"Ιοί" : Το Πρόβλημα του Καθαρισμού "τους"
Μετάφραση: Απολλόδωρος
21 Σεπτεμβρίου 2021 | ViroLiegy | Διαβάστε το εδώ
Είναι ολοένα και πιο σαφές ότι ο καθαρισμός ενός "ιού" είναι αδύνατος. Υπάρχουν πάρα πολλές προσμίξεις, μεταβλητές, άγνωστοι και νανοσωματίδια παρόμοιου σχήματος/μεγέθους για να μπορούμε να πούμε με βεβαιότητα ότι τα σωματίδια που θεωρούνται "ιός" σε μια κυτταρική καλλιέργεια είναι τα ίδια που απεικονίζονται με TEM ή για τα οποία λέγεται ότι βασίζεται η αλληλουχία του γονιδιώματος. Προκειμένου να ρίξουμε περισσότερο φως σε αυτό το πρόβλημα, ας δούμε δύο διαφορετικές χρονικές στιγμές για να δούμε ποια ήταν η κατάσταση των μεθόδων καθαρισμού καθώς και ποια, αν υπήρχε, θεωρούνταν δυνατή η καθαριότητα. Η πρώτη πηγή προέρχεται από ένα βιβλίο του 1975, το οποίο κατά λάθος κάνει λόγο για την αδυναμία πλήρους καθαρισμού/απομόνωσης των σωματιδίων που θεωρούνται "ιοί":
--> Καθαρισμός ιών απο την "Χημεία των ιών" (Chemistry of Viruses) Springer Study Edition.
"Κάθε ιός θέτει ένα ατομικό πρόβλημα καθαρισμού που σχετίζεται με τις ιδιότητες του ιού, τη φύση του ξενιστή και τις συνθήκες καλλιέργειας. Κατά συνέπεια, δεν είναι δυνατόν να περιγραφεί μια διαδικασία καθαρισμού που θα λειτουργεί με την ίδια αποτελεσματικότητα για όλους τους ιούς".
"Με αυτούς τους όρους, καθαρότητα σημαίνει ο βαθμός ελευθερίας από μη ιϊκά συστατικά ή, αντίστροφα, ο βαθμός στον οποίο τα ιικά σωματίδια παρουσιάζουν ακαθάριστη φυσικοχημική ομοιογένεια. Καμία μεμονωμένη δοκιμή δεν είναι επαρκής για να καθορίσει αυτό το είδος καθαρότητας, αλλά μια συνεπής απάντηση από κάθε μία από πολλές δοκιμές καθορίζει το βαθμό ομοιογένειας του εν λόγω παρασκευάσματος και, ως εκ τούτου, την εμπιστοσύνη που πρέπει να δοθεί στα αναλυτικά δεδομένα και σε άλλα αποτελέσματα που λαμβάνονται με ένα τέτοιο παρασκεύασμα".
"Το κατώτερο όριο της επιμόλυνσης που μπορεί να ανιχνευθεί είτε με ανάλυση καθίζησης είτε με ηλεκτροφόρηση είναι μεταβλητό και εξαρτάται από τη φύση του υλικού και τις συνθήκες της δοκιμής. Όπως εφαρμόζεται συνήθως στη δοκιμή παρασκευασμάτων ιών, οι μέθοδοι αυτές δεν αναμένεται να ανιχνεύσουν λιγότερο από μερικά τοις εκατό μολυσματικών ουσιών (Sharp 1953). Για πολλούς σκοπούς, είναι ικανοποιητική η μέτρηση της καθαρότητας σε αυτόν τον βαθμό, αλλά καθώς τα εργαλεία για χημικές και βιολογικές αναλύσεις γίνονται ολοένα και πιο αιχμηρά, θα είναι όλο και πιο αναγκαίο να θυμόμαστε τους περιορισμούς των μετρήσεων με καθίζηση και ηλεκτροφόρηση".
"Το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την άμεση εξέταση της φυσικής ομοιογένειας ενός παρασκευάσματος ιού. Υπό ευνοϊκές συνθήκες είναι δυνατόν να ανιχνευθεί μια πρόσμιξη που υπάρχει σε συγκέντρωση μόλις 1 % του ιού (Williams 1954). Είναι προφανές, βέβαια, ότι οι προσμίξεις θα διαφύγουν της ανίχνευσης εάν έχουν το ίδιο μέγεθος και σχήμα με τα σωματίδια του ιού ή εάν είναι κάτω από το μέγεθος που διαχωρίζεται από το μικροσκόπιο. Επίσης, τα σωματίδια που υπάρχουν σε μικρό αριθμό αλλά έχουν μεγάλη μάζα εύκολα παραβλέπονται, λόγω των δυσκολιών δειγματοληψίας (Lauffer 1951)".
"Συνοψίζοντας, κανένα ενιαίο κριτήριο καθαρότητας δεν είναι επαρκές για να διαπιστωθεί η ομοιογένεια ενός παρασκευάσματος ιού. Αυτό πρέπει να γίνει με την εφαρμογή κριτικά όσο το δυνατόν περισσότερων δοκιμών (βλ. Knight 1974)".
Αυτή η δεύτερη πηγή είναι από τον Αύγουστο του 2020 και ασχολείται κυρίως με τις προσπάθειες διαχωρισμού των EV's (εξωκυταρικά κυστίδια) από τους "ιούς":"
--> Μέθοδοι καθαρισμού και η παρουσία RNA σε σωματίδια ιών και εξωκυτταρικά κυστίδια
"Τα πεδία των εξωκυττάριων κυστιδίων (EV) και των λοιμώξεων από ιούς αμαυρώνονται από μια συζήτηση σχετικά με το αν ένα συγκεκριμένο mRNA ή μη κωδικοποιούμενο RNA (π.χ. miRNA) είναι συσκευασμένο σε ένα σωματίδιο ιού ή σε ένα EV που συνυπάρχει και ομοίως, αν ένα συγκεκριμένο mRNA ή μη κωδικοποιούμενο RNA περιέχεται σε σημαντικούς αριθμούς μέσα σε ένα EV. Το κλειδί για τη διευθέτηση αυτής της συζήτησης είναι κατά πόσον οι μέθοδοι καθαρισμού είναι επαρκείς για τον διαχωρισμό των σωματιδίων του ιού, των EV και των διαλυτών RNA και των συμπλόκων RNA: πρωτεΐνικά σύμπλοκα. Η διαφορική φυγοκέντρηση/υπερφυγοκέντρηση και οι παράγοντες καθίζησης όπως η πολυαιθυλενογλυκόλη χρησιμοποιούνται ευρέως τόσο για τον καθαρισμό EV όσο και για τον καθαρισμό ιών. Τα EV είναι γνωστό ότι συν-καθιζάνουν με ιούς και άλλα σωματίδια, όπως ελαττωματικά παρεμβαλλόμενα σωματίδια και πρωτεϊνικά συσσωματώματα".
"Και για τους ιούς RNA, έχουν αναφερθεί RNA εκτός από το γονιδιωματικό RNA πλήρους μήκους σε παρασκευάσματα ώριμων ιόντων. Είναι δυνατόν το EV να έχει επιμολύνει τα παρασκευάσματα ιόντων σε αυτές τις μελέτες; Υπήρξαν αρκετά πειραματικά στοιχεία για να αποκλειστεί η μόλυνση από EV ; "
"Πρωτεΐνες, DNA, mRNA, miRNA και άλλα μη κωδικοποιημένα RNA βρέθηκαν να περικλείονται σε αυτά τα μικρά, μεμβρανικά εξωσώματα και μικροκυψελίδες [1] (Εικόνα 1Β). Αυτό καθιστά τα EV εννοιολογικά και βιοχημικά παρόμοια με τους ιούς [1,18] (Εικόνα 1C). Ο σχηματισμός και η έξοδος των μικροκυψελίδων και των εξωσωμάτων μοιράζονται ομοιότητες με τη βιογένεση ιών, όπως ο HIV [24] και οι περιβαλλόμενοι ιοί της ηπατίτιδας Α (HAV) [25], αντίστοιχα (Εικόνα 1). Στην πραγματικότητα, οι ιοί έχουν θεωρηθεί ότι αναδύονται από τα εξωσώματα ή το αντίστροφο [26]. Οποιοδήποτε EV μπορεί να διαδραματίσει ανάλογο ρόλο με ένα σωματίδιο ιού στα λειτουργικά υλικά μεταφοράς από το ένα κύτταρο στο άλλο, ανεξαρτήτως κατηγορίας".
Πώς τα RNAs συν-καθαρίζονται με ιούς και EV με διαφορετικές μεθόδους καθαρισμού;
"Οι ιοί και τα EV καθαρίζονται με παρόμοιες τεχνικές (Πίνακας 1) [18,27]. Ιστορικά, η διαφορική φυγοκέντρηση και η υπερφυγοκέντρηση είναι οι πιο ευρέως χρησιμοποιούμενες μέθοδοι για τη συγκέντρωση ιών και EV [28]. Τα RNA συν-καθαρίζονται με ιούς και EV με τη μορφή α) μη εγκλωβισμένων εξωκυτταρικών RNA και β) συν-μόλυνση RNA που είναι εγκλωβισμένο σε EV και ιούς. Για καθαρότερο καθαρισμό, συνιστάται πάντα η επεξεργασία με RNάση για την απομάκρυνση των μη εγκλωβισμένων σε EV εξωκυτταρικών RNA. Τα συν-καθαρισμένα RNAs μέσα σε ένα ετερογενές μείγμα μπορούν να επισκιάσουν την οριστική και λειτουργική έρευνα για τα EV καθώς και για τους ιούς. Ωστόσο, ο διαχωρισμός των ιόντων από τα EV είναι πολύ πιο δύσκολος. Έτσι, θα συζητήσουμε πώς αυτή η μόλυνση -αν υπάρχει- μπορεί να αφαιρεθεί με διαφορετικές μεθόδους καθαρισμού".
"Όταν οι διαφορές είναι μικρές, δηλαδή μεταξύ ιών, EV και πρωτεϊνικών συσσωματωμάτων [30], απαιτείται ένα μέσο διαβάθμισης (π.χ. σακχαρόζη, ιωδιξανόλη, σορβιτόλη, χλωριούχο καίσιο κ.λπ.) για να αυξηθεί η αποτελεσματικότητα του διαχωρισμού [29]. Συχνά οι πυκνότητες και οι πλευστότητες των ιών συμπίπτουν τόσο στενά με τις πυκνότητες και τις πλευστότητες των εξωσωμάτων, ώστε ακόμη και ο διαχωρισμός μέσω βαθμίδων πυκνότητας είναι ανέφικτος [18,31-33] και οδηγεί σε συν-απομόνωση των εγκλωβισμένων RNA τους".
"Κατακρήμνιση με πολυαιθυλενογλυκόλη (PEG) - Η PEG χρησιμοποιείται εδώ και πολύ καιρό για την "κατακρήμνιση" και τον καθαρισμό ιών [34,35]. Αποτελεί το κύριο αντιδραστήριο σε διάφορα εμπορικά κιτ για τον καθαρισμό εξωσωμάτων [18,35]. Η μέθοδος αποτελείται από ένα στάδιο καθίζησης που ακολουθείται από φυγοκέντρηση χαμηλής ταχύτητας. Η κατακρήμνιση PEG προσφέρει μικρή αποτελεσματικότητα διαχωρισμού, δεν μπορεί να διαχωρίσει τους ιούς από τα EV [36] και συχνά συν-καταβυθίζει άλλους μακρομοριακούς ρύπους όπως RNA, DNA και συσσωματώματα πρωτεϊνών [30,35,37,38]. Τα εξωσώματα που απομονώνονται με εμπορικά κιτ είναι πιθανό να είναι μολυσμένα από ιούς, πρωτεΐνες, νουκλεϊκά οξέα που δεν σχετίζονται με EV και άλλα εξωκυτταρικά υπολείμματα [36]. Αυτό περιλαμβάνει τυχόν μόρια που έχουν κολλήσει στο εξωτερικό του EV αντί να μεταφέρονται στο εσωτερικό του. Πολλές από αυτές τις επιμολύνσεις μπορεί να φέρουν RNA".
"Χρωματογραφία- Η χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους (SEC), η χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων (IEC) και η χρωματογραφία συγγένειας (AC) είναι κοινώς χρησιμοποιούμενες μέθοδοι χρωματογραφίας για τον καθαρισμό ιών [41-43]."
"Τόσο οι ιοί όσο και οι EV μπορούν να καθαριστούν με SEC και IEC [18,40], αλλά η διασταυρούμενη επιμόλυνση ιού-EV είναι δύσκολο να αποφευχθεί [30]. Έτσι, η SEC και η IEC πιθανότατα θα συναπομονώσουν τις εγκλωβισμένες επιμολύνσεις RNAs".
"Ο διαχωρισμός των EV από τα σωματίδια του ιού, ιδίως των εξωσωμάτων και των μικροκυψελίδων, έχει αποδειχθεί ότι αποτελεί σημαντικό εμπόδιο στον τομέα των αλληλεπιδράσεων μεταξύ ξενιστή και παθογόνου. Οι Chugh et al. [36] και Bess et al. [77] έδειξαν ότι τα ιώματα και τα EV συν-καθίζονταν σε διάφορες τεχνικές απομόνωσης λόγω του παρόμοιου μεγέθους, της πυκνότητας και της ταχύτητας καθίζησης [31]. Άλλες μελέτες [25,27,31,32,36,48,77] έδειξαν επίσης ότι ούτε η διαφορική φυγοκέντρηση ούτε τα εμπορικά αντιδραστήρια καθίζησης εξωσωμάτων διαχωρίζουν τα ιώματα από τα EV".
"Δεδομένου ότι είναι σχεδόν αδύνατο να διαχωριστούν τα EV από τα ιώματα με βιοχημικές μεθόδους, η απουσία EV αποδεικνύεται συνήθως από την απουσία πρωτεϊνικών δεικτών EV. Για παράδειγμα, οι Cliffe et al. [8] έλεγξαν την καθαρότητα των παρασκευασμάτων ιόντων τους με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο διέλευσης, αλλά καμία εικόνα δεν συμπεριλήφθηκε στο χειρόγραφο. Οι Lin et al. [9] διεξήγαγαν Western blot και δεν ανίχνευσαν τους δείκτες εξωσωμάτων CD63 ή CD81 στα καθαρισμένα ιούς, καταλήγοντας στο συμπέρασμα ότι τα miRNAs ήταν παρόντα στους ιούς. Ωστόσο, είναι άγνωστο αν η Western blot είχε το απαιτούμενο επίπεδο ευαισθησίας. Σε αντίθεση με τους Lin κ.ά., οι Chugh κ.ά. [36] έδειξαν ότι για τον ίδιο ιό, η πλειονότητα των miRNA μεταφέρεται από EV και όχι από ιούς. Οι ερπητοϊοί μπορούν να εναλλάσσονται μεταξύ λανθάνουσας και λυτικής φάσης [78]. Τα προφίλ των RNA είναι πολύ διαφορετικά [79-81]. Δεν είναι σαφές αν η φάση του ιού έπαιξε ρόλο στην ασυμφωνία μεταξύ των Lin et al. [9] και των Chugh et al. [36]. Η πλειονότητα των μελετών του πίνακα 2 [4-7,10-13,15] δεν διερεύνησε πιθανές επιμολύνσεις EV. Η έννοια της μεταφοράς λειτουργικών νουκλεϊκών οξέων από EV έχει κερδίσει έδαφος μόλις πρόσφατα [82], οπότε δεν αποτελεί έκπληξη το γεγονός ότι οι μελέτες πριν από το 2010 δεν εξέταζαν αυτή την πιθανότητα.
Το πρόβλημα γίνεται πιο δύσκολο αν ληφθεί υπόψη ότι, καθώς τα μολυσμένα από ιούς κύτταρα δεν απελευθερώνουν μόνο ιούς με RNA που προέρχονται από τον ιό, απελευθερώνουν ταυτόχρονα και EV γεμάτα με κωδικοποιημένα από τον ιό RNA, καθώς και διάφορα είδη ελαττωματικών παρεμβαλλόμενων σωματιδίων. Ως εκ τούτου, θα περιμέναμε ότι τα EV θα περιείχαν ιικό RNA υπό τις περισσότερες συνθήκες. Τα EV που προέρχονται από κύτταρα που έχουν μολυνθεί με τον ιό HIV, τον ιό της ηπατίτιδας C (HCV) και διάφορους ανθρώπινους ερπητοϊούς (HHV) μπορεί να έχουν μέσα τους κωδικοποιημένα από τον ιό RNAs [83-85]. Στην περίπτωση του KSHV, τα ιικά miRNAs είναι παρόντα κυρίως εντός των εξωσωμάτων και όχι των ώριμων ιόντων [36]. Επιπροσθέτως, οι picornavirus όπως ο EMCV και ο HAV μπορούν να διακινήσουν ολόκληρο το ιό σε EV [25]".
"Ακόμα, απαιτούνται καλύτερες και πιο προσεκτικά επικυρωμένες μέθοδοι καθαρισμού για την παρασκευή καθαρότερων παρασκευασμάτων ιόντων και EV προτού γίνουν αποδεκτές πολλές από τις προτεινόμενες βιολογικές λειτουργίες που έχουν συσχετιστεί με τα EV. Τα αντιδραστήρια συγγένειας, ειδικότερα, αποκαλύπτουν εκπληκτική ετερογένεια μεταξύ των EV. Η περιγραφή και ο περιορισμός της αυξανόμενης πολυπλοκότητας των EV μπορεί να φαίνεται επαχθής, αλλά είναι απαραίτητη για τη διαπίστωση της βιολογικής σημασίας".
--> Συνοπτικά:
Κάθε "ιός" θέτει ένα ατομικό πρόβλημα καθαρισμού που σχετίζεται με τις ιδιότητες του "ιού", τη φύση του ξενιστή και τις συνθήκες καλλιέργειας
Δεν είναι δυνατόν να περιγραφεί μια διαδικασία καθαρισμού που θα λειτουργεί με την ίδια αποτελεσματικότητα για όλους τους "ιούς".
Καθαρότητα σημαίνει το βαθμό ελευθερίας από "μη ιικά" συστατικά
Καμία μεμονωμένη δοκιμή (τεστ) δεν είναι επαρκής για την καθιέρωση αυτού του τύπου καθαρότητας
Το κατώτερο όριο της επιμόλυνσης που μπορεί να ανιχνευθεί είτε με ανάλυση καθίζησης είτε με ηλεκτροφόρηση είναι μεταβλητό και δεν μπορεί να αναμένεται ότι οι μέθοδοι αυτές θα ανιχνεύσουν ποσοστό επιμόλυνσης μικρότερο από μερικά τοις εκατό
Οι προσµίξεις διαφεύγουν της ανίχνευσης εάν έχουν το ίδιο µέγεθος και σχήµα µε τα σωµατίδια του "ιού", ή εάν είναι κάτω από το µέγεθος που διαχωρίζεται από το µικροσκόπιο
Τα σωματίδια που υπάρχουν σε μικρό αριθμό αλλά έχουν μεγάλη μάζα εύκολα παραβλέπονται
Κανένα ενιαίο κριτήριο καθαρότητας δεν είναι επαρκές για να διαπιστωθεί η ομοιογένεια ενός παρασκευάσματος "ιού".
Πρέπει να διαπιστωθεί αν οι μέθοδοι καθαρισμού είναι επαρκείς για το διαχωρισμό των σωματιδίων "ιού", του EV και του μολυσματικού διαλυτού RNA και των συμπλόκων RNA: πρωτεΐνη
Τα EV είναι γνωστό ότι συν-καθιζάνουν με "ιούς" και άλλα σωματίδια, όπως ελαττωματικά παρεμβαλλόμενα σωματίδια και πρωτεϊνικά συσσωματώματα.
Δύο σημαντικά ερωτήματα τίθενται:
Είναι δυνατόν τα EV να έχουν επιμολύνει τα παρασκευάσματα "ιόντων" σε αυτές τις μελέτες;
Υπήρξαν αρκετά πειραματικά στοιχεία για να αποκλειστεί η μόλυνση από EV;
Τα EV είναι εννοιολογικά και βιοχημικά παρόμοια με τους "ιούς"
Ο σχηματισμός και η έξοδος των μικροκυψελίδων και των εξωσωμάτων παρουσιάζουν ομοιότητες με τη βιογένεση των "ιών"
Οι "ιοί" έχουν θεωρηθεί ότι αναδύονται από τα εξωσώματα ή το αντίστροφο και κάθε EV μπορεί να παίξει ανάλογο ρόλο με ένα σωματίδιο "ιού".
Τα RNAs συν-καθαρίζονται με "ιούς" και EV με τη μορφή (α) μη εγκλωβισμένων εξωκυτταρικών RNAs και (β) συν-μόλυνση του RNA που είναι εγκλωβισμένο σε EV και "ιούς"
Ο διαχωρισμός των "ιωμάτων" ("ιών") από τα EV είναι πολύ πιο δύσκολος
Συχνά οι πυκνότητες και οι πλευστότητες των "ιών" συμπίπτουν τόσο στενά με τις πυκνότητες και τις πλευστότητες των εξωσωμάτων, ώστε ακόμη και ο διαχωρισμός μέσω βαθμίδων πυκνότητας είναι ανέφικτος και οδηγεί σε συν-απομόνωση των εγκλωβισμένων RNA τους
Η καθίζηση με PEG προσφέρει μικρή αποτελεσματικότητα διαχωρισμού, δεν μπορεί να διαχωρίσει τους "ιούς" από τα EV και συχνά συν-καταβυθίζει άλλους μακρομοριακούς ρύπους όπως RNA, DNA και συσσωματώματα πρωτεϊνών.
Τα εξωσώματα που απομονώνονται με εμπορικά κιτ είναι πιθανό να είναι μολυσμένα από "ιούς", πρωτεΐνες, νουκλεϊκά οξέα που δεν σχετίζονται με EV και άλλα εξωκυτταρικά υπολείμματα.
Αυτό περιλαμβάνει τυχόν μόρια που έχουν κολλήσει στο εξωτερικό του EV αντί να μεταφέρονται στο εσωτερικό του και πολλές από αυτές τις επιμολύνσεις μπορεί να φέρουν RNAs
Η διασταυρούμενη μόλυνση "ιών"-EV είναι δύσκολο να αποφευχθεί
Η SEC και η IEC πιθανότατα θα απομονώσουν από κοινού τους εγκλωβισμένους μολυσματικούς παράγοντες RNAs
Ο διαχωρισμός των EV από τα σωματίδια "ιού", ιδίως τα εξωσώματα και τα μικροκυψελίδια, έχει αποδειχθεί ότι αποτελεί σημαντικό εμπόδιο στον τομέα των αλληλεπιδράσεων ξενιστή-παθογόνου
Οι Chugh et al. και Bess et al. έδειξαν ότι τα "ιώματα" και τα EV συν-καθίζονταν σε διάφορες τεχνικές απομόνωσης λόγω του παρόμοιου μεγέθους, της πυκνότητας και της ταχύτητας καθίζησής τους
Άλλες μελέτες έδειξαν επίσης ότι ούτε η διαφορική φυγοκέντρηση ούτε τα εμπορικά αντιδραστήρια καθίζησης εξωσωμάτων διαχωρίζουν τους "ιούς" από τα EV
Είναι σχεδόν αδύνατο να διαχωριστεί το EV από τα "ιόντα" με βιοχημικές μεθόδους
Η πλειονότητα των μελετών δεν διερεύνησε πιθανές επιμολύνσεις EV
Η ιδέα ότι τα EV μεταφέρουν λειτουργικά νουκλεϊκά οξέα έχει κερδίσει έδαφος μόλις πρόσφατα, οπότε δεν αποτελεί έκπληξη το γεγονός ότι οι μελέτες πριν από το 2010 δεν εξέταζαν αυτό το ενδεχόμενο
Είναι αναμενόμενο τα EV να περιέχουν "ιικό" RNA υπό τις περισσότερες συνθήκες
Απαιτούνται καλύτερες και πιο προσεκτικά επικυρωµένες µέθοδοι καθαρισµού για την παρασκευή καθαρότερων παρασκευασµάτων "ιού" και EV πριν γίνουν αποδεκτές πολλές από τις προτεινόµενες βιολογικές λειτουργίες που έχουν συσχετιστεί µε τα EV.
Έχουμε μια πηγή από το 1975 που δείχνει ότι ο πλήρης καθαρισμός/απομόνωση των "ιϊκών" σωματιδίων είναι αδύνατος και έχουμε μια πηγή 46 χρόνια αργότερα που λέει το ίδιο πράγμα. Φαίνεται ότι ακόμη και με τις σύγχρονες τεχνολογικές εξελίξεις, δεν υπάρχει κανένας δυνατός τρόπος για τον πλήρη καθαρισμό/απομόνωση σωματιδίων που θεωρούνται "ιοί". Αυτό θα πρέπει να καθιστά προφανές ότι κάθε εργασία ιολογίας είναι επιστημονική απάτη, καθώς χωρίς τον καθαρισμό/απομόνωση των σωματιδίων που πιστεύεται ότι είναι "ιοί", δεν υπήρξε ποτέ μια έγκυρη ανεξάρτητη μεταβλητή για να χειριστεί προκειμένου να αποδειχθεί ότι οποιαδήποτε σωματίδια ήταν πραγματικές αιτίες της ασθένειας. Αυτό σημαίνει ότι μπορούμε να απορρίψουμε κάθε μελέτη "ιού" που έγινε ποτέ, καθώς διατυπώθηκαν ισχυρισμοί για τους οποίους δεν μπόρεσαν ποτέ να υποστηρίξουν με μια απομονωμένη φυσική οντότητα. Μπορούμε να απορρίψουμε κάθε ηλεκτρομαγνητική εικόνα "ιών" καθώς δεν υπάρχει κανένας δυνατός τρόπος να είμαστε σίγουροι ότι τα σωματίδια που απεικονίζονται είναι αυτά που ισχυρίζονται ότι προκαλούν ασθένειες. Μπορούμε να πετάξουμε έξω κάθε απόδειξη γονιδιώματος "ιού", καθώς δεν υπάρχει κανένας ρεαλιστικός τρόπος να δηλωθεί ότι το RNA προήλθε από μία μόνο πηγή.
Ενώ είμαστε σε αυτό, μπορούμε επίσης να απορρίψουμε την ιολογία ως επιστήμη.
---Δικτυογραφία :
The Purification Problem – ViroLIEgy