένας άλλος υπερανοσοποιητικός ορός που παρασκευάστηκε με ανοσοποίηση κουνελιών με αντιγόνο εμβολιασμού από λέμφο μοσχαριού, το οποίο είχε αδρανοποιηθεί με θέρμανση στους 70° C για 60 λεπτά. Επιπλέον, σε ορισμένα πειράματα χρησιμοποιήθηκε ένας υπεράνοσος ορός εμβολίου κουνελιού που παραχωρήθηκε ευγενικά από τον Dr. F. 0. MacCallum, Αγγλία.
**Ανθρώπινος υπερανοσοποιητικός ορός** χρησιμοποιήθηκε τελικά σε ορισμένες δοκιμές εξουδετέρωσης αυγών.
**Δοκιμή διάχυσης-κατακρήμνισης** πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφηκε από τον Gispen.
Ηλεκτρονική μικροσκοπία: Χρησιμοποιήθηκε ένα πρωτότυπο του ηλεκτρονικού μικροσκοπίου Phillips τύπου EM 100 B. Οι εκθέσεις πραγματοποιήθηκαν σε μεγέθυνση 3000x και φωτογραφικά μεγεθύνθηκαν ανάλογα με τις ανάγκες.
Το υλικό που μοιάζει με πύον από τα φλυκταινώδη εξανθήματα ενός πιθήκου αφαιρέθηκε με τη βοήθεια τριχοειδούς πιπέτας, τοποθετήθηκε σε πλέγματα καλυμμένα με formvar και αφέθηκε να στεγνώσει. Ακολουθώντας τη μέθοδο των Van Royen & Scoff, τα πλέγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάλυμα κρυσταλλικής θρυψίνης 0,25 τοις εκατό για 4 ώρες στους 37°C, μετά από το οποίο ακολούθησαν δύο σύντομες εκπλύσεις με απεσταγμένο νερό. Η στερέωση πραγματοποιήθηκε στους ατμούς διαλύματος τετροξειδίου του οσμίου 1 τοις εκατό για 15 λεπτά και, για να ελαχιστοποιηθεί ο κίνδυνος μόλυνσης, τα πλέγματα θερμάνθηκαν στους 70°C για μία ώρα πριν από τη σκιαγράφηση με πλατίνα. Ο ιός που προσαρμόστηκε στα αυγά και αναπτύχθηκε σε χοριο-αλλαντοειδείς μεμβράνες καθαρίστηκε για ηλεκτρονική μικροσκοπία με τη μέθοδο της διαφορικής φυγοκέντρησης και καθίζησης με κιτρικό οξύ σύμφωνα με τη μέθοδο των Henderson & McClean. Η τελική ανάρτηση τοποθετήθηκε απευθείας σε πλέγματα καλυμμένα με φόρμαρ, αποξηράνθηκε και υποβλήθηκε σε περαιτέρω επεξεργασία όπως αναφέρθηκε παραπάνω, με εξαίρεση ότι δεν πραγματοποιήθηκε πέψη με θρυψίνη.
Απομόνωση ιού
Η απομόνωση του ιού επιχειρήθηκε μόνο από έναν πίθηκο κατά τη διάρκεια του πρώτου ξεσπάσματος και από δύο πιθήκους κατά τη διάρκεια του δεύτερου ξεσπάσματος. Ο ιός ανακτήθηκε και από τα τρία ζώα. Το πρώτο απομονωμένο στέλεχος μελετήθηκε εκτενέστερα, αλλά δεν υπάρχει ένδειξη καμίας διαφοράς μεταξύ αυτού του στελέχους και αυτών που απομονώθηκαν κατά τη διάρκεια του δεύτερου ξεσπάσματος.
Απομόνωση ιού σε αυγά: Αποξέσματα από αρκετές βλατίδες που αραιώθηκαν σε 10^-3, 10^-5 και 10^-7 παρήγαγαν γκριζωπές οιδηματώδεις αλλαγές στις μεμβράνες. Επιπλέον, μικρές διακριτές αλλοιώσεις που έδειχναν τάση εξάπλωσης κατά μήκος των αιμοφόρων αγγείων μπορούσαν να παρατηρηθούν στα αυγά που εμβολιάστηκαν με την υψηλότερη αραίωση του ιού (Εικ. 4).
Σε συνεχές πέρασμα, χρησιμοποιώντας αραιωμένα αιωρήματα μεμβρανών ως σπόρο, η οιδηματώδης αντίδραση εξαφανίστηκε και οι μικρές αδιαφανείς θολωτές βλάβες έγιναν κυρίαρχες (Εικ. 5). Στις μεμβράνες που συλλέχθηκαν μετά από επώαση 3 ημερών, αυτές οι βλάβες έμοιαζαν πολύ με αυτές που περιγράφονται για τον ιό της ευλογιάς. Οι αλλοιώσεις αναπτύχθηκαν αργότερα και ήταν πολύ μικρότερες από αυτές που παρατηρήθηκαν με τον ιό της ευλογιάς (Εικ. 6). Ο τίτλος του αρχικού φλυκταινώδους υλικού ήταν 7 x 10^8 και δεν παρατηρήθηκε σημαντική αύξηση του τίτλου σε συνεχή περάσματα σε αυγά.
Απομόνωση ιού σε κυτταροκαλλιέργειες: Αποξέσματα από φλύκταινες γαλακτοματοποιήθηκαν σε ζωμό τρυπτόζης, διευκρινίστηκαν με φυγοκέντρηση χαμηλής ταχύτητας και το υπερκείμενο εμβολιάστηκε σε κυτταροκαλλιέργειες νεφρού πιθήκου, ανθρώπινου αμνίου και κυττάρων HeLa. Κυτταροπαθητικές αλλοιώσεις αναπτύχθηκαν σε όλους τους τύπους κυττάρων μετά από συνεχή επώαση για 2-3 ημέρες και η καταστροφή ήταν σχεδόν ολοκληρωτική μετά από 5 ημέρες.
Η κυτταροπαθογενής επίδραση χαρακτηριζόταν από στρογγύλεμα των επηρεαζόμενων κυττάρων, τα οποία στη συνέχεια γίνονταν κοκκώδη και συμπυκνώνονταν. Τα κύτταρα διατηρούσαν το στρογγυλό τους σχήμα για αρκετές ημέρες, τελικά αποκολλούνταν από την πλευρά του σωλήνα αφήνοντας ορατές τρύπες στο φύλλο κυττάρων. Στις κυτταροκαλλιέργειες νεφρού πιθήκου και ανθρώπινου αμνίου, τα επηρεασμένα κύτταρα συνδέονταν μεταξύ τους με νηματοειδείς συνκυτιακές επιμήκεις δομές (Εικ. 7). Στις κυτταροκαλλιέργειες HeLa αυτές οι σχηματισμοί δεν παρατηρήθηκαν, αλλά κατά τα άλλα η κυτταροπαθογενής επίδραση ήταν παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε στους άλλους τύπους κυττάρων που χρησιμοποιήθηκαν.
Σε συνεχή περάσματα κυτταροκαλλιέργειας, οι κυτταροπαθογενείς αλλαγές αναπτύχθηκαν κάπως πιο αργά, υποδηλώνοντας ότι το υγρό περάσματος περιείχε λιγότερο ιό από το φλυκταινώδες υλικό. Αυτή η υπόθεση υποστηρίχθηκε από την τιτλοδότηση αυγών. Το υγρό περάσματος κυτταροκαλλιέργειας περιείχε μόνο 10^6 έως 10^7 μονάδες σχηματισμού βλατίδων, ενώ το φλυκταινώδες υλικό είχε τίτλο περίπου 10^8. Κατά τη διάρκεια της τιτλοδότησης στις κυτταροκαλλιέργειες, ο τίτλος του υγρού περάσματος κυμαινόταν μεταξύ 10^-4 και 10^-6.
ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΤΟΥ ΙΟΥ ΤΗΣ ΕΥΛΟΓΙΑΣ ΤΩΝ ΠΙΘΗΚΩΝ ΣΕ ΚΥΤΤΑΡΟΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ ΠΟΥ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΤΗΚΑΝ ΑΠΟ ΝΕΦΡΑ ΦΑΙΝΟΜΕΝΙΚΑ ΥΓΙΩΝ ΠΙΘΗΚΩΝ
"Κατά τη διάρκεια του πρώτου ξεσπάσματος της ασθένειας ευλογιάς, κάποιοι φαινομενικά υγιείς cynomolgus πίθηκοι που ανήκαν στην επηρεασμένη αποστολή είχαν θυσιαστεί για άλλους σκοπούς. Τα νεφρά από αυτά τα ζώα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με θρυψίνη και σωλήνες καλλιέργειας παρασκευάστηκαν από τις κυτταρικές αιωρήσεις. Σε ορισμένους από τους σωλήνες (περίπου το 5%) αναπτύχθηκαν κυτταροπαθητικές αλλαγές 7 έως 12 ημέρες αργότερα και απομονώθηκε ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων από αυτές τις καλλιέργειες.
Κατά τη διάρκεια της 2ης επιδημίας ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων ήταν και πάλι παρών σε ένα μικρό ποσοστό των σωλήνων που παρασκευάστηκαν από νεφρούς φαινομενικά υγιών -αλλά εκτεθειμένων- ζώων. Σε αυτή την περίπτωση ο ιός ανακτήθηκε από καλλιέργειες πιθήκου που είχε θυσιαστεί 4 ημέρες πριν από το ξέσπασμα της επιδημίας. Αυτή ήταν η μόνη περίπτωση κατά την οποία ο ιός της παρωτίτιδας των πιθήκων βρέθηκε σε καλλιέργειες που είχαν παρασκευαστεί σε χρόνο κατά τον οποίο δεν υπήρχε κλινική ασθένεια στην αποικία. Σε όλες τις περιπτώσεις οι κυτταροπαθητικές εκδηλώσεις στις καλλιέργειες δεν ήταν αναγνωρίσιμες παρά μόνο 7 έως 10 ημέρες μετά την παρασκευή των σωλήνων, γεγονός που υποδεικνύει ότι μόνο μικρές ποσότητες του ιού υπήρχαν στο εναιώρημα του κυτταρικού αποθέματος».
«Τα αποτελέσµατα που προέκυψαν από την ηλεκτρονική µικροσκοπία παρουσιάζονται στα σχήµατα 11 και 12. Στην Εικ. 11 παρουσιάζονται τα σωματίδια που ελήφθησαν απευθείας από τις φλυκταινώδεις αλλοιώσεις ενός πιθήκου, ενώ στην Εικ. 12 δίνονται τα στοιχειώδη σώματα του ιού που ελήφθησαν από την τρίτη διέλευση σε χοριο-αλλαντοϊκές μεμβράνες υλικού που απομονώθηκε από έναν άλλο πίθηκο. Μολονότι τα πεδία που παρουσιάζονται δεν είναι ιδιαίτερα απαλλαγµένα από συνοδευτικές προσµίξεις, αναδεικνύουν τα περιγράµµατα αρκετών σωµατιδίων αρκετά νωρίς, ώστε να είναι δυνατή η διάκριση της γνωστής ορθογώνιας εµφάνισης που χαρακτηρίζει τους ιούς της οµάδας της ευλογιάς. Σε λίγες περιπτώσεις μετρήθηκαν οι διαστάσεις καλά απομονωμένων σωματιδίων. Όλες εμπίπτουν στο εύρος των ιών της ευλογιάς, δηλαδή 200 hy 250 mu. Ειδικά μία από τις συστάδες σωματιδίων που φαίνονται στο Σχ. 11 φαίνεται κάπως μικρότερη, αλλά αυτό είναι πιθανώς αποτέλεσμα συρρίκνωσης κατά την παρασκευή. Τα απομονωμένα σωματίδια και των δύο τύπων υλικού έχουν γενικά διαστάσεις περίπου 200-250 mu, όπως προαναφέρθηκε».
https://doi.org/10.1111/j.1699-0463.1959.tb00328.x
Είναι μάλλον ενδιαφέρον ότι αυτός ο νέος «ιός», ο οποίος τυχαίνει να έχει ακριβώς τα ίδια συμπτώματα με την ευλογιά, “ανακαλύφθηκε” βολικά την ίδια στιγμή που ο ΠΟΥ δήλωσε ότι θα εξαλείψει την ευλογιά μέσω μιας εκστρατείας μαζικού εμβολιασμού. Είναι επίσης ενδιαφέρον να σημειωθεί ότι πολλά από τα συμπτώματα που σχετίζονται τόσο με την ευλογιά όσο και με την ανεμοβλογιά μπορεί να είναι παρενέργειες από το ίδιο το εμβόλιο που χορηγείται για την προστασία από τις ασθένειες. Αυτό θα μπορούσε να οδηγήσει κάποιον να πιστέψει ότι η «ανακάλυψη» της ευλογιάς των πιθήκων στους πιθήκους και στη συνέχεια στον άνθρωπο μια δεκαετία αργότερα ήταν ο τέλειος αποδιοπομπαίος τράγος για να κατηγορηθεί για τυχόν κρούσματα των ίδιων συμπτωμάτων της νόσου που εμφανίστηκαν αφού ο ΠΟΥ κήρυξε επίσημα την ευλογιά ως “εκριζωμένη”.
Σε κάθε περίπτωση, η ίδια η ευλογιά των πιθήκων λέγεται ότι δεν ήταν σε θέση να μολύνει τους ανθρώπους, παρά μόνο τους πιθήκους. Όλα αυτά άλλαξαν το 1970, όταν εντοπίστηκε κρούσμα ευλογιάς σε ένα μη εμβολιασμένο παιδί 9 μηνών από το χωριό Bokenda στην επαρχία Basankusu της Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό. Όλο το χωριό (και πιθανώς η μητέρα και ο πατέρας του παιδιού) είχαν εμβολιαστεί μαζικά για την ευλογιά τον προηγούμενο χρόνο. Κανείς δεν λέγεται ότι μολύνθηκε με τον «ιό» από το παιδί. Μετά την κλινική εξέταση και την «απομόνωση» του «ιού», αρχικά ειπώθηκε ότι το παιδί έπασχε από ευλογιά (δηλ. βαριόλα). Ωστόσο, μετά από περαιτέρω επώαση του δείγματος σε ένα αυγό, το οποίο υποβλήθηκε σε τοξικές συνθήκες καλλιέργειας για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα, η μεμβράνη διασπάστηκε λίγο περισσότερο και αποφασίστηκε από τους ερευνητές ότι οι σχηματισμοί σπυριών που παρατηρήθηκαν ήταν πλέον διαφορετικοί από αυτούς που παρατηρήθηκαν στην ευλογιά.
Όπως και στην προηγούμενη εργασία του 1958, θα δείτε ότι ο «ιός» είναι και πάλι ένα μη καθαρισμένο μείγμα υλικού ξενιστή (δερματικές βλάβες) μαζί με άλλα υλικά, όπως αυγά κοτόπουλου, ινοβλάστες εμβρύου κοτόπουλου, κύτταρα νεφρού πιθήκου και τέσσερις συνεχείς κυτταρικές σειρές (VERO, A-1, PEK, HEP-2). Δυστυχώς, τα πραγματικά συστατικά που προστέθηκαν πέρα από τον τύπο των κυττάρων αφέθηκαν σε μεθόδους που χρησιμοποιήθηκαν σε προηγούμενες έρευνες χωρίς αναφορά, αλλά δηλώθηκε από τους ερευνητές ότι χρησιμοποίησαν τις «συνήθεις» τεχνικές απομόνωσης, πράγμα που σημαίνει ότι κατά πάσα πιθανότητα εφαρμόστηκαν αντιβιοτικά/αντιμυκητιασικά, εμβρυϊκός ορός βοοειδών και άλλα πρόσθετα για τη δημιουργία αυτού του «ιού».
Το υπόλοιπο της εργασίας περιλαμβάνει την έμμεση σύγκριση του μεγέθους και του σχήματος των σχηματισμών pock (ουλές από εξανθήματα) στα έμβρυα αυγών και τη δοκιμή αντισωμάτων μεταξύ των καλλιεργούμενων παρασκευασμάτων. Οι διαφορές στο σχηματισμό/μορφολογία των pock θα μπορούσαν εύκολα να εξηγηθούν λόγω των διαφορών στα συστατικά/συνθήκες καλλιέργειας και όχι λόγω οποιουδήποτε φανταστικού «ιού». Πράγματι, τόσο στις εργασίες του 1958 όσο και του 1972 σημειώθηκε μια αλλαγή στη διάρκεια των περιόδων επώασης στα αυγά μεταξύ ευλογιάς (εμβολιασμού ως υποκατάστατο) στις 48 ώρες και «ιού» της ευλογιάς των πιθήκων στις 72 ώρες. Φαίνεται ότι με 48 ώρες επώασης, οι κηλίδες έμοιαζαν με ευλογιά. Στις 72 ώρες, οι σχηματισμοί των pock δεν αντιστοιχούσαν στην ευλογιά και έμοιαζαν με τον ιό της ευλογιάς των πιθήκων. Δεν εξηγήθηκε γιατί αποφασίστηκε ότι ήταν απαραίτητη η επώαση των δειγμάτων της ευλογιάς των πιθήκων για επιπλέον 24 ώρες σε καμία από τις δύο μελέτες. Έτσι, μπορεί να διαπιστωθεί ότι οι ερευνητές δημιουργούν το αποτέλεσμα που θέλουν να δουν χειραγωγώντας τον χρόνο επώασης.
1958:
«Μετά τον εμβολιασμό τα αυγά επωάστηκαν για 48 ώρες στους 37° C όταν χρησιμοποιήθηκε ο ιός της vaccinia για τη μόλυνση και για 72 ώρες όταν χρησιμοποιήθηκε ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων».
1972:
«Μετά την επώαση για 48 ώρες, όπως ήδη αναφέρθηκε, οι αλλοιώσεις στο CAM των εμβρύων νεοσσών διέφεραν ελάχιστα από εκείνες που προκαλούνται από τον συνηθισμένο ιό της ευλογιάς. Ωστόσο, μετά από 72 ώρες είχαν ήδη γίνει πιο επίπεδες και αιμορραγίες εμφανίζονταν στο κέντρο των περισσότερων από τις κηλίδες».
Αυτή η ασυμφωνία επισημάνθηκε μάλιστα στο κεφάλαιο 29 του βιβλίου Smallpox and its Eradication του Frank Fenner, όπου αποκαλύπτεται ότι οι εμπειρογνώμονες του ΠΟΥ συμφώνησαν το 1969 ότι η εμφάνιση των pocks μετά από 3 ημέρες επώασης ήταν η πρώτη ένδειξη για την ευλογιά των πιθήκων έναντι της ευλογιάς:
«Κατά την πρώτη συνάντηση της Άτυπης Ομάδας της ΠΟΥ για την ευλογιά των πιθήκων και τους συναφείς ιούς, στη Μόσχα τον Μάρτιο του 1969, οι εμπειρογνώμονες συμφώνησαν ότι η πρώτη ένδειξη ότι ο ιός που ανακτήθηκε από μια δερματική βλάβη μπορεί να είναι ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων θα ήταν η αιμορραγική εμφάνιση των pocks (πανάδων) που δημιουργούνται στη χοριοαλλαντική μεμβράνη μετά από επώαση 3 ημερών στους 35°C.
Στις 23 Σεπτεµβρίου 1970 οι Dr. S. S. Marennikova, Dr. E. M. Shelukhina και Dr. N. N. Maltseva, του συνεργαζόµενου κέντρου του ΠΟΥ στη Μόσχα, ανέκτησαν έναν ιό στη χοριοαλλαντοϊκή µεµβράνη από υλικό που εστάλη από ασθενή στο Ζαΐρ. Όταν εξετάστηκαν μετά από επώαση για 2 ημέρες, οι κηλίδες ήταν «απολύτως τυπικές» για τον ιό της βαριόλα. Ωστόσο, μετά από επώαση άλλης μίας ημέρας στους 35°C, υπήρξε κάποια αιμορραγία γύρω από τις κηλίδες, χαρακτηριστικό που δεν παρατηρήθηκε ποτέ με τον ιό της βαριόλας και είναι χαρακτηριστικό του ιού της ευλογιάς των πιθήκων.»
https://www.google.com/url?sa=t&source=web&rct=j&url=https://biotech.law.lsu.edu/blaw/bt/smallpox/who/red-book/Chp%252029.pdf&ved=2ahUKEwiJi_G355X1AhWKZM0KHd9IAA8QFnoECDEQAQ&usg=AOvVaw0o1ZKfIZFos-R50YesS-Wp
Όσον αφορά τα αποτελέσματα των αντισωμάτων, δεδομένου ότι τα αντισώματα δεν έχουν ποτέ καθαριστεί και απομονωθεί ούτε έχει αποδειχθεί επιστημονικά ότι υπάρχουν, θα πρέπει να είναι προφανές ότι η χρήση μιας φανταστικής οντότητας (αντισώματα) για την ταυτοποίηση μιας άλλης φανταστικής οντότητας («ιός») δεν αποτελεί απόδειξη ότι υπάρχει ένας «ιός» ούτε ότι είναι είτε ίδιος είτε διαφορετικός από άλλους φανταστικούς «ιούς» που επίσης υποτίθεται ότι υπάρχουν. Δυστυχώς, αυτό το απλό κομμάτι της λογικής δεν φαίνεται να μπαίνει ποτέ στο μυαλό αυτών των ερευνητών για κάποιο λόγο.
Παρακάτω παρουσιάζεται ολόκληρη η εργασία του 1972 που προσδιορίζει την πρώτη περίπτωση μόλυνσης ανθρώπου από τον ιό της ευλογιάς των πιθήκων και την «απομόνωση» του «ιού»:
Απομόνωση και ιδιότητες του αιτιολογικού παράγοντα μιας νέας ασθένειας που μοιάζει με τη variola (ευλογιά των πιθήκων) στον άνθρωπο
Απομονώθηκε και μελετήθηκε ο αιτιολογικός παράγοντας μιας περίπτωσης νόσου σε άνθρωπο που εμφανίστηκε στη Λαϊκή Δημοκρατία του Κονγκό με κλινική εικόνα παρόμοια με την ευλογιά. Ο παράγοντας ταυτοποιήθηκε ως ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων. Μια συγκριτική μελέτη του απομονωμένου στελέχους (Congo-8) και των ιών που απομονώθηκαν από παρόμοιες περιπτώσεις ασθένειας στη Λιβερία (στελέχη Liberia-i και Liberia-2) και στη Σιέρα Λεόνε (στέλεχος V-70 1 266) έδειξε ότι ήταν πανομοιότυποι. Ορισμένα τοπικά είδη πιθήκων και πιθηκοειδών εξετάστηκαν ορολογικά στην περιοχή του Κονγκό για να προσδιοριστεί η πιθανότητα μόλυνσης του ανθρώπου από τον ιό της ευλογιάς των πιθήκων. Επιβεβαιώθηκε ότι τα ζώα είχαν έρθει σε επαφή με παράγοντα της ομάδας των ιώσεων του ιού της ευλογιάς. Σε 2 από τους 7 εξετασθέντες ορούς ανακαλύφθηκαν αντισώματα της ομάδας των ιών της ευλογιάς Variola-vaccinia (αντισώματα εξουδετέρωσης του ιού, κατακρημνίσματα και αντιαιμαγλουτινίνες). Σε έναν χιμπαντζή βρέθηκαν αντιαιμοσυγκολλητίνες σε τίτλο 1:1.280 και στο ίδιο ζώο απομονώθηκε από τους νεφρούς ένας ιός που έμοιαζε με τον ιό της βαριόλας. Κατά τη διάρκεια της έρευνας, αποδείχθηκε οριστικά ότι ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων και τα υπό εξέταση στελέχη μπορούσαν να διακριθούν από τους συνήθεις ιούς της βαριόλας και της vaccinia με βάση τη συμπεριφορά τους σε καλλιέργεια συνεχούς κυτταρικής γραμμής νεφρών εμβρύου χοίρου.
Μέχρι σχετικά πρόσφατα πιστευόταν ότι μόνο δύο άλλοι ιοί της ευλογιάς, εκτός από τους ιούς της βαριόλας και της alastrim, μπορούσαν να προκαλέσουν γενικευμένη λοίμωξη στον άνθρωπο που συνοδεύεται από δερματικές αλλοιώσεις. Αυτοί ήταν ο πραγματικός παράγοντας της δαμαλίτιδας και ο ιός της ευλογιάς των βοοειδών. Κατά κανόνα, και οι δύο αυτοί ιοί προκαλούν βλάβες στο σημείο της μόλυνσης, και η μόλυνση γενικεύεται μόνο σε σπάνιες περιπτώσεις. Το 1958, ανακαλύφθηκε ένας νέος εκπρόσωπος της ομάδας των ιών της ευλογιάς, ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων (Magnus et al., 1959). Έκτοτε, έχουν καταγραφεί και μελετηθεί αρκετές επιδημίες ευλογιάς των πιθήκων μεταξύ παγιδευμένων ζώων που κρατούνται σε φυσικά καταφύγια και ζωολογικούς κήπους (Prier et al., 1960; McConnell et al., 1962; Peters, 1966; Gispen, Verlinde & Zwart, 1967).
Έχει διαπιστωθεί ότι η μόλυνση που προκαλείται από τον ιό μπορεί να μεταδοθεί σε ορισμένα άλλα ζώα (μυρμηγκοφάγους) και σε διάφορα είδη πιθήκων και μεγάλων πιθήκων, συμπεριλαμβανομένων των ανθρωποειδών πιθήκων. Η σοβαρότητα της νόσου στους πιθήκους ποικίλλει και εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από το είδος. Η νόσος ακολουθεί την πιο σοβαρή πορεία της στους ανθρωποειδείς πιθήκους. Ωστόσο, δεν έχει σημειωθεί καμία ασθένεια στον άνθρωπο που να προκαλείται από τον ιό της ευλογιάς των πιθήκων σε καμία από αυτές τις επιδημίες. Ωστόσο, τα δεδομένα που αναφέρονται σε αυτό το άρθρο δείχνουν ότι ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων μπορεί να προκαλέσει μια ασθένεια παρόμοια με τη συνήθη ευλογιά στον άνθρωπο. Ο ιός απομονώθηκε από υλικό που ελήφθη από ένα παιδί 9 μηνών χωρίς εμβολιασμό (A. I.) από το χωριό Bokenda στην επαρχία Basankusu, στη Λαϊκή Δημοκρατία του Κονγκό, το οποίο υπέφερε από μια ασθένεια που υποψιάζονταν ότι ήταν ευλογιά. Το εν λόγω χωριό βρίσκεται σε μια απομακρυσμένη περιοχή στα βάθη ενός τροπικού δάσους. Κατά τη διάρκεια των δύο προηγούμενων ετών δεν είχαν σημειωθεί κρούσματα ευλογιάς ούτε στο χωριό ούτε στην ευρύτερη περιοχή. Δεν καταγράφηκαν κρούσματα μόλυνσης με την παραλλαγή της ευλογιάς που να εξαπλώνονται από το παιδί A. I. (Ladnyj, Ziegler & Kima, 1971). Σχεδόν ολόκληρος ο πληθυσμός του χωριού Bokenda είχε εμβολιαστεί κατά της ευλογιάς έναν χρόνο πριν συμβεί αυτό το περιστατικό κατά τη διάρκεια μιας μαζικής εκστρατείας εμβολιασμού κατά της ευλογιάς σε όλη τη χώρα.
Εκτός από την αναφορά των αποτελεσμάτων της απομόνωσης και ταυτοποίησης του στελέχους του ιού Κονγκό-8 από το παιδί A. I., το άρθρο αυτό παρέχει τα αποτελέσματα μιας ορολογικής εξέτασης μιας ομάδας πιθήκων και ανθρωποειδών από την εστία, καθώς και τα αποτελέσματα μιας μελέτης των ιών Liberia-1, Liberia-2 και V-70 1 266 που απομονώθηκαν στο Κέντρο Ελέγχου Νοσημάτων, στην Ατλάντα, ΗΠΑ, από ασθενείς που έπασχαν από παρόμοιες ασθένειες τύπου ευλογιάς στη Λιβερία και τη Σιέρα Λεόνε.
ΥΛΙΚΟ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ
Υλικό από τους ασθενείς στη Λαϊκή Δημοκρατία του Κονγκό ελήφθη μέσω του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας με αεροπορική μεταφορά σε ειδική συσκευασία, και αποτελούνταν από το περιεχόμενο δερματικών βλαβών (κακαδοειδή και επιχρίσματα σε πλακίδια). Τα στελέχη Liberia-1, Liberia-2 και V-70 1 266 ελήφθησαν μέσω του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας στις 11 Δεκεμβρίου 1970, στις 18 Δεκεμβρίου 1970 και στις 30 Απριλίου 1971, αντίστοιχα, με τη μορφή αναρτήσεων χοριοαλλαντοϊκής μεμβράνης (CAM), μολυσμένων CAM και κακαδοειδών από έναν ασθενή (Liberia-1). Αυτά τα στελέχη είχαν περάσει μία ή δύο φορές στο εργαστήριο και χρησιμοποιήθηκαν στα πειράματα με τη μορφή αναρτήσεων CAM πρώτης ή δεύτερης διέλευσης (χωρίς να υπολογίζονται οι διελεύσεις που έγιναν πριν φτάσουν στο εργαστήριο).
Τα στελέχη Κονγκό-8, Liberia-1, Liberia-2 και V-70 1 266 συγκρίθηκαν με ιούς της ευλογιάς (στελέχη MT-60 και MK-60-Harvey), της δαμαλίτιδας (στέλεχος Brighton), της ευλογιάς των πιθήκων (στέλεχος Κοπεγχάγης) και της ευλογιάς των βοοειδών (στελέχη Tanzania-3 και France). Οι ιοί χρησιμοποιήθηκαν με τη μορφή αναρτήσεων μολυσμένων CAM μετά από μία ή δύο επιπλέον διέλευσεις σε έμβρυα κοτόπουλου.
Οι οροί και τα όργανα των πιθήκων που πιάστηκαν στην περιοχή του χωριού Μποκέντα παραλήφθηκαν στο εργαστήριο σε κατεψυγμένη κατάσταση σε δοχείο υγρού αζώτου.
Οι συνήθεις μέθοδοι χρησιμοποιήθηκαν για την απομόνωση του ιού από υλικά που ελήφθησαν από τους ασθενείς και από τα όργανα των πιθήκων και για την διερεύνησή τους μέσω της μικροκαταβροχής αγαρικού ζελέ (Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας, 1969).
Στη μελέτη των γενετικών χαρακτηριστικών των ιών (ο τύπος των βλαβών στην CAM και οι πλάκες σε κυτταρικές καλλιέργειες, η αιμοσυγκολλητική δραστηριότητα, η παθογένεια για τα κουνέλια μετά από μόλυνση με ενδοδερμική ένεση ή γρατσουνισμό και άλλες ιδιότητες), χρησιμοποιήθηκαν τυποποιημένες μέθοδοι (Marennikova & gafikova, 1969; Marennikova, Gurvic & geluhina, 1970). Τα ζώα που χρησιμοποιήθηκαν στα πειράματα ήταν λευκά κουνέλια τσιντσιλά με βάρος 2,5 κιλά και τυχαία εκτραφόμενα λευκά ποντίκια με βάρος 10-11 γρ.
Ο τύπος της κυτταροπαθητικής επίδρασης προσδιορίστηκε στις ακόλουθες κυτταρικές καλλιέργειες: δύο πρωτογενείς (ινοβλάστες εμβρύου κοτόπουλου και κύτταρα νεφρού πιθήκου) και τέσσερις συνεχείς (VERO, A-1, PEK, HEP-2). Η μορφολογία των πλακών μελετήθηκε τόσο με όσο και χωρίς επικάλυψη με agar (Porterfield & Allison, 1960; Gendon & ternos, 1964).
Στις συγκριτικές μελέτες χρησιμοποιήθηκαν ίσες δόσεις των ιών. Οι δόσεις που χορηγήθηκαν στα κουνέλια ενδοδερμικά και με γρατσουνισμό ήταν 10^6 μονάδες που σχηματίζουν βλάβες ανά 0,1 ml. Οι δόσεις που χρησιμοποιήθηκαν για τη μελέτη της παθογένειας σε έμβρυα κοτόπουλου κυμαίνονταν από 10 έως 10^7 μονάδες που σχηματίζουν βλάβες ανά 0,1 ml, και τα αποτελέσματα διαβάστηκαν μετά από 72 ώρες. Κατά τη μελέτη της ανώτατης θερμοκρασίας για την ανάπτυξη συγκεκριμένων βλαβών, χρησιμοποιήθηκαν 100 και 1.000 μονάδες σχηματισμού βλαβών. Εκτός από ειδικές δοκιμές, η μορφολογία των βλαβών προσδιοριζόταν στην CAM (χοριοαλλαντοϊκή μεμβράνη) μετά από 72 ώρες, όταν υπήρχαν 10-100 βλάβες στη μεμβράνη. Ο τύπος της κυτταροπαθητικής επίδρασης μελετήθηκε με μόλυνση με δόσεις ιού που κυμαίνονταν από 10 έως 10^7 TCD50, με τα αποτελέσματα να διαβάζονται από 24 ώρες έως 7 ημέρες μετά τη μόλυνση.
Πριν από την εξέταση, οι οροί των πιθήκων αποψύχθηκαν και θερμάνθηκαν στους 56°C για 30 λεπτά. Η δοκιμή αναστολής αιμοσυγκόλλησης πραγματοποιήθηκε με 2 μονάδες συγκόλλησης (AU) του εξεταζόμενου ιού και ένα εναιώρημα 1% ερυθρών κυττάρων κοτόπουλου. Η δοκιμή εξουδετέρωσης πραγματοποιήθηκε με τη συνήθη μέθοδο (Boulter, 1957), ενώ η μέθοδος Ouchterlony (1949) χρησιμοποιήθηκε στη δοκιμή καταβροχής αγαρικού ζελέ.
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Η έρευνα για τη διάγνωση της ευλογιάς στο εργαστήριο που πραγματοποιήθηκε σε αυτό το ινστιτούτο το 1970, με υλικό που ελήφθη από ασθενείς κατά την περίοδο 18 Δεκεμβρίου 1969 έως 22 Οκτωβρίου 1970, μας επέτρεψε να επιβεβαιώσουμε την παρουσία της ευλογιάς σε ορισμένες επαρχίες της Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό (Dendale Kinshasa, Kalomy, Longo Ngaba Kinshasa, και Kabulo Kalukivu). Τα στελέχη του ιού της ευλογιάς που απομονώθηκαν δεν διέφεραν από τον τυπικό ιό της φυσικής ευλογιάς.
Κατά την ίδια περίοδο απομονώθηκε ένας ιός από υλικό που ελήφθη την 1η Σεπτεμβρίου 1970 στο χωριό Μποκέντα στην επαρχία Μπασανκούσου από το παιδί A. I., όπως έχει ήδη αναφερθεί. Βάσει της εξέτασης μολυσμένης CAM μετά από 48 ώρες και της ορολογικής ταυτοποίησης με τη μέθοδο καταβροχής αγαρικού ζελέ, αυτός ο ιός αρχικά ταυτοποιήθηκε ως ιός της ευλογιάς (23 Σεπτεμβρίου 1970). Ωστόσο, ο χαρακτήρας των βλαβών στην CAM είχε αλλάξει έντονα μετά από 72 ώρες και αυτή η παρατήρηση, μαζί με τα αποτελέσματα των δοκιμών αιμοσυγκόλλησης, υποδήλωσαν ότι ο απομονωμένος παράγοντας είχε διαφορετική φύση. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε λεπτομερής μελέτη και ο ιός απομονώθηκε εκ νέου από υλικό που ελήφθη από τον ασθενή.
Ο Πίνακας I δείχνει τα αποτελέσματα της απομόνωσης του ιού από το υλικό που ελήφθη από τον ασθενή και της δοκιμής των βασικών ιδιοτήτων του στελέχους. Οι έρευνες έδειξαν ότι ο απομονωμένος ιός (στέλεχος Κονγκό-8) παρήγαγε έναν ιδιαίτερο τύπο βλάβης στην CAM, διακρίνοντας το στέλεχος τόσο από τον ιό της ευλογιάς των βοοειδών όσο και από τον συνήθη ιό της ευλογιάς. Αυτός ο ιός έδειξε επίσης υψηλό βαθμό αιμοσυγκολλητικής δραστηριότητας και έντονη τάση να προκαλεί βλάβες στο γρατζουνισμένο δέρμα κουνελιού. Την τρίτη έως τέταρτη ημέρα μετά τη μόλυνση του κουνελιού, η γρατζουνισμένη περιοχή προεξείχε πάνω από το υγιές δέρμα που την περιέβαλλε ως αποτέλεσμα της ανάπτυξης συγχωνευμένων βλατίδων χωρίς εμφανή σκλήρυνση των υποκείμενων ιστών. Τα συγχωνευμένα στοιχεία είχαν τη μορφή υγρών λωρίδων κατά μήκος των γρατζουνιών (βλ. Εικ. 1).
Όταν τα κουνέλια μολύνθηκαν ενδοδερμικά, αναπτύχθηκε νέκρωση στο κέντρο της πυκνής διηθημένης περιοχής που σχηματίστηκε στο σημείο της ένεσης. Η περιοχή της διήθησης ήταν ελαφρώς αιμορραγική. Στα κουνέλια που μολύνθηκαν με γρατζουνισμό και ενδοδερμικά, η μόλυνση πήρε γενικευμένο χαρακτήρα.
Μετά από επώαση για 48 ώρες, όπως αναφέρθηκε ήδη, οι βλάβες στην CAM του εμβρύου κοτόπουλου διέφεραν ελάχιστα από εκείνες που προκαλούνται από τον συνήθη ιό της ευλογιάς. Ωστόσο, μετά από 72 ώρες είχαν ήδη γίνει πιο επίπεδες και εμφανίστηκαν αιμορραγίες στο κέντρο των περισσότερων βλαβών (Εικ. 2). Μέχρι εκείνη τη στιγμή, η ανισότητα των βλαβών όσον αφορά τη μορφολογία και το μέγεθος είχε γίνει εμφανής· δίπλα στις μικρές βλάβες που περιείχαν αιμορραγίες, μπορούσε να παρατηρηθεί ένας μικρός αριθμός μεγάλων λευκών βλαβών χωρίς αιμορραγίες. Αυτό το χαρακτηριστικό παρατηρήθηκε σε θερμοκρασία επώασης 35°C. Μια αύξηση της θερμοκρασίας επώασης κατά μόλις 1°C οδήγησε σε αλλαγές στη φύση των βλαβών. Οι βλάβες που αναπτύχθηκαν στην CAM δεν εμφάνισαν αιμορραγία.
Ο ασυνήθιστος συνδυασμός ιδιοτήτων και η στενή ομοιότητα ορισμένων χαρακτηριστικών του στελέχους Κονγκό-8 με εκείνα άλλων ιών της ομάδας της ευλογιάς καθιστούσε απαραίτητη τη λεπτομερή σύγκριση του ιού σε πειράματα με ιούς της δαμαλίτιδας, της ευλογιάς των πιθήκων, της ευλογιάς και της ευλογιάς των βοοειδών. Τα στελέχη Liberia-1, Liberia-2 και V-70 1 266 από τη Λιβερία και τη Σιέρα Λεόνε, τα οποία είχαν απομονωθεί από περιπτώσεις ασθενειών παρόμοιων με την ευλογιά στον άνθρωπο, παρόμοιων με εκείνη από την οποία υπέφερε ο A. I., συμπεριλήφθηκαν στις ίδιες δοκιμές. Τα αποτελέσματα της συγκριτικής μελέτης έδειξαν ότι τα στελέχη Κονγκό-8, Liberia-I, Liberia-2 και V-70 1 266 δεν διέφεραν σημαντικά μεταξύ τους σύμφωνα με τις δοκιμές που χρησιμοποιήθηκαν, ούτε διέφεραν από τον κλασικό τύπο ιού της ευλογιάς των πιθήκων του στελέχους Κοπεγχάγης (Πίνακες 2 και 3).
Υπήρξε όχι μόνο στενή συγγένεια μεταξύ αυτών των τεσσάρων στελεχών σύμφωνα με τις δοκιμές που ήδη περιγράφηκαν (τύπος βλαβών στην CAM, δερματικές βλάβες στα κουνέλια και αιμοσυγκολλητική δραστηριότητα), αλλά όλα παρήγαγαν πλάκες με πανομοιότυπη μορφολογία και μέγεθος, είτε χρησιμοποιήθηκε επικάλυψη με αγάρ (σε κύτταρα ινοβλαστών εμβρύου κοτόπουλου) είτε όχι (σε συνεχή κυτταρική σειρά Vero). Σε αντίθεση με τον κοινό ιό της ευλογιάς (variola), ο οποίος κάτω από την επικάλυψη αγάρ παράγει μικρές πλάκες με διάμετρο μικρότερη από 1 mm, ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων και οι απομονωμένοι ιοί Κονγκό-8, Λιβερία-1 και Λιβερία-2 σχημάτισαν μεγαλύτερες πλάκες με ορατή εσωτερική δομή και ακανόνιστη περίμετρο. Σε πειράματα χωρίς επικάλυψη αγάρ, ο ιός της ευλογιάς παρήγαγε δυσδιάκριτες πλάκες με έντονα χρωματισμένο περίγραμμα, ενώ οι απομονωμένοι ιοί σχημάτισαν μεγάλες πλάκες με διαφανές κέντρο και δύο περιφερειακές ζώνες: μια εσωτερική δικτυωτή ζώνη με ακανόνιστη περίμετρο και μια εξωτερική έντονα χρωματισμένη ζώνη (Εικ. 3). Οι διαφορές στον τύπο του κυτταροπαθητικού αποτελέσματος μεταξύ αυτών των ιών και του ιού της ευλογιάς ήταν λιγότερο έντονες από τις διαφορές στον σχηματισμό πλακών. Οι απομονωμένοι ιοί παρήγαγαν κυτταροπαθητικό αποτέλεσμα εστιακού τύπου στα αρχικά στάδια με διακοπές στη στοιβάδα των κυττάρων και μια ζώνη κυτταρικού πολλαπλασιασμού στην περιφέρεια. Τα κύτταρα που περιβάλλουν την εστία ήταν στρογγυλεμένα και έντονα διαθλαστικά. Στο κέντρο της εστίας υπήρχαν κύτταρα ή ομάδες κυττάρων που είχαν χάσει την ικανότητα σχηματισμού προεκτάσεων. Σε υψηλότερες δόσεις του ιού (άνω των 10^5 TCD50) υπήρχε ένα «διάχυτο» κυτταροπαθητικό αποτέλεσμα σε όλη τη στοιβάδα των κυττάρων (Εικ. 4).
Η μελέτη ορισμένων κυτταρικών καλλιεργειών που μολύνθηκαν με τους ιούς Κονγκό-8, Λιβερία-2 και Κοπεγχάγη έδειξε ότι τα πιο ευαίσθητα ήταν τα κύτταρα VERO (τίτλοι 10^7.5 και 10^6.2 TCD50) σε σύγκριση με τα κύτταρα ινοβλαστών εμβρύου κοτόπουλου (τίτλοι 10^5.5-10^6.5 TCD50) και τα κύτταρα Α-1 (τίτλοι 10^5.5-10^6.5 TCD50). Αυτοί οι ιοί έδειξαν έντονα φαινόμενα αιμοπροσρόφησης σε ινοβλάστες εμβρύου κοτόπουλου, κύτταρα νεφρού πιθήκου, κύτταρα Vero, κύτταρα Α-1 και κύτταρα HEP-2.
Έχει ήδη δειχθεί προηγουμένως (Marennikova, Gurvic & Seluhina, 1970) ότι ένα χαρακτηριστικό του ιού της ευλογιάς των πιθήκων που τον διακρίνει από τους ιούς της ευλογιάς και της δαμαλίτιδας είναι η αδυναμία του για ενεργό αναπαραγωγή και η απουσία του φαινομένου αιμοπροσρόφησης σε μια καλλιέργεια της συνεχούς κυτταρικής σειράς νεφρού εμβρύου χοίρου (PEK). Η μελέτη της συμπεριφοράς των στελεχών Κονγκό-8, Λιβερία-1 και Λιβερία-2 έδειξε ότι συμπεριφέρονται παρόμοια: ο τίτλος τους στα κύτταρα PEK δεν ξεπέρασε τα 10^2.6 TCD50/ml και το φαινόμενο αιμοπροσρόφησης δεν παρατηρήθηκε ακόμη και όταν είχαν λάβει χώρα κυτταροπαθητικές αλλαγές (Πίνακας 2).
Ο προσδιορισμός της ανώτατης θερμοκρασίας για την ανάπτυξη βλαβών στην CAM εμβρύου κοτόπουλου έδειξε ότι, σε αντίθεση με τους ιούς δαμαλίτιδας και ευλογιάς των βοοειδών, τα στελέχη Κονγκό-8, Λιβερία-1 και Λιβερία-2, καθώς και ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων, δεν προκάλεσαν βλάβες σε θερμοκρασία 39.6°C μετά τη χορήγηση 100 και 1.000 μονάδων σχηματισμού βλαβών. Ωστόσο, αυτή η ομάδα στελεχών και ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων προκάλεσαν την ανάπτυξη βλαβών στην CAM σε θερμοκρασία στην οποία δεν αναπτύχθηκαν βλάβες μετά τη μόλυνση με το στέλεχος MT-60 του ιού της ευλογιάς (38.6-39°C). Τα στελέχη δοκιμής διέφεραν από τον ιό της ευλογιάς και τον ιό της δαμαλίτιδας στην υψηλότερη αιμοσυγκολλητική τους δραστηριότητα (βλ. Πίνακα 3). Το στέλεχος Κονγκό-8 και οι άλλοι τρεις απομονωμένοι ιοί που δοκιμάστηκαν αποδείχθηκαν εξαιρετικά παθογόνοι για έμβρυα κοτόπουλου. Μετά από ενδοεγκεφαλική μόλυνση λευκών ποντικών, αυτά τα στελέχη, όπως και ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων, ήταν σημαντικά πιο παθογόνα από τον ιό της ευλογιάς για ενήλικα ποντίκια (Πίνακας 3).
Στις ορολογικές μελέτες χρησιμοποιήθηκαν υπεράνοσοι οροί κουνελιών κατά των ιών της δαμαλίτιδας και της ευλογιάς. Στη δοκιμή αναστολής αιμοσυγκόλλησης με αμφότερους τους αντιορούς, οι δοκιμαζόμενοι ιοί παρήγαγαν τίτλους πανομοιότυπους με αυτούς που παρήχθησαν από τον ιό της ευλογιάς των πιθήκων (Πίνακας 4). Στη δοκιμή καταβροχής αγαρικού ζελέ, βρέθηκε ότι όλοι οι ιοί εκτός από τον ιό της δαμαλίτιδας είχαν πανομοιότυπη αντιγονική δομή (Εικ. 5).
Δεδομένου ότι το πειραματικό υλικό που ελήφθη επέτρεψε την ταυτοποίηση του ιού Κονγκό-8 ως ιού της ευλογιάς των πιθήκων, κρίθηκε σκόπιμο να διερευνηθούν οι πίθηκοι και οι ανθρωποειδείς πίθηκοι που ζουν στην περιοχή της μολυσματικής εστίας. Τον Ιανουάριο του 1971, οι Dr I. D. Ladnyj και Dr P. Ziegler αιχμαλώτισαν μια ομάδα πιθήκων διαφόρων ειδών, των οποίων το αίμα, ο ορός και τα όργανα (ήπαρ, σπλήνα και νεφρά) μελετήθηκαν. Τα αποτελέσματα των ορολογικών εξετάσεων των ζώων δίνονται στον Πίνακα 5. Από τους 7 ορούς που εξετάστηκαν, 2 έδειξαν αντιαιμοσυγκολλητίνες σε τίτλους 1:16 και 1:1.280. Στους ίδιους ορούς (αρ. 4 και 9) ανακαλύφθηκαν ιο-εξουδετερωτικά αντισώματα σε τίτλο μεγαλύτερο από 1:40, καθώς και καταβολοποιητές. Η ανίχνευση αντισωμάτων κατά του ιού της δαμαλίτιδας δείχνει ότι ένας παράγοντας της ομάδας των ιών της ευλογιάς κυκλοφορεί μεταξύ ορισμένων τοπικών ειδών πιθήκων. Επιπλέον, η παρουσία καταβολοποιητών και το υψηλό επίπεδο αντιαιμοσυγκολλητινών που βρέθηκε σε ένα χιμπατζή υποδηλώνει ότι είχε μολυνθεί. Αυτή η άποψη υποστηρίζεται από την απομόνωση από τα νεφρά του ίδιου χιμπατζή ενός ιού που μοιάζει με τον ιό της ευλογιάς. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης παρουσιάζονται από τη Marennikova και συνεργάτες (1971).
**ΣΥΖΗΤΗΣΗ**
Η εμπειρία που αποκτήθηκε τα τελευταία χρόνια στη μελέτη του ιού της ευλογιάς (variola) έχει δείξει ότι, όπως και ένας αριθμός άλλων ιών, διακρίνεται από ενδοειδική ποικιλότητα ή φυσική ποικιλία, αν και σε μικρότερο βαθμό (Bedson, Dunbell & Thomas, 1963; Sarkar & Mitra, 1967; Marennikova & Gafikova, 1969). Οι διαφορές που βρέθηκαν σχετίζονταν με τον βαθμό παθογένειας των στελεχών για έμβρυα κοτόπουλου και λευκά ποντίκια, την ανώτατη θερμοκρασία για την ανάπτυξη βλαβών και μερικούς άλλους δείκτες. Ωστόσο, κανένα από τα στελέχη των ιών της ευλογιάς (variola) και της alastrim που ερευνήθηκαν δεν απέδειξε ότι μπορεί να προκαλέσει την ανάπτυξη βλαβών στο δέρμα των κουνελιών που είχε προηγουμένως γδαρθεί. Το στέλεχος Κονγκό-8 που απομονώθηκε από τον ασθενή Α. Ι., ο οποίος είχε μια ασθένεια που έμοιαζε με ευλογιά, προκάλεσε έντονη ειδική αντίδραση όταν τοποθετήθηκε στο γδαρμένο δέρμα κουνελιού. Αυτό το χαρακτηριστικό του ιού Κονγκό-8, σε συνδυασμό με άλλα χαρακτηριστικά (ο αιμορραγικός τύπος βλαβών στην CAM, οι τύποι πλακών στην κυτταροκαλλιέργεια, ο υψηλός βαθμός αιμοσυγκολλητικής δραστηριότητας, η ανώτατη θερμοκρασία για την ανάπτυξη βλαβών κ.λπ.), καθιστά αδύνατο να θεωρηθεί ως παραλλαγή του ιού της ευλογιάς. Από την άλλη πλευρά, οι ιδιότητες του Κονγκό-8 αποδείχθηκαν αδιάκριτες από εκείνες του κλασικού εκπροσώπου του ιού της ευλογιάς των πιθήκων (το στέλεχος Κοπεγχάγης) και παρείχαν καλούς λόγους για την ταυτοποίησή του ως ιός της ευλογιάς των πιθήκων. Τα στοιχεία δείχνουν λοιπόν ότι ο ιός της ευλογιάς των πιθήκων μπορεί να προκαλέσει ασθένεια στον άνθρωπο.
Το γεγονός ότι οι εξετάσεις πολυάριθμων δειγμάτων υλικού από ασθενείς από διάφορες χώρες με ύποπτη ευλογιά κατά τη διάρκεια αρκετών ετών δεν είχαν αποκαλύψει προηγουμένως κάποιον παράγοντα με ιδιότητες ταυτόσημες ή παρόμοιες με τον ιό Κονγκό-8, και ότι δεν έχουν αναφερθεί τέτοιες περιπτώσεις από άλλους συγγραφείς, μπορεί να υποδηλώνει ότι αυτή η μόλυνση έχει χαμηλό βαθμό μεταδοτικότητας και συγκριτικά περιορισμένη περιοχή διανομής. Αυτή η άποψη υποστηρίζεται ιδιαιτέρως από τα αποτελέσματα των εξετάσεων άλλου υλικού που ελήφθη από ασθενείς στη Λαϊκή Δημοκρατία του Κονγκό. Εκτός από τον ιό Κονγκό-8, ο ιός που απομονώθηκε σε κάθε περίπτωση δεν διέφερε από τον ιό της ευλογιάς. Ωστόσο, τα αποτελέσματα της εξέτασης των στελεχών Λιβερία-1 και Λιβερία-2, τα οποία σύμφωνα με τα αποτελέσματα που λάβαμε δεν διέφεραν ουσιαστικά από το στέλεχος Κονγκό-8, υποδηλώνουν ότι η ευλογιά των πιθήκων στον άνθρωπο δεν περιορίζεται αυστηρά σε διανομή, καθώς η Λαϊκή Δημοκρατία του Κονγκό και η Λιβερία δεν έχουν κοινά σύνορα και βρίσκονται αρκετά μακριά η μία από την άλλη. Μπορεί να υποτεθεί ότι οι περιπτώσεις ευλογιάς των πιθήκων στον άνθρωπο οφείλονται στην παρουσία μιας δεξαμενής του ιού σε ορισμένα είδη πιθήκων και ανθρωποειδών πιθήκων στις περιοχές αυτές. Αυτή η άποψη υποστηρίζεται από τα αποτελέσματα των ορολογικών εξετάσεων ζώων που παγιδεύτηκαν στην εστία μόλυνσης. Ο χαμηλός βαθμός μεταδοτικότητας της ευλογιάς των πιθήκων στον άνθρωπο ή η πλήρης απουσία μολυσματικότητας για άλλα άτομα στο νοικοκυριό του ασθενούς μπορεί να είναι ο λόγος για τον οποίο η ασθένεια δεν είχε ανακαλυφθεί νωρίτερα. Δεν υπάρχει αμφιβολία ότι η ανακάλυψη αυτής της μόλυνσης βοηθήθηκε από την καθιέρωση ενός συστήματος επιδημιολογικής επιτήρησης αρκετά ευαίσθητου ώστε να ανακαλύψει μεμονωμένες περιπτώσεις ασθένειας.
https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/263482/PMC2480798.pdf?sequence=1&isAllowed=y
**Συνοψίζοντας:**
Τον Μάρτιο του 2021, το NTI συνεργάστηκε με τη Διάσκεψη Ασφαλείας του Μονάχου για τη διεξαγωγή μιας άσκησης επί χάρτου με στόχο τη μείωση των βιολογικών απειλών υψηλής συνέπειας.
Στην άσκηση συμμετείχαν 19 ανώτερα στελέχη και ειδικοί από την Αφρική, την Αμερική, την Ασία και την Ευρώπη, με δεκαετίες συνδυασμένης εμπειρίας στη δημόσια υγεία, τη βιοτεχνολογία, τη διεθνή ασφάλεια και τη φιλανθρωπία.
Το σενάριο της άσκησης, το οποίο αναπτύχθηκε σε συνεργασία με τεχνικούς και πολιτικούς εμπειρογνώμονες, περιέγραφε μια θανατηφόρα, παγκόσμια πανδημία που προκαλείται από ένα ασυνήθιστο στέλεχος του “ιού” της ευλογιάς των πιθήκων, το οποίο εμφανίστηκε για πρώτη φορά στο φανταστικό έθνος Brinia και εξαπλώθηκε παγκοσμίως μέσα σε 18 μήνες.
Τελικά, το σενάριο αποκάλυψε ότι το αρχικό ξέσπασμα προκλήθηκε από τρομοκρατική επίθεση με τη χρήση παθογόνου οργανισμού, ο οποίος είχε κατασκευαστεί σε εργαστήριο με ανεπαρκείς διατάξεις βιοασφάλειας και αδύναμη εποπτεία.
Στο τέλος της άσκησης, η φανταστική πανδημία είχε ως αποτέλεσμα πάνω από τρία δισεκατομμύρια κρούσματα και 270 εκατομμύρια θανάτους παγκοσμίως.
Το πιο σημαντικό, οι συμμετέχοντες στην άσκηση συμφώνησαν ότι, παρά τις βελτιώσεις που ακολούθησαν την παγκόσμια αντίδραση στην «COVID-19», το διεθνές σύστημα πρόληψης, ανίχνευσης, ανάλυσης, προειδοποίησης και αντίδρασης σε πανδημίες είναι ανεπαρκές για να αντιμετωπίσει τις τρέχουσες και τις μελλοντικές προκλήσεις.
Το Κέντρο Ασφάλειας Υγείας του Johns Hopkins, σε συνεργασία με το Παγκόσμιο Οικονομικό Φόρουμ και το Ίδρυμα Bill and Melinda Gates, φιλοξένησε την Άσκηση Event 201, μια υψηλού επιπέδου άσκηση πανδημίας, στις 18 Οκτωβρίου 2019, στη Νέα Υόρκη.
Το Event 201 προσομοίωσε ένα ξέσπασμα ενός νέου ζωονοτικού “κορονοϊού” που μεταδίδεται από νυχτερίδες σε χοίρους και από εκεί σε ανθρώπους, και τελικά γίνεται αποτελεσματικά μεταδοτικός από άτομο σε άτομο, οδηγώντας σε σοβαρή πανδημία.
Ο παθογόνος οργανισμός και η ασθένεια που προκαλεί μοντελοποιήθηκαν σε μεγάλο βαθμό με βάση τον «SARS», αλλά είναι πιο μεταδοτικός σε κοινωνικό περιβάλλον από άτομα με ήπια συμπτώματα.
Δύο κρούσματα ασθένειας που μοιάζει με ευλογιά εμφανίστηκαν σε εργαστηριακούς πιθήκους το 1958 αρκετά αργά μετά την παραλαβή των πιθήκων, δηλαδή 51 και 62 ημέρες μετά την άφιξη και μόνο ένα μικρό ποσοστό των εκτεθειμένων ζώων εμφάνισε σημάδια ασθένειας.
Το υλικό για τον εμβολιασμό με αυγά συλλέχθηκε από τις φλυκταινώδεις βλάβες και αραιώθηκε περίπου 1:10 σε 0,004 hl. Ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα McIlvain pH 7,2
Το υλικό για πειράματα καλλιέργειας ιστών συλλέχθηκε από τις φλύκταινες με βαμβακοφόρο στυλεό, το οποίο βυθίστηκε αμέσως σε 2 ml Bacto-tryptose «Difco»
Η Bacto™ Tryptose είναι ένα παγκρεατικό χωνευτικό της καζεΐνης. Αναπτύχθηκε από τα εργαστήρια Difco Laboratories κατά τη διερεύνηση μιας πεπτόνης ιδιαίτερα κατάλληλης για την επεξεργασία ινδόλης από βακτήρια. Είναι επίσης αξιοσημείωτη για την απουσία ανιχνεύσιμων επιπέδων υδατανθράκων. https://www.americanpharmaceuticalreview.com/25246-Cell-Culture-Media-Supplements/5821993-Bacto-Tryptone/Και τα δύο αραιωτικά περιείχαν πενικιλλίνη (100 mg ανά ml) και στρεπτομυκίνη (0,1 mg ανά ml).
Μετά τη διαύγαση με φυγοκέντρηση χαμηλής ταχύτητας τα υπερκείμενα χρησιμοποιήθηκαν για εμβολιασμό στη χοριο-αλλαντοϊκή μεμβράνη εμβρύων Leghorn 11-12 ημερών και σε καλλιέργειες ιστών νεφρού πιθήκου, ανθρώπινου αμνίου και κυττάρων HeLa.
Στέλεχος Vaccinia (δηλ. όχι variola) παρτίδα NO. 1/50 111 που ελήφθη από το τμήμα εμβολίων κατά της ευλογιάς του εν λόγω ινστιτούτου χρησιμοποιήθηκε σε ορισμένα πειράματα προκειμένου να συγκριθεί με τον «ιό» της ευλογιάς των πιθήκων
Το στέλεχος αυτό διατηρήθηκε επί σειρά ετών με τμηματικές δερματικές διελεύσεις σε κουνέλια και μοσχάρια.
Χρησιµοποιήθηκε είτε το γλυκερινοποιηµένο τρίτο πέρασµα από µόσχο είτε ένα µεταγενέστερο πρώτο πέρασµα του υλικού αυτού στο χοριο-αλλαντοειδές.
Μετά τον εμβολιασμό τα αυγά επωάστηκαν για 48 ώρες στους 37° C όταν χρησιμοποιήθηκε ο «ιός» της vaccinia για τη μόλυνση και για 72 ώρες όταν χρησιμοποιήθηκε ο «ιός» του πιθήκου (δηλαδή τα συγκρινόμενα δείγματα δεν έτυχαν της ίδιας μεταχείρισης).
Για τις δοκιμές εξουδετέρωσης, ο μη αραιωμένος ορός αναμίχθηκε με ίσους όγκους αυξανόμενων αραιώσεων του «ιού»
Μετά από επώαση για 2-3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, ποσότητες 0,1 ml των μειγμάτων ορού-«ιού» εμβολιάστηκαν στις χοριο-αλλαντοϊκές μεμβράνες ομάδων πέντε εμβρύων ηλικίας 11-12 ημερών.
Οι μέθοδοι καλλιέργειας ιστών δεν περιγράφονται στην εργασία αυτή, ωστόσο αναφέρεται ότι κατά τη διάρκεια των πρώτων πειραμάτων εξετάζονταν καθημερινά για κυτταροπαθητικές αλλαγές, αλλά στα μεταγενέστερα η μικροσκοπική εξέταση γινόταν μόνο κάθε τέταρτη ή πέμπτη ημέρα.
Οι διαδοχικές διελεύσεις γίνονταν συνήθως με ποσότητες 0,2 ml μη αραιωμένου θρεπτικού υγρού που συλλέγονταν 5 ημέρες μετά τον εμβολιασμό.
Για τις δοκιµές πρόσδεσης συµπληρώµατος, παρασκευάστηκαν αντιγόνα από θρεπτικό υγρό καλλιεργειών ιστών καθώς και από χοριο-αλλαντοϊκές µεµβράνες µολυσµένες µε ιό της παρωτίτιδας ή του εµβολίου.
Παρασκευάστηκαν σε κουνέλια υπεράνοσοι οροί κατά της ευλογιάς των πιθήκων και των «ιών» της vaccinia με επαναλαμβανόμενες ενδοφλέβιες ενέσεις ποσοτήτων 0,5 έως 2,0 ml 10 τοις εκατό εναιωρημάτων μολυσμένων χοριο-αλλαντοϊκών μεμβρανών.
Τα ζώα έλαβαν συνολικά 7 ενδοφλέβιες ενέσεις (την 1η, 9η, 11η, 16η, 18η, 23η και 25η ημέρα).
Αιμορραγούσαν 10 ημέρες μετά την τελευταία ένεση
Χρησιμοποιήθηκε επίσης ένας άλλος υπερανοσοποιητικός ορός που παρασκευάστηκε με ανοσοποίηση κουνελιών με αντιγόνο vaccinia από λέμφο μοσχαριού, το οποίο είχε αδρανοποιηθεί με θέρμανση στους 70° C για 60 λεπτά.
Επιπλέον, σε ορισµένα πειράµατα χρησιµοποιήθηκε ένας υπερανοσοποιητικός ορός κουνελιού που παραχωρήθηκε ευγενικά από τον Dr. F. 0. MacCallum, Αγγλία.
Με άλλα λόγια, οι οροί που χρησιµοποιήθηκαν για τα πειράµατα αντισωµάτων προέρχονταν από πολλές πηγές µε διαφορετικές µεθόδους παρασκευής.Η ηλεκτρονική μικροσκοπία ακολούθησε τη μέθοδο των Van Royen & Scoff:
Τα πλέγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0,25 % διάλυμα κρυσταλλικής θρυψίνης για 4 ώρες στους 37° C και στη συνέχεια έκαναν 2 σύντομες πλύσεις σε αποσταγμένο νερό
Η σταθεροποίηση πραγματοποιήθηκε σε ατμούς 1% διαλύματος οσμιοτετροξειδίου για 15 λεπτά.
Για να ελαχιστοποιηθεί ο κίνδυνος μόλυνσης, τα πλέγματα θερμάνθηκαν στους 70° C για μία ώρα (1 ) πριν από τη σκιαγράφηση με λευκόχρυσο.
Ο προσαρμοσμένος στα αυγά «ιός» που αναπτύχθηκε σε χοριο-αλλαντοϊκές μεμβράνες «καθαρίστηκε» για την ηλεκτρονική μικροσκοπία μέσω διαφορικής φυγοκέντρησης και καθίζησης με κιτρικό οξύ σύμφωνα με τη μέθοδο των Henderson & McClean
Το τελικό εναιώρημα τοποθετήθηκε απευθείας σε πλέγματα με επικάλυψη φορμαβάρ, ξηράνθηκε και επεξεργάστηκε περαιτέρω όπως προαναφέρθηκε, με τη διαφορά ότι δεν πραγματοποιήθηκε πέψη με θρυψίνη
Με άλλα λόγια, ο «καθαρισμένος ιός» από τις μεμβράνες των αυγών υποβλήθηκε σε βαριά επεξεργασία και επικαλύφθηκε με πλατίνα πριν από την απεικόνισηΗ απομόνωση του «ιού» επιχειρήθηκε μόνο από έναν πίθηκο κατά τη διάρκεια της επιδημίας αριθ. 1 και από δύο πιθήκους κατά τη διάρκεια της επιδημίας αριθ. 2.
Οι περισσότερες μελέτες έγιναν από το «απομονωμένο στέλεχος» του πρώτου πιθήκου
Για την «απομόνωση του ιού» σε αυγά, αποξέσεις από διάφορες βλατίδες που αραιώθηκαν με lO^-3, 10^-5 και 10^-7 παρήγαγαν γκριζωπές οιδηματώδεις αλλαγές στις μεμβράνες
Επιπλέον, μικρές διακριτές αλλοιώσεις με τάση εξάπλωσης κατά μήκος των αιμοφόρων αγγείων παρατηρήθηκαν στα αυγά που εμβολιάστηκαν με την υψηλότερη αραίωση του «ιού»
Με τη συνέχιση της διέλευσης, χρησιμοποιώντας αραιά εναιωρήματα μεμβρανών ως σπόρο, η οιδηματώδης αντίδραση εξαφανίστηκε και οι μικρές αδιαφανείς θολωτές κηλίδες έγιναν κυρίαρχες
Σε μεμβράνες που συλλέχθηκαν μετά από επώαση για 3 ημέρες, αυτές οι κηλίδες έμοιαζαν πολύ με εκείνες που περιγράφονται για τον «ιό της variola».
Για την «απομόνωση του ιού» σε καλλιέργειες ιστών, φλυκταινώδη απόξεση γαλακτωματοποιήθηκε σε ζωμό-τρυπτόζης (tryptose-broth), διαυγάσθηκε με φυγοκέντρηση χαμηλής ταχύτητας και το υπερκείμενο εμβολιάστηκε σε καλλιέργειες ιστών νεφρού πιθήκου, ανθρώπινου αμνίου και κυττάρων HeLa.
Κυτταροπαθητικές αλλοιώσεις αναπτύχθηκαν σε όλους τους τύπους κυττάρων μετά από συνεχή επώαση για 2-3 ημέρες και η καταστροφή ήταν σχεδόν πλήρης μετά από 5 ημέρες.
Με άλλα λόγια, όσο περισσότερο επωάζονταν η τοξική κυτταρική σούπα τους, τόσο περισσότερο πέθαιναν τα κύτταραΣτις καλλιέργειες κυττάρων HeLa δεν παρατηρήθηκαν σχηματισμοί όπως στις άλλες κυτταρικές σειρές αλλά κατά τα άλλα η κυτταροπαθογόνος επίδραση ήταν παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε στους άλλους τύπους κυττάρων που χρησιμοποιήθηκαν
Κατά τη συνεχιζόμενη διέλευση σε καλλιέργεια ιστού, οι κυτταροπαθογόνες αλλαγές αναπτύχθηκαν κάπως πιο αργά, γεγονός που υποδηλώνει ότι το υγρό διέλευσης περιείχε λιγότερο «ιό» από το φλυκταινώδες υλικό.
Η υπόθεση αυτή υποστηρίχθηκε από τιτλοδοτήσεις αυγών
Κατά τη διάρκεια του πρώτου ξεσπάσματος της νόσου της ευλογιάς, ορισμένοι προφανώς υγιείς πίθηκοι cynomolgus που ανήκαν στην προσβεβλημένη αποστολή είχαν θυσιαστεί για άλλους σκοπούς.
Οι νεφροί από τα ζώα αυτά περιλούσθηκαν με θρυψίνη και παρασκευάστηκαν σωλήνες καλλιέργειας από τα εναιωρήματα των κυττάρων
Σε ορισμένους από τους σωλήνες (περίπου 5%) κυτταροπαθητικές αλλαγές αναπτύχθηκαν 7 έως 12 ημέρες αργότερα και απομονώθηκε ο «ιός» της ευλογιάς των πιθήκων από αυτές τις καλλιέργειες
Κατά τη διάρκεια της 2ης επιδημίας, ο «ιός της ευλογιάς των πιθήκων» ήταν και πάλι παρών σε ένα μικρό ποσοστό των σωληναρίων που παρασκευάστηκαν από τους νεφρούς φαινομενικά υγιών -αλλά εκτεθειμένων- ζώων.
Σε αυτή την περίπτωση, ο «ιός» ανακτήθηκε από καλλιέργειες πιθήκου που είχε θυσιαστεί 4 ημέρες πριν από το ξέσπασμα της επιδημίας.
Αυτή ήταν η µόνη περίπτωση κατά την οποία ο «ιός» της ευλογιάς των πιθήκων βρέθηκε σε καλλιέργειες που είχαν προετοιµαστεί σε χρόνο κατά τον οποίο δεν υπήρχε κλινική ασθένεια στην αποικία.
Τα πεδία που παρουσιάζονται στις εικόνες ΗΜ (Ηλεκτρονικού Μικροσκοπίου) παραδέχθηκαν ότι δεν ήταν απαλλαγμένα από συνοδευτικές προσμίξεις, ωστόσο οι ερευνητές μπόρεσαν να διακρίνουν τα περιγράμματα αρκετών σωματιδίων αρκετά νωρίς ώστε να διακρίνεται η γνωστή ορθογώνια εμφάνιση που χαρακτηρίζει τους «ιούς» της ομάδας της ευλογιάς.
Μία από τις ομάδες σωματιδίων φαινόταν κάπως μικρότερη από τα κανονικά σωματίδια του «ιού» της ευλογιάς, αλλά το θεώρησαν πιθανότατα αποτέλεσμα συρρίκνωσης κατά την προετοιμασία.
Με άλλα λόγια, τα δείγματα που απεικονίστηκαν με ΗΜ δεν ήταν καθαρισμένα καθώς υπήρχαν προσμίξεις μέσα στα δείγματα που απεικονίστηκαν και τα ορθογώνια σωματίδια επιλέχθηκαν ως «ιός» καθώς έμοιαζαν με τυπικό «ιό της ευλογιάς»... δηλαδή ακολούθησαν τη γνωστή τσαρλατανίστικη μέθοδο του "δείχνω και ..ορίζω"
Λέγεται ότι απομονώθηκε και μελετήθηκε ο αιτιολογικός παράγοντας μιας περίπτωσης νόσου σε άνθρωπο που εκδηλώθηκε στη Λαϊκή Δημοκρατία του Κονγκό με κλινική εικόνα παρόμοια με την ευλογιά
Ο παράγοντας ταυτοποιήθηκε ως ο «ιός της ευλογιάς των πιθήκων».
Ορισμένα τοπικά είδη πιθήκων και πιθηκοειδών εξετάστηκαν ορολογικά στην περιοχή του Κονγκό για να προσδιοριστεί η πιθανότητα μόλυνσης του ανθρώπου από τον «ιό» της ευλογιάς των πιθήκων
Κατά τη διάρκεια της έρευνας, αποδείχθηκε «πειστικά» ότι ο «ιός της ευλογιάς των πιθήκων» και τα υπό εξέταση στελέχη μπορούσαν να διακριθούν από τους συνήθεις «ιούς» της βαριόλας και της vaccinia με βάση τη συμπεριφορά τους σε καλλιέργεια συνεχούς κυτταρικής γραμμής νεφρών εμβρύου χοίρου.
Με άλλα λόγια, εξέτασαν τις ΕΝΔΕΙΚΤΙΚΕΣ χημικές αντιδράσεις και προσδιόρισαν διαφορετικούς «ιούς» με βάση αυτό και όχι με ΑΜΕΣΕΣ αποδείξεις καθαρισμένων/απομονωμένων σωματιδίων απευθείας από τα υγρά.Θεωρούνταν ότι μόνο δύο «ιοί της ευλογιάς», εκτός από τους «ιούς» της βαριόλας και του alastrim, μπορούσαν να προκαλέσουν γενικευμένη λοίμωξη στον άνθρωπο συνοδευόμενη από δερματικές αλλοιώσεις: ο «ιός της ευλογιάς των αγελάδων» και ο «ιός της εμβολίας».
Το 1958 ανακαλύφθηκε ένας νέος εκπρόσωπος της ομάδας των «ιών της ευλογιάς», ο «ιός της ευλογιάς των πιθήκων».
Έκτοτε έχουν καταγραφεί και μελετηθεί ορισμένα κρούσματα της ευλογιάς των πιθήκων μεταξύ παγιδευμένων ζώων που διατηρούνται σε καταφύγια και ζωολογικούς κήπους —»> (δεν υπάρχουν κρούσματα σε ζώα στη φύση;)
Η σοβαρότητα της νόσου στους πιθήκους ποικίλλει και εξαρτάται σε σημαντικό βαθμό από το είδος
Η νόσος ακολουθεί την πιο σοβαρή της πορεία στους ανθρωποειδείς πιθήκους.
Σε κανένα από αυτά τα κρούσματα δεν είχε σημειωθεί ασθένεια στον άνθρωπο που να οφείλεται στον «ιό» της ευλογιάς των πιθήκων
Τα στοιχεία που παρατίθενται σε αυτό το έγγραφο, ωστόσο, λέγεται ότι δείχνουν ότι ο «ιός» της ευλογιάς των πιθήκων μπορεί να προκαλέσει ασθένεια παρόμοια με τη συνηθισμένη ευλογιά στον άνθρωπο
Ο «ιός» «απομονώθηκε» από υλικό που ελήφθη από ένα μη εμβολιασμένο παιδί 9 μηνών (A. I.) από το χωριό Bokenda στην επαρχία Basankusu της Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό, το οποίο έπασχε από ασθένεια που πιθανολογείται ότι ήταν ευλογιά.
Δεν καταγράφηκαν κρούσματα μόλυνσης από την ασθένεια που μοιάζει με τη βαριόλα και εξαπλώθηκε από το παιδί A. I.
Σχεδόν όλος ο πληθυσμός του χωριού Bokenda είχε εμβολιαστεί κατά της ευλογιάς ένα χρόνο πριν από την εμφάνιση του περιστατικού αυτού κατά τη διάρκεια μαζικής εκστρατείας εμβολιασμού κατά της ευλογιάς σε ολόκληρη τη χώρα
Το υλικό από τους ασθενείς στη Λαϊκή Δημοκρατία του Κονγκό ελήφθη μέσω του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας αεροπορικώς σε ειδική συσκευασία ===> (δεν αναφέρεται τι περιείχε αυτή)<==== και αποτελούνταν από το περιεχόμενο δερματικών βλαβών (επιχρίσματα και επιχρίσματα σε αντικειμενοφόρους πλάκες).
Τα στελέχη Liberia-I, Liberia-2 και V-70 1 266 ελήφθησαν μέσω του ΠΟΥ στις 11 Δεκεμβρίου 1970, στις 18 Δεκεμβρίου 1970 και στις 30 Απριλίου 1971, αντίστοιχα, με τη μορφή εναιωρημάτων χοριοαλλαντικής μεμβράνης (CAM) ====»>(εξαιρετικά αγγειωμένη μεμβράνη που βρίσκεται στα αυγά ορισμένων αμνιωτών όπως τα πτηνά και τα ερπετά), <==== μολυσμένης CAM και κρούστας από έναν ασθενή (Liberia-1).
Τα στελέχη αυτά είχαν περάσει μία ή δύο φορές στο εργαστήριο και χρησιμοποιήθηκαν στα πειράματα με τη μορφή εναιωρημάτων CAM πρώτης ή δεύτερης διέλευσης ====> (χωρίς να λαμβάνονται υπόψη οι διελεύσεις που έγιναν πριν από την παραλαβή τους στο εργαστήριο).
Τα στελέχη Congo-8, Liberia-1, Liberia-2 και V-70 1 266 συγκρίθηκαν με «ιούς» της βαριόλας (στελέχη MT-60 και MK-60-Harvey), της ευλογιάς των αγελάδων (στέλεχος Brighton), της ευλογιάς των πιθήκων (στέλεχος Κοπεγχάγης) και της εμβολίας (στελέχη Tanzania-3 και France).
Οι «ιοί» χρησιμοποιήθηκαν με τη μορφή εναιωρήματος μολυσμένου CAM μετά από ένα ή δύο περαιτέρω περάσματα σε έμβρυα νεοσσών
Οι οροί και τα όργανα των πιθήκων που αλιεύθηκαν στην περιοχή του χωριού Bokenda παραλήφθηκαν στο εργαστήριο σε κατεψυγμένη κατάσταση σε δοχείο υγρού αζώτου.
Χρησιμοποιήθηκαν οι συνήθεις μέθοδοι ===»> (δηλ. καλλιέργεια ιστών και κυττάρων)<=== για την «απομόνωση» του «ιού» από υλικά που ελήφθησαν από ασθενείς και από όργανα πιθήκων και για τη διερεύνησή τους μέσω της δοκιμής μικροκατακρήμνισης σε πηκτή άγαρ.
Οι συνήθεις μέθοδοι που χρησιμοποιήθηκαν για τη μελέτη των γενετικών χαρακτηριστικών των «ιών» περιλάμβαναν:
Ο τύπος της pock στο CAM και οι πλάκες σε κυτταροκαλλιέργειες
Η αιμοσυγκολλητική δραστηριότητα
Παθογένεια για τα κουνέλια μετά από μόλυνση με ενδοδερμικό εμβολιασμό ή ουλές και άλλες ιδιότητες
Ο τύπος της κυτταροπαθητικής επίδρασης προσδιορίστηκε στις ακόλουθες κυτταροκαλλιέργειες:
Δύο πρωτογενείς (ινοβλάστες εμβρύου νεοσσού και κύτταρα νεφρού πιθήκου)
Τέσσερις συνεχείς (VERO, A-1, PEK, HEP-2)
Οι δόσεις που χορηγήθηκαν στα κουνέλια ενδοδερμικά και με ουλές ήταν 10^6 μονάδες που σχηματίζουν κηλίδες ανά 0,1 ml.
Οι δόσεις που χρησιμοποιήθηκαν για τη μελέτη της παθογένειας σε έμβρυα νεοσσών κυμαίνονταν από 10 έως 10^7 pock-forming units ανά 0,1 ml, ενώ τα αποτελέσματα διαβάζονταν μετά από 72 ώρες.
Ο τύπος της κυτταροπαθητικής επίδρασης μελετήθηκε με μόλυνση με δόσεις «ιού» που κυμαίνονταν από 10 έως 10^7 TCD50, με ανάγνωση των αποτελεσμάτων από 24 ώρες έως 7 ημέρες μετά τη μόλυνση.
Με άλλα λόγια, οι δόσεις που χρησιμοποιήθηκαν και ο χρόνος προσδιορισμού των αποτελεσμάτων ποικίλλουν.Πριν από την εξέταση, οι οροί των πιθήκων αποψύχθηκαν και θερμάνθηκαν στους 56°C για 30 λεπτά
Βάσει της εξέτασης των μολυσμένων CAM μετά από 48 ώρες και της ορολογικής ταυτοποίησης με τη δοκιμασία μικροκατακρήμνισης σε πηκτή άγαρ, ο «ιός» αυτός ταυτοποιήθηκε αρχικά ως «ιός της βαριόλας» (23 Σεπτεμβρίου 1970).
Ωστόσο, ο χαρακτήρας των κηλίδων στο CAM είχε αλλάξει απότομα μετά από 72 ώρες και η παρατήρηση αυτή, σε συνδυασμό με τα αποτελέσματα των δοκιμών αιμοσυγκολλητικής δραστηριότητας, υπέδειξε ότι ο απομονωμένος παράγοντας ήταν διαφορετικής φύσης.
Με άλλα λόγια, η αρχική εξέταση και η ορολογική διερεύνηση τους έδειξαν ότι το αγόρι είχε ευλογιά, αλλά μετά από 72 ώρες περαιτέρω καλλιέργειας, οι κηλίδες στη χοριοαλλαντοϊκή μεμβράνη άλλαξαν και αποφάσισαν ότι ...δεν ήταν πλέον ευλογιά!!!Οι έρευνες έδειξαν ότι ο απομονωμένος «ιός» (στέλεχος Congo-8) παρήγαγε έναν ιδιότυπο τύπο κηλίδας στο CAM, που διέκρινε το στέλεχος τόσο από τον «ιό» της εμβολινίας όσο και από τον συνηθισμένο «ιό» της βαριόλας ===»>(δηλαδή δεν μπορούσαν να δουν τα σωματίδια του «ιού» αλλά υπέθεσαν ότι η διαφορά στον τύπο της κηλίδας στο CAM σήμαινε ότι ήταν διαφορετικός)
Αυτός ο «ιός» έδειξε επίσης υψηλό βαθμό αιμοσυγκολλητικής δραστηριότητας και μια έντονη τάση να προκαλεί αλλοιώσεις σε χαραγμένο δέρμα κουνελιών ====»> (πόσο συγκλονιστικό και εντελώς πρωτότυπο είναι το γεγονός ότι οι αλλοιώσεις εμφανίστηκαν …εκεί όπου τα κουνέλια είχαν χαραχθεί και κοπεί!!!!).
Όταν τα κουνέλια μολύνθηκαν ενδοδερμικά, αναπτύχθηκε νέκρωση ====»>(ο θάνατος των περισσότερων ή όλων των κυττάρων ενός οργάνου ή ιστού λόγω ασθένειας, τραυματισμού ή αποτυχίας της παροχής αίματος)<===== στο κέντρο της πυκνής διηθημένης περιοχής που σχηματίστηκε στο σημείο του εμβολιασμού
Στα κουνέλια που μολύνθηκαν με ουλές και ενδοδερμικά, η μόλυνση πήρε γενικευμένο χαρακτήρα
Μετά από επώαση 48 ωρών, όπως ήδη αναφέρθηκε, οι βλάβες στο CAM των νεοσσών διέφεραν ελάχιστα από εκείνες που προκαλούνται από τον συνηθισμένο «ιό» της ευλογιάς
Ωστόσο, μετά από 72 ώρες είχαν ήδη γίνει πιο επίπεδες και αιμορραγίες εμφανίστηκαν στο κέντρο των περισσότερων κηλίδων.
Ο ασυνήθιστος συνδυασμός ιδιοτήτων και η στενή ομοιότητα ορισμένων χαρακτηριστικών του στελέχους Congo-8 με εκείνα άλλων «ιών» της ομάδας της ευλογιάς κατέστησαν αναγκαία τη λεπτομερή σύγκριση του «ιού» σε πειράματα με τους «ιούς» της ευλογιάς των αγελάδων, της ευλογιάς των πιθήκων, της variola και της vaccinia.
Τα αποτελέσµατα της συγκριτικής µελέτης έδειξαν ότι ο Congo-8, ο Liberia-I, ο Liberia-2 και ο V-70 1 266 δεν διέφεραν ουσιαστικά µεταξύ τους σύµφωνα µε τις δοκιµές που χρησιµοποιήθηκαν, ούτε διέφεραν από τον κλασικό τύπο «ιού» της ευλογιάς των πιθήκων του στελέχους της Κοπεγχάγης.
Όλα τα 4 στελέχη παρήγαγαν πλάκες πανομοιότυπης μορφολογίας και μεγέθους, είτε χρησιμοποιήθηκε επικάλυψη άγαρ (σε ινοβλαστικά κύτταρα εμβρύου νεοσσού) είτε όχι (συνεχής κυτταρική σειρά Vero).
Σε αντίθεση με τον συνηθισμένο «ιό της βαριόλας», ο οποίος υπό επικάλυψη άγαρ παράγει μικρές πλάκες με διάμετρο μικρότερη από 1 mm, ο «ιός της ευλογιάς των πιθήκων» και οι απομονώσεις Congo-8, Liberia-1 και Liberia-2 σχημάτισαν μεγαλύτερες πλάκες με ορατή εσωτερική δομή και ανομοιόμορφο περιθώριο
Με άλλα λόγια, προσδιόρισαν την ομοιότητα των αόρατων «ιών» από τις πλάκες που παρήγαγαν και όχι από την επίδειξη καθαρισμένων/απομονωμένων σωματιδίων στην ΗΜ (Ηλεκτρονική Μικροσκοπία)Οι διαφορές στον τύπο του κυτταροπαθητικού αποτελέσματος μεταξύ αυτών των «ιών» και του «ιού» της βαριόλας ήταν λιγότερο έντονες από τις διαφορές στον σχηματισμό πλακών ===»> (δηλ. η CPE (κυτταροπαθητική επίδραση δεν ήταν διακριτή)
Η μελέτη ορισμένων κυτταρικών καλλιεργειών που μολύνθηκαν με τους ιούς Congo-8, Liberia-2 και Κοπεγχάγης έδειξε ότι τα πιο ευαίσθητα ήταν τα κύτταρα VERO (τίτλοι 10^7-5 και 10^6,2 TCD5O) σε σύγκριση με τα κύτταρα ινοβλαστών εμβρύου νεοσσού (τίτλοι 10^5-5-10^6 5 TCD5O) και τα κύτταρα Α-1 (τίτλοι 10^5,5-10^6 5 TCD5O).
Αυτοί οι «ιοί» παρουσίασαν έντονα φαινόμενα αιμοαπορρόφησης σε ινοβλάστες εμβρύου νεοσσού, κύτταρα νεφρού πιθήκου, κύτταρα Vero, κύτταρα Α-1 και κύτταρα HEP-2.
Είχε αποδειχθεί προηγουµένως (Marennikova, Gurvic & Seluhina, 1970) ότι ένα χαρακτηριστικό του «ιού της ευλογιάς των πιθήκων» που τον διακρίνει από τους «ιούς» της βαριόλας και του εµβολίου είναι η ανικανότητά του για ενεργό πολλαπλασιασµό και η απουσία του φαινοµένου της αιµοαπορρόφησης σε καλλιέργεια συνεχούς κυτταρικής σειράς νεφρών εµβρύου χοίρου (PEK) ===»> (ακόμα περισσότερες έµµεσες µη ειδικές χηµικές αντιδράσεις).
Καθώς η συμπεριφορά των στελεχών Congo-8, Liberia-1 και Liberia-2 έδειξε ότι συμπεριφέρονται παρόμοια, προσδιορίστηκε ότι πρόκειται για ευλογιά των πιθήκων και όχι για ευλογιά
Μετά από ενδοεγκεφαλική μόλυνση λευκών ποντικιών, τα στελέχη αυτά, όπως και ο «ιός της ευλογιάς των πιθήκων», ήταν σημαντικά πιο παθογόνα από τον «ιό της βαριόλας» για τα ενήλικα ποντίκια
Κατά τη διερεύνηση πιθήκων και πιθήκων, η ανίχνευση αντισωμάτων στον «ιό» της εμβολίας έδειξε ότι ένας παράγοντας της ομάδας των «ιών της ευλογιάς» κυκλοφορούσε μεταξύ ορισμένων τοπικών ειδών πιθήκων
Η παρουσία κατακρημνισμάτων και το υψηλό επίπεδο αντιαιμοσυγκολλητίνης που βρέθηκε σε έναν χιμπατζή υπέδειξε ότι είχε μολυνθεί
Η άποψη αυτή υποστηρίχθηκε από την «απομόνωση» από τους νεφρούς του ίδιου χιμπατζή ενός «ιού» που μοιάζει με τον ιό της variola.
Οι αλλοιώσεις κατά την ουλοποίηση των κουνελιών από τον «ιό» Congo-8, σε συνδυασμό με άλλα (έμμεσα) χαρακτηριστικά (αιμορραγικός τύπος σπυριών στο CAM, τύποι πλάκας σε καλλιέργεια ιστών, υψηλός βαθμός αιμοσυγκολλητικής δραστηριότητας, θερμοκρασία οροφής για την ανάπτυξη των αλλοιώσεων κ.λπ.) καθιστούσαν αδύνατο να θεωρηθεί ως παραλλαγή του «ιού» της variola =====»» (παρόλο που αρχικά ισχυρίζονταν ότι ήταν)
Τα στοιχεία έδειχναν ότι ο «ιός» της ευλογιάς των πιθήκων μπορεί να προκαλέσει ασθένεια στον άνθρωπο ====»> (παρόλο που αυτό δεν αποδείχθηκε ποτέ)
Μπορεί να υποτεθεί ότι τα κρούσματα της ευλογιάς των πιθήκων στον άνθρωπο προκαλούνται από την παρουσία δεξαμενής του «ιού» σε ορισμένα είδη πιθήκων και πιθήκων στις σχετικές περιοχές
Η άποψη αυτή υποστηρίζεται από τα αποτελέσµατα των ορολογικών εξετάσεων των ζώων που παγιδεύτηκαν στην εστία της µόλυνσης.
Ο χαµηλός βαθµός µεταδοτικότητας της ευλογιάς των πιθήκων στον άνθρωπο ή η πλήρης απουσία µολυσµατικότητας για τα άλλα άτοµα του νοικοκυριού του ασθενούς µπορεί να είναι ο λόγος για τον οποίο η νόσος δεν ανακαλύφθηκε νωρίτερα.
Θα πρέπει όλοι να ανησυχούν για την ευλογιά των πιθήκων, όπως προειδοποίησε ο Joe Biden; Αν καταλάβετε ότι από τις αρχικές αποδείξεις για τον «ιό» της ευλογιάς των πιθήκων τόσο στα ζώα όσο και στον άνθρωπο λείπουν οι φυσικές αποδείξεις των καθαρισμένων και απομονωμένων σωματιδίων απευθείας από τα υγρά του ξενιστή, τα οποία στη συνέχεια αποδείχθηκαν παθογόνα με φυσικό τρόπο, θα είστε σε θέση να παραμερίσετε εύκολα την τελευταία προσπάθεια προπαγάνδας του φόβου. Η λήψη δειγμάτων από πιθήκους και η υποβολή τους σε καλλιέργεια ιστών, αυγών και κυττάρων με την προσθήκη διαφόρων άλλων χημικών ουσιών και η αναζήτηση μοτίβων που σχηματίζονται μετά την επώαση δεν αποδεικνύει την ύπαρξη ενός «ιού». Η λήψη αυτής της τοξικής σούπας και η έγχυσή της με πολυάριθμους τρόπους ή/και η χάραξή της στο δέρμα των ζώων και η παρατήρηση του σχηματισμού βλαβών δεν αποτελεί αναπαράσταση της ίδιας ασθένειας. Είναι μια αφύσικη πειραματική αντίδραση σε διάφορες μορφές βασανιστηρίων και κακοποίησης που υφίστανται τα ζώα και δεν αποδεικνύει έναν «ιό» ως αιτία. Η διενέργεια διαφόρων δοκιμών με ανάμειξη του αίματος ζώων και ανθρώπων και ο ισχυρισμός ότι τα αποτελέσματα σημαίνουν ότι υπάρχει ένα συγκεκριμένο “αντίσωμα” που αντιδρά σε έναν συγκεκριμένο «ιό», όταν κανένα από τα δύο δεν έχει καθαριστεί και απομονωθεί σωστά, επίσης δεν αποδεικνύει έναν «ιό». Όλα αυτά τα παραδείγματα αποτελούν έμμεσες αποδείξεις που χρησιμοποιούνται για να δηλωθεί η ύπαρξη ενός αόρατου «ιού», οι οποίες είναι αποτέλεσμα αφύσικων χημικών αντιδράσεων και επινοήσεων που δημιουργήθηκαν στο εργαστήριο. Πραγματοποιούνται και αξιολογούνται χωρίς να υπάρχουν φυσικά άμεσες αποδείξεις για τα υποτιθέμενα σωματίδια του εν λόγω «ιού», προκειμένου να συναχθεί η παρουσία του λόγω των αντιδράσεων που προκύπτουν. Αυτοί οι ερευνητές προσπαθούν να σας πείσουν για την ιδέα του Άγιου Βασίλη μέσω μισοφαγωμένων μπισκότων, δώρων κάτω από το δέντρο και ενός πολύχρωμου σημειώματος που μοιάζει ύποπτα με τον γραφικό χαρακτήρα της μητέρας σας.
Ένα παρόμοιο συμπέρασμα σχετικά με την έλλειψη αποδείξεων όσον αφορά την ύπαρξη του «ιού» της ευλογιάς των πιθήκων έβγαλαν οι Drs Sam και Mark Bailey στο πρόσφατο εξαιρετικό άρθρο τους για το θέμα αυτό:
«Σε κάθε περίπτωση, μια ανασκόπηση των επιστημονικών στοιχείων αποκάλυψε ότι όσον αφορά την ευλογιά των πιθήκων: (α) δεν υπάρχει καμία απόδειξη για ένα φυσικό σωματίδιο που να ανταποκρίνεται στον ορισμό του ιού, (β) δεν υπάρχει καμία απόδειξη ότι κάτι μεταδίδεται μεταξύ των ανθρώπων και (γ) δεν υπάρχει κανένας τρόπος να επιβεβαιωθεί η διάγνωση της ευλογιάς των πιθήκων εκτός αν πιστεύετε σε κλινικά μη επικυρωμένες εξετάσεις όπως τα κιτ PCR που έχουν παραχθεί. Με άλλα λόγια, αν δούμε μια «πανδημία» ευλογιάς των πιθήκων που θα χρησιμοποιηθεί ως δικαιολογία για να παίξει περισσότερο ρόλο η παγκοσμιοποιημένη τρομοκρατία, θα είναι στην πλάτη μιας άλλης πανδημίας PCR, όχι μιας πανδημίας που έχει βάση στη φύση».
Μυθολογία της ευλογιάς των πιθήκων
Μπαίνουν σε μεγάλη λεπτομέρεια αναλύοντας τις παραπλανητικές πρακτικές του CDC σε ένα υποτιθέμενο ξέσπασμα ευλογιάς των πιθήκων στις ΗΠΑ το 2003 και την (έκπληξη-έκπληξη) κατάχρηση της PCR για τη διάγνωση των κρουσμάτων. Συνιστώ ανεπιφύλακτα να διαβάσετε ολόκληρο το άρθρο.
Το συμπέρασμα είναι ότι δεν υπάρχει κανένας λόγος να φοβάται κανείς σήμερα την “ευλογιά των πιθήκων” περισσότερο από ό,τι υπήρχε πριν από την άσκηση και τα επακόλουθα πρωτοσέλιδα που προκαλούσαν φόβο. Η ευλογιά των πιθήκων δεν είναι τίποτα άλλο παρά η επαναταξινόμηση των ίδιων συμπτωμάτων της νόσου που ανήκουν σε μια επιλεγμένη ομάδα, όπως η ευλογιά, η ανεμοβλογιά, ο έρπητας ζωστήρας, η ιλαρά κ.λπ.b Είναι όλα διαφορετικά επίπεδα της ίδιας διαδικασίας αποτοξίνωσης. Θα μπορούσε να υπάρξει αύξηση του αριθμού των ανθρώπων που υποφέρουν από αυτά τα συμπτώματα; Σίγουρα, καθώς ένας τεράστιος αριθμός ανθρώπων έχει επανειλημμένα υποβληθεί σε πειραματικές ενέσεις ξανά και ξανά κατά τη διάρκεια των τελευταίων δύο ετών. Τελικά, ο οργανισμός πρέπει να απαλλαγεί από την τοξική υπερφόρτωση, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε ένα παρόμοιο σύνολο συμπτωμάτων, όπως παρατηρείται σε περιπτώσεις της λεγόμενης ευλογιάς των πιθήκων. Ωστόσο, όπως πάντα, δεν χρειάζεται να φοβόμαστε κανέναν «ιό» ούτε οποιαδήποτε μόλυνση. Δεν υπάρχει τίποτε άλλο σε αυτή την ιστορία με την ευλογιά των πιθήκων εκτός από μια καλά οργανωμένη εκστρατεία φόβου. Το μόνο πράγμα που πρέπει να φοβάστε σχετικά με αυτή την επίθεση των μέσων μαζικής ενημέρωσης είναι το ερώτημα που θέτει η κάτωθι αφίσα:
Ποια διασημότητα θα κολλήσει πρώτη “ευλογιά των πιθήκων”;
Αν σας άρεσε αυτό το άρθρο και θα θέλατε να βοηθήσετε να στηρίξετε το συνεχές έργο μου, ο παρακάτω σύνδεσμος είναι μια επιλογή.
Παρακαλώ βοηθήστε να στηρίξετε το έργο μου. 🙏
---Δικτυογραφία :
Monkey Business
https://viroliegy.com/2022/05/24/monkey-business/