ΦΑΚΕΛΛΟΣ ΙΟΛΟΓΙΑ - Ο "ιός" Μάρμπουργκ : Πρόδρομος του Έμπολα
Μετάφραση: Απολλόδωρος
29 Aυγούστου 2022 | ViroLIEgy | Διάβαστε το εδώ
Μπορείτε να κάνετε εφάπαξ ή επαναλαμβανόμενες δωρεές μέσω του Ko-Fi:
"Οι περισσότερες από τις γνωστές ιογενείς ασθένειες αποκλείστηκαν και αποδείχθηκε ότι ο μολυσματικός παράγοντας ήταν ένας άγνωστος μέχρι σήμερα ιός με πολλά ιδιαίτερα χαρακτηριστικά: μολύνει τα ινδικά χοιρίδια αλλά όχι τα ενήλικα ποντίκια και είναι μεγαλύτερος από τους γνωστούς ιούς και με διαφορετικό σχήμα."
Πρόλογος στo Marburg Virus Disease (Η νόσος του ιού Marburg) του G. A. MARTINI - R. SIEGERT
Αν για κάποιο λόγο παρακολουθείτε με προσοχή τα κυρίαρχα μέσα μαζικής ενημέρωσης, πιθανώς γνωρίζετε καλά την επανεμφάνιση πολλών διαφορετικών "ιών" που φαίνεται να ξεφυτρώνουν σε όλο τον κόσμο τους τελευταίους μήνες. Είδαμε την περίεργα ακριβή πρόβλεψη για την ευλογιά των πιθήκων τον Μάιο του 2022, τις απειλές από οσκαρικούς "ιούς" όπως η νίπα/λάνγκια, ο ιός του χανταϊού, η ηπατίτιδα Α της φράουλας, η γρίπη της ντομάτας και η προφανής επανεμφάνιση της πολιομυελίτιδας. Ένας από τους άλλους λιγότερο γνωστούς "ιούς" που κάνουν σήμερα το γύρο των μέσων ενημέρωσης είναι γνωστός ως "ιός του Μάρμπουργκ". Αν και μπορεί να μην ακούγεται τόσο τρομακτικός σε όσους δεν είναι εξοικειωμένοι με αυτόν, ο "ιός" έχει έναν στενό συγγενή του οποίου το όνομα μπορεί να είναι αρκετό για να προκαλέσει φόβο στις καρδιές των αδαών. Για όσους δεν γνωρίζουν, ο "ιός" Μάρμπουργκ είναι η αρχική ενσάρκωση του "ιού" Έμπολα. Υποθέτω ότι ίσως είστε περισσότερο εξοικειωμένοι με τον τελευταίο από τους δύο.
Τις τελευταίες εβδομάδες, υπήρξαν αναφορές ότι ο "ιός του Μάρμπουργκ" έκανε αισθητή την παρουσία του στην Γκάνα, ένα μέρος που δεν έχει αναφέρει ποτέ στο παρελθόν κρούσμα του θανατηφόρου "ιού". Δυστυχώς, η Γκάνα όχι μόνο ανέφερε το πρώτο κρούσμα του Marburg στις αρχές Ιουλίου 2022, αλλά ανέφερε και τους πρώτους θανάτους που σχετίζονται με την ασθένεια:
"Ένα κρούσμα του πυρετού Μάρμπουργκ εντοπίστηκε στη Γκάνα, ενώ η Δυτική Αφρική ήταν απαλλαγμένη από κρούσματα, εκτός από ένα κρούσμα στη Γουινέα το 2021. Επί του παρόντος, 98 άτομα θεωρούνται επαφές και βρίσκονται σε απομόνωση. Δεν έχουν εντοπιστεί ακόμη κρούσματα του πυρετού Μάρμπουργκ μεταξύ αυτών των περιπτώσεων επαφής.
Μέχρι στιγμής δύο μη συγγενείς άνδρες έχουν νοσήσει από τον πυρετό Μάρμπουργκ. Παρουσιάζοντας συμπτώματα όπως διάρροια, πυρετό, ναυτία και εμετό, οι δύο άνδρες, ηλικίας 26 και 51 ετών, έχουν πεθάνει και οι δύο".
https://unric.org/en/marburg-virus-disease-origins-and-symptoms/
Αν ακούτε τα κυρίαρχα μέσα ενημέρωσης, μπορεί να πειστείτε να πιστέψετε ότι ο "ιός" του Μάρμπουργκ είναι μια "εξαιρετικά μεταδοτική, εξαιρετικά ιογενής" και θανατηφόρα ασθένεια έτοιμη να ξεσπάσει και να γίνει η επόμενη επιδημία που πρέπει να φοβηθούμε:
"Ο απειλητικός για τη ζωή ιός είναι εξαιρετικά μεταδοτικός και δεν έχει γνωστή θεραπεία ή εγκεκριμένο εμβόλιο.
"Ο ΠΟΥ αποκαλεί την ασθένεια "επιδημιογενή", πράγμα που σημαίνει ότι μπορεί να εξαπλωθεί εύκολα μεταξύ των ανθρώπων αν δεν προληφθεί.
https://www.healthline.com/health-news/could-the-marburg-virus-start-another-outbreak-what-we-know
Η νόσος του ιού Μάρμπουργκ είναι μια εξαιρετικά ιογενής νόσος που προκαλεί αιμορραγικό πυρετό, με ποσοστό θνησιμότητας έως και 88%. Ανήκει στην ίδια οικογένεια με τον ιό που προκαλεί τη νόσο του ιού Έμπολα.
https://www.who.int/health-topics/marburg-virus-disease#tab=tab_1
"Αν και η MVD είναι ασυνήθιστη, ο MARV έχει τη δυνατότητα να προκαλέσει επιδημίες με σημαντικά ποσοστά θνησιμότητας των κρουσμάτων.
Ωστόσο, η εξέταση των επιδημιών του "ιού" Μάρμπουργκ λέει μια εντελώς διαφορετική ιστορία. Αυτή είναι μόλις η δεύτερη αναφερόμενη επιδημία του "ιού Μάρμπουργκ" στη Δυτική Αφρική, σε ένα μέρος όπου ήταν άγνωστο πριν. Η πρώτη εμφάνιση σε αυτή την περιοχή αυτού που θεωρείται ένας εξαιρετικά μεταδοτικός "ιός" που λέγεται ότι μεταδίδεται μέσω της επαφής με σωματικά υγρά ήταν ένα μοναδικό κρούσμα που αναφέρθηκε στη Γουινέα πέρυσι. Παρόμοια με το πρόσφατο
, οι ασθενείς που διαγνώστηκαν με Μάρμπουργκ στη Γκάνα δεν είχαν καμία σχέση μεταξύ τους, δεν είχαν ταξιδιωτικό ιστορικό σε ενδημική χώρα, ούτε επαφή με ζώα που λέγεται ότι φέρουν τον "ιό". Και οι δύο ήταν αγρότες που ανέφεραν μη ειδικά συμπτώματα όπως διάρροια, πυρετό, ναυτία και εμετό. Δυστυχώς, και οι δύο υπέκυψαν στα συμπτώματά τους μετά από θεραπεία στο νοσοκομείο. Ο τελικός απολογισμός αυτής της επιδημίας του "εξαιρετικά μεταδοτικού ιού" περιορίστηκε σε τέσσερα άτομα.
Πώς ένας "εξαιρετικά μεταδοτικός ιός", ο οποίος δεν έχει εμφανιστεί ποτέ ξανά στη Δυτική Αφρική, έφτασε σε αυτό το τμήμα της ηπείρου, όταν οι μολυσμένοι δεν είχαν ιστορικό ταξιδιού σε μια περιοχή όπου ο "ιός" λέγεται ότι ενδημεί; Πώς αυτός ο θανατηφόρος "ιός" μόλυνε μόνο έναν άνθρωπο στη Γουινέα το 2021 και μόνο 4 στη Γκάνα το 2022, αν είναι εξαιρετικά ιογενής και μεταδοτικός; Στην πραγματικότητα, στη συντριπτική πλειονότητα της ιστορίας του, ο "ιός" του Μάρμπουργκ έχει δείξει ότι κάθε άλλο παρά "εξαιρετικά μεταδοτικός" είναι, με την υψηλότερη επιδημία να εκδηλώνεται στην Αγκόλα το 2004 με μόλις 252 κρούσματα. Αν πρέπει να βασιστούμε στα στοιχεία του ίδιου του CDC, υπήρξαν μόνο 475 συνολικά κρούσματα αυτού του "εξαιρετικά μεταδοτικού ιού" παγκοσμίως από την ανακάλυψή του το 1967. Αυτά τα στατιστικά στοιχεία δεν φαίνεται να ταιριάζουν με τον ορισμό ενός "επιδημιογόνου, εξαιρετικά μεταδοτικού, εξαιρετικά ιογενούς ιού".
Ποια είναι λοιπόν η ιστορία πίσω από τον "ιό του Μάρμπουργκ"; Πότε και πώς εμφανίστηκε αυτό το επικίνδυνο παθογόνο στη σκηνή; Ποια νέα συμπτώματα της νόσου προκάλεσαν αρχικά την αναζήτηση ενός νέου αιτιολογικού παράγοντα; Ποιες μέθοδοι χρησιμοποιήθηκαν, αν χρησιμοποιήθηκαν, προκειμένου να καθαριστούν, να απομονωθούν και να χαρακτηριστούν τα σωματίδια που θεωρήθηκαν ως ο "ιός"; Ας δούμε τι μπορούμε να αποκαλύψουμε για τον πρώτο "ιό" που ανακαλύφθηκε στην οικογένεια Filoviridae.
Σύμφωνα με το CDC, ο "ιός του Μάρμπουργκ", ανακαλύφθηκε το 1967 μετά από ένα ξέσπασμα συμπτωμάτων που συνήθως συνδέονται με αιμορραγικό πυρετό και εμφανίστηκαν μεταξύ εργαστηριακών εργαζομένων που πραγματοποιούσαν έρευνα και είχαν έρθει σε επαφή με αφρικανικούς πράσινους πιθήκους. Είναι ένα από τα επτά είδη "φιλοϊού", με τα άλλα έξι να ανήκουν σε ξεχωριστές εκδοχές του "ιού Έμπολα". Τα συμπτώματα της νόσου που σχετίζεται με τον "ιό Μάρμπουργκ" είναι μη ειδικά και επικαλύπτονται με πολλές διαφορετικές ασθένειες, όπως η ελονοσία, ο τυφοειδής πυρετός ή ο δάγκειος πυρετός ή/και οποιοσδήποτε από τους "ιογενείς" αιμορραγικούς πυρετούς που μπορεί να ενδημούν σε μια συγκεκριμένη περιοχή. Αυτό προφανώς καθιστά την κλινική διάγνωση δύσκολη (δηλαδή αδύνατη) λόγω των ομοιοτήτων μεταξύ των ασθενειών. Με άλλα λόγια, δεν υπάρχει τίποτα νέο ούτε συγκεκριμένο όσον αφορά τον "ιό" του Μάρμπουργκ, καθώς είναι απλώς ένα ακόμη σε μια μακρά αλυσίδα ονομάτων που έχουν δοθεί στα ίδια συμπτώματα της νόσου:
"Η νόσος του ιού Marburg (MVD) είναι ένας σπάνιος αλλά σοβαρός αιμορραγικός πυρετός που προσβάλλει τόσο τους ανθρώπους όσο και τα πρωτεύοντα θηλαστικά. Η MVD προκαλείται από τον ιό Μάρμπουργκ, έναν γενετικά μοναδικό ζωονοσογόνο (ή, μεταδιδόμενο από τα ζώα) ιό RNA της οικογένειας των φιλοϊών. Τα έξι είδη του ιού Έμπολα είναι τα μόνα άλλα γνωστά μέλη της οικογένειας των ιών filovirus.
Ο ιός Μάρμπουργκ αναγνωρίστηκε για πρώτη φορά το 1967, όταν εκδηλώθηκαν ταυτόχρονα κρούσματα αιμορραγικού πυρετού σε εργαστήρια στο Μάρμπουργκ και τη Φρανκφούρτη της Γερμανίας και στο Βελιγράδι της Γιουγκοσλαβίας (σημερινή Σερβία). Τριάντα ένα άτομα αρρώστησαν, αρχικά εργαζόμενοι σε εργαστήρια και στη συνέχεια αρκετό ιατρικό προσωπικό και μέλη των οικογενειών που τους είχαν φροντίσει. Αναφέρθηκαν επτά θάνατοι. Οι πρώτοι άνθρωποι που μολύνθηκαν είχαν εκτεθεί σε εισαγόμενους από την Ουγκάντα αφρικανικούς πράσινους πιθήκους ή στους ιστούς τους κατά τη διεξαγωγή ερευνών. Ένα επιπλέον κρούσμα διαγνώστηκε αναδρομικά".
"Η κλινική διάγνωση της νόσου του ιού Marburg (MVD) μπορεί να είναι δύσκολη. Πολλά από τα σημεία και τα συμπτώματα της MVD είναι παρόμοια με άλλα λοιμώδη νοσήματα (όπως η ελονοσία, ο τυφοειδής πυρετός ή ο δάγκειος πυρετός) ή με ιογενείς αιμορραγικούς πυρετούς που μπορεί να ενδημούν στην περιοχή (όπως ο πυρετός Lassa ή ο Έμπολα). Αυτό ισχύει ιδιαίτερα εάν πρόκειται για ένα μόνο κρούσμα".
https://www.cdc.gov/vhf/marburg/index.html
Μπορούμε να μάθουμε πολλά για την "ανακάλυψη" αυτού του νέου "φιλοϊού" από τα γραπτά του Werner Slenczka, ενός ανθρώπου που αυτοπροσδιορίζεται ως ειδικός στους "φιλοϊούς", καθώς ασχολήθηκε στενά με την προέλευσή τους. Ο Dr. Slenczka είναι αναπληρωτής καθηγητής στο Ινστιτούτο Ιολογίας, ο οποίος βοήθησε στην ταυτοποίηση των νηματοειδών σωματιδίων που ισχυρίζονται ότι είναι ο "ιός" μέσω της ηλεκτρονικής μικροσκοπίας. Έγραψε μερικά έγγραφα που περιγράφουν λεπτομερώς τι συνέβη καθ' όλη τη διάρκεια της διαδικασίας "ανακάλυψης" και προσέφερε μερικές μάλλον ενδιαφέρουσες αποκαλύψεις.
Τα πρώτα αποσπάσματα που παρουσιάζονται εδώ προέρχονται από μια εργασία που δημοσίευσε για τον "ιό" του Μάρμπουργκ το 2007, 40 χρόνια μετά την πρώτη ταυτοποίησή του. Σύμφωνα με τον Slenczka, οι πρώτοι άνθρωποι που "μολύνθηκαν" από τον "ιό" τον Αύγουστο του 1967 έλαβαν θεραπεία στα σπίτια τους για έως και 10 ημέρες. Τα συμπτώματα δεν ήταν ανησυχητικά στην αρχή, αλλά σταδιακά χειροτέρευαν καθώς χορηγήθηκαν αδιευκρίνιστες θεραπείες. Αρχικά θεωρήθηκε ότι οι ασθενείς έπασχαν από τυφοειδή πυρετό ή δυσεντερία. Καθώς τα συμπτώματα χειροτέρευαν, οι ασθενείς εισήχθησαν στο νοσοκομείο. Από τους 7 ασθενείς που παρουσίασαν αιμορραγία, οι 5 τελικά υπέκυψαν στην ασθένειά τους, ορισμένοι μόλις μία ημέρα μετά την εισαγωγή τους. Τα κρούσματα του νέου "ιού" καθώς και οι εκτιμήσεις για την περίοδο επώασης προσδιορίστηκαν τελικά αναδρομικά. Ενδιαφέρον παρουσιάζει το γεγονός ότι ένας από τους ασθενείς με σοβαρή ασθένεια που δεν είχε ποτέ νοσηλευτεί στο νοσοκομείο ανάρρωσε εντελώς μόνος του. Σε αντίθεση με τους ισχυρισμούς των κυρίαρχων μέσων ενημέρωσης σήμερα, τελικά αποφασίστηκε τότε ότι ο "ιός" δεν ήταν ιδιαίτερα μεταδοτικός, καθώς δεν υπήρχαν παρά ελάχιστα δευτερογενή κρούσματα, καμία τριτογενής μόλυνση και κανένα νέο κρούσμα μετά το αρχικό "ξέσπασμα".
Στα μέσα Σεπτεμβρίου του 1967 ξεκίνησαν πειράματα με ινδικά χοιρίδια προκειμένου να προσδιοριστεί η αιτία της νόσου. Οι ερευνητές πέρασαν σειριακά τοξικό γλοιό μεταξύ των ινδικών χοιριδίων και δημιούργησαν "παρόμοια" συμπτώματα με την ανθρώπινη ασθένεια μετά από μεταγενέστερα περάσματα, καταλήγοντας έτσι στο συμπέρασμα ότι είχαν αποκτήσει έναν φιλτραρίσιμο "ιό", παρόλο που δεν ήταν σε θέση να λάβουν εικόνες του "ιού" με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο. Ο Slenczka εξέτασε τους ιστούς του σπλήνα και του ήπατος των ινδικών χοιριδίων χρησιμοποιώντας έμμεση δοκιμή αντισωμάτων φθορισμού και διαπίστωσε ότι υπήρχαν ενδοκυτταροπλασματικές διεισδύσεις στα ινδικά χοιρίδια, αλλά όχι στους ανθρώπους.
Η μέθοδος αυτή χρησιμοποιήθηκε για την επιλογή του αίματος των "μολυσμένων" ζώων, το οποίο στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκε για εξέταση με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο χρησιμοποιώντας μια νέα τεχνική που ανέπτυξε ο επικεφαλής ερευνητής. Στη συνέχεια "ανακάλυψαν" τον "ιό" στα ζώα (αλλά όχι στους ανθρώπους) τον Νοέμβριο του 1967, σχεδόν 3 μήνες μετά τα πρώτα κρούσματα της νόσου:
--> Σαράντα χρόνια του ιού Μάρμπουργκ
"Στις αρχές Αυγούστου 1967, ασθενείς με ασυνήθιστα συμπτώματα που υποδήλωναν μια μολυσματική ασθένεια εισήχθησαν στα πανεπιστημιακά νοσοκομεία του Μάρμπουργκ και της Φρανκφούρτης. Οι πρώτοι ασθενείς νοσηλεύονταν στα σπίτια τους για έως και 10 ημέρες, παρόλο που η ασθένεια περιγράφηκε ότι ξεκινούσε ξαφνικά με ακραία κακουχία, μυαλγία, πονοκέφαλο και ταχεία αύξηση της θερμοκρασίας έως και 39°C ή και περισσότερο. Παρόλο που τα κλινικά συμπτώματα δεν ήταν πολύ ανησυχητικά κατά τη διάρκεια των πρώτων 3-4 ημερών, πρόσθετα συμπτώματα και σημεία εμφανίστηκαν στο τέλος της πρώτης εβδομάδας. Τα γαστρεντερικά συμπτώματα, όπως η ναυτία, ο έμετος και η διάρροια, υπέδειξαν στους επαγγελματίες υγείας ότι η διάγνωση θα μπορούσε να είναι δυσεντερία ή τυφοειδής πυρετός. Ως εκ τούτου, οι ασθενείς εισήχθησαν σε νοσοκομείο. Κατά την εισαγωγή, οι περισσότεροι ασθενείς παρατηρήθηκε ότι είχαν επιπεφυκίτιδα, εξάνθημα και ενάνθημα, αλλά δεν βρέθηκαν shigellae ή σαλμονέλες. Κατά τη διάρκεια της δεύτερης εβδομάδας μετά την έναρξη της νόσου, η θερμοκρασία των ασθενών έπεσε στους 38°C και καταγράφηκαν πετέχειες και πιο σοβαρά σημεία αιμορραγικής διάθεσης για το ∼25% των ασθενών. Όπως υποδεικνύεται από τα επίπεδα τρανσαμινασών, η ηπατική καταστροφή έφτασε στο μέγιστο της τις ημέρες 7 και 8 μετά την έναρξη της νόσου. Εντοπίστηκε λευκοπενία με την εμφάνιση ανώριμων πολυμορφοπύρηνων λευκοκυττάρων και θρομβοπενία (<10.000 κύτταρα/mm3). Οι ασθενείς αιμορραγούσαν από όλα τα στόμια του σώματος και από παρακεντήσεις με βελόνα. Όταν η έκβαση ήταν θανατηφόρα, ο θάνατος επήλθε κατά τη διάρκεια της δεύτερης εβδομάδας μετά την έναρξη της νόσου, κατά μέσο όρο την 9η ημέρα (εύρος, 7-16 ημέρες). Σε ορισμένες περιπτώσεις, οι ασθενείς πέθαναν από σοβαρό αιμορραγικό σοκ την επομένη της εισαγωγής τους στο νοσοκομείο. Τα σοβαρά αιμορραγικά σημεία, όπως παρατηρήθηκαν στο ∼25% των ασθενών, αποτελούσαν signum mali ominis. Όλοι οι ασθενείς που πέθαναν είχαν αιμορραγία. Από τους 7 ασθενείς με έκδηλες αιμορραγίες, οι 5 υπέκυψαν στη νόσο. Η ορχίτιδα, τυπικό σύμπτωμα όψιμου σταδίου, εμφανίστηκε την τρίτη εβδομάδα μετά την έναρξη της νόσου ή ακόμη και κατά την υποτροπή κατά την πέμπτη εβδομάδα. Η διανοητική σύγχυση και οι παρααισθησίες ήταν ενδεικτικές της εγκεφαλικής προσβολής. Υποτροπές με ηπατίτιδα, ορχίτιδα και ραγοειδίτιδα με παραμονή του ιού στο σπέρμα και στον πρόσθιο οφθαλμικό θάλαμο ήταν χαρακτηριστικές κατά τη φάση ανάρρωσης τόσο των λοιμώξεων από τον ιό Marburg (MARV) όσο και του ιού Ebola (EBOV). Σε 1 περίπτωση, ένας ασθενής μετέδωσε τη λοίμωξη στη σύζυγό του 120 ημέρες μετά την έναρξη της νόσου του, πιθανότατα με σεξουαλική επαφή. Ο ιός ήταν ανιχνεύσιμος στο σπερματικό υγρό.
Ο χρόνος επώασης της νόσου MARV μπορούσε να εκτιμηθεί μόνο αναδρομικά, αφού ήταν γνωστή η πηγή της λοίμωξης και η ημερομηνία έκθεσης. Η επώαση κυμαινόταν από 5 έως 9 ημέρες, με μέσο όρο 8 ημέρες. Η αναλογία πρωτογενών και δευτερογενών λοιμώξεων ήταν 21:3 στο Μάρμπουργκ, 4:2 στη Φρανκφούρτη και 1:1 στο Βελιγράδι. Τρεις περιπτώσεις δευτερογενούς λοίμωξης προήλθαν από ακούσιο εμβολιασμό με βελόνα- σε 1 περίπτωση, ένας τεχνικός παθολογίας κόπηκε στο αντιβράχιο με μαχαίρι κατά τη διάρκεια μιας μεταθανάτιας εξέτασης. Η αερογενής μετάδοση μεταξύ των ανθρώπων δεν συνέβη, όπως δείχνει, για παράδειγμα, η περίπτωση ενός νεαρού άνδρα που κοιμήθηκε στο ίδιο κρεβάτι με τον αδελφό του μόνο λίγες ημέρες πριν πεθάνει- ο αδελφός δεν εμφάνισε νόσο και ήταν οροαρνητικός για τον MARV 6 μήνες αργότερα. Ένας από τους ασθενείς ήταν βαριά άρρωστος κατά τη στιγμή της επιδημίας, αλλά, για άγνωστους λόγους, δεν νοσηλεύτηκε. Ανάρρωσε και, 15 χρόνια αργότερα, υποστήριξε ότι είχε νοσήσει από τον MARV. Εκείνη τη στιγμή, υποβλήθηκε σε ορολογικό έλεγχο και βρέθηκε οροθετικός για το αντίσωμα MARV με IFA και ELISA. Είχε εκτεθεί σε καλλιέργειες νεφρικών κυττάρων πιθήκου, τα οποία χρησιμοποιούνταν για την παραγωγή εμβολίου πολιομυελίτιδας. 6 μήνες μετά το ξέσπασμα της επιδημίας, ελήφθησαν δείγματα αίματος από 120 άτομα που είχαν έρθει σε στενή επαφή με ασθενείς ή με μολυσματικό υλικό αλλά δεν είχαν εμφανίσει νόσο. Τα δείγματα εξετάστηκαν για αντισώματα MARV με τη δοκιμασία πρόσδεσης συμπληρώματος, IFA και ELISA και βρέθηκαν οροαρνητικά. Ως εκ τούτου, δεν υπήρχε ένδειξη κλινικά μη εμφανής λοίμωξης".
"Μέχρι τα μέσα Σεπτεμβρίου, είχε καταστεί προφανές ότι ο παράγοντας παρουσίαζε χαμηλή μεταδοτικότητα. Είχαν εμφανιστεί μόνο λίγες περιπτώσεις δευτερογενούς λοίμωξης και καμία περίπτωση τριτογενούς λοίμωξης, ενώ δεν είχαν εμφανιστεί νέα κρούσματα κατά τη διάρκεια των προηγούμενων 2 εβδομάδων. Ως εκ τούτου, ο Rudolf Siegert (εικόνα 1) συνέχισε τα πειράματα με ινδικά χοιρίδια, μαζί με έναν Κινέζο συνάδελφό του, τον Hsin Lu Shu. Διαπίστωσαν ότι ο παράγοντας μπορούσε να μεταδοθεί μεταξύ ινδικών χοιριδίων και παρουσίαζε παθογένεια που αυξανόταν από πέρασμα σε πέρασμα.
Στο τρίτο πέρασμα, τα ζώα αρρώστησαν με πυρετό, ηπατίτιδα και αιμορραγική νόσο που έμοιαζε πολύ με την ανθρώπινη νόσο, και πέθαναν μέσα σε 10 ημέρες μετά τον εμβολιασμό, με σημαντική πτώση της θερμοκρασίας. Ωστόσο, όλες οι προσπάθειες προσδιορισμού του αιτιολογικού παράγοντα με φωτεινή ή ηλεκτρονική μικροσκοπία απέτυχαν. Οι ευκαιριακές βακτηριακές λοιμώξεις αποτελούσαν μείζον πρόβλημα.
Αυτή τη στιγμή, ήταν διαθέσιμα δείγματα ορού ανάρρωσης ανθρώπων και ινδικών χοιριδίων και ορισμένα από τα δείγματα ορού είχαν επισημανθεί με φλουορεσκεΐνη για άμεση IFA. Τρεις εβδοµάδες αργότερα, ο W.S. (εικόνα 1) ανίχνευσε ενδοκυτταροπλασµατικά εγκλείσµατα στους ιστούς µολυσµένων ινδικών χοιριδίων, µε IFA. Τα ζώα που είχαν µολυσµένα κύτταρα στο ήπαρ και στον σπλήνα επιλέχθηκαν για περαιτέρω µελέτες µε τη χρήση ηλεκτρονιοµικροσκοπίας. Τα δείγματα αίματος από αυτά τα ζώα αδρανοποιήθηκαν με φορμόλη και στάλθηκαν στον Dietrich Peters στο Ινστιτούτο Bernhard Nocht στο Αμβούργο. Το φορμαλινοποιημένο πλάσμα περιστράφηκε απευθείας σε πλέγματα ηλεκτρονικού μικροσκοπίου (ΗΜ), με μια νέα τεχνική που ανέπτυξε ο Gerhard Müller, και έγινε αρνητική χρώση. Με αυτές τις μεθόδους, ο MARV ταυτοποιήθηκε στις 20 Νοεμβρίου, < 3 μήνες μετά την έναρξη της επιδημίας (εικόνα 2)".
https://academic.oup.com/jid/article/196/Supplement_2/S131/858753
Πρέπει να σημειωθεί ότι, σύμφωνα με την περιγραφή των γεγονότων από τον Slenczka, κανένας "ιός" δεν καθαρίστηκε και δεν απομονώθηκε ποτέ σωστά σε κανένα σημείο κατά τη διάρκεια της έρευνας για την πιθανή αιτία της ασθένειας που έπληξε τους εργαζόμενους στο εργαστήριο το 1967. Στην πραγματικότητα, οι αρχικές αποδείξεις για την ύπαρξη του "ιού του Μάρμπουργκ" ουσιαστικά κατέληγαν στο να αρρωστήσουν πειραματικά χοιρίδια Γουινέας μέσω της σειριακής διέλευσης αφύσικων ενέσεων αίματος/ιστών στο στομάχι τους, να εξεταστούν τα σπλήνα και τα συκώτια τους χρησιμοποιώντας μη ειδικά αντισώματα για να βρεθούν μη ειδικά εγκλείσματα, και στη συνέχεια να ληφθούν εικόνες ηλεκτρονικής μικροσκοπίας του αίματος των άρρωστων ζώων και να υποστηριχθεί ότι τυχαία σωματίδια που παρατηρήθηκαν στα μη καθαρισμένα και μολυσμένα δείγματα είναι ο εν λόγω "ιός". Τελικά, μετά από πολλές ανεπιτυχείς προσπάθειες αποτυχίας δοκιμών και σφαλμάτων, ισχυρίστηκαν ότι ο "ιός" μπορούσε να πολλαπλασιαστεί σε κυτταροκαλλιέργεια (χωρίς CPE) χρησιμοποιώντας τα υλικά του ινδικού χοιριδίου (και όχι του ανθρώπου).
Για την καλύτερη κατανόηση των δόλιων μεθόδων που χρησιμοποιήθηκαν για την προπαγάνδα του κοινού σχετικά με έναν νέο θανατηφόρο "ιό", ας αναλύσουμε ακόμη περισσότερο τους τρεις κύριους τομείς εστίασης (πειράματα σε ζώα, απεικόνιση με ΗΜ και κυτταροκαλλιέργεια) και ας δούμε τι δείχνουν τα στοιχεία.
--> 1. Πειράματα σε ζώα
Q
https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-662-01593-3_22
Το πρώτο αποδεικτικό στοιχείο που χρησιμοποιήθηκε για την ύπαρξη ενός νέου "ιού" ήταν η δημιουργία "παρόμοιων" συμπτωμάτων σε ινδικά χοιρίδια με συνεχείς ενέσεις με σειριακά περασμένα άρρωστα υγρά/ιστούς. Το τι πραγματικά περιείχαν αυτές οι ενέσεις είναι δύσκολο να προσδιοριστεί, καθώς η πρωτότυπη μελέτη είναι στα γερμανικά και η μετάφραση δεν είναι σαφής. Η μελέτη, με επικεφαλής τον Rudolf Siegert, ανέφερε ότι γίνονταν διαδοχικά περάσματα με ολικό αίμα, πλάσμα ή οργανικό υλικό, ωστόσο ποιες ήταν οι ακριβείς μέθοδοι πέραν αυτού παραμένουν ασαφείς λόγω της ελαττωματικής μετάφρασης.
Ευτυχώς ο Rudolf Siegert συγκέντρωσε μεγάλο μέρος της έρευνας του Μάρμπουργκ σε ένα βιβλίο το 1971. Παραδόξως, δεν συμπεριέλαβε την αρχική του εργασία: On the etiology of an unknown human infection originating from monkeys (Σχετικά με την αιτιολογία μιας άγνωστης ανθρώπινης λοίμωξης που προέρχεται από πιθήκους), ωστόσο παρείχε μια μελέτη που εξηγούσε τις διαδικασίες που χρησιμοποιήθηκαν για τη διέλευση του "ιού" σε χοίρους Γουινέας, η οποία παρείχε κάποια εικόνα για το είδος των πειραμάτων που τελικά πραγματοποιήθηκαν. Αυτό που μπορούμε να δούμε στα κυριότερα σημεία από την εργασία που περιλαμβάνεται παρακάτω είναι ότι το θρομβωμένο αίμα αιμολύθηκε με αποστειρωμένο αποσταγμένο νερό και τα όργανα αποτριβήθηκαν με τη χρήση ψυχρού γουδοχέρι. Στο μείγμα αίματος προστέθηκε αραιωτικό φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος που περιείχε 10 p. 100 φυσιολογικό ορό κουνελιού, το οποίο χρησιμοποιήθηκε για την ενδοεγκεφαλική (στον εγκέφαλο) και ενδοπεριτοναϊκή (στο στομάχι) ένεση ποντικών καθώς και για την ενδοπεριτοναϊκή ένεση ινδικών χοίρων. Οι ερευνητές παραδέχθηκαν ότι όλες οι προσπάθειες "απομόνωσης" ήταν αρνητικές εκτός από τα ινδικά χοιρίδια, καθώς, μετά την ένεση των ινδικών χοιριδίων στο στομάχι με δείγματα αίματος, εναιωρήματα οργάνων και δεξαμενές οργάνων Cercopithecus, τα ζώα εμφάνισαν εμπύρετη (πυρετική) αντίδραση 4 έως 6 ημέρες μετά τον εμβολιασμό. Τα κλινικά συμπτώματα στα ζώα περιλάμβαναν απώλεια όρεξης και βάρους, "φουσκωμένο πρόσωπο" και διόγκωση των όρχεων. Οι ερευνητές κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι από το ανθρώπινο υλικό και το υλικό των πιθήκων "απομονώθηκε" ένας οργανισμός και μεταδόθηκε μέσω τεσσάρων έως έξι περασμάτων σε χοίρους της Γουινέας, παρόλο που ποτέ δεν καθαρίστηκε, απομονώθηκε και απεικονίστηκε κανένας "ιός":
--> Πέρασμα του ιού Μάρμπουργκ σε χοίρους Γουινέας
"Το πηχτό αίμα αιμολύθηκε με αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό και τα όργανα τριτώθηκαν με χρήση ψυχρού γουδί και αραιωτικού ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών αλάτων που περιείχε 10 p. 100 κανονικό ορό κουνελιού, ώστε να προκύψει τελική συγκέντρωση περίπου 20 τοις εκατό κατ' όγκο."
"Τα θηλαστικά ποντίκια εμβολιάστηκαν ενδοεγκεφαλικά (ic) και ενδοπεριτοναϊκά (ip) με 0,02 ml.
Τα ινδικά χοιρίδια (200-300 g) εμβολιάστηκαν ip με 4 ml. Για περαιτέρω παθητικοποίηση, το ολικό αίμα που συλλέχθηκε με καρδιακή παρακέντηση εγχύθηκε ip."
--> Αποτελέσματα
Όλες οι προσπάθειες απομόνωσης ήταν αρνητικές εκτός από το ινδικό χοιρίδιο.
--> Περάσματα σε ινδικό χοιρίδιο
Τα ινδικά χοιρίδια που εγχύθηκαν με τη μέθοδο ip με δείγματα αίματος του ασθενούς H. F. (HF 1 και HF 2) εναιωρήματα οργάνων του ασθενούς P. S. και δεξαμενές οργάνων Cercopithecus M 10 και M 14 ανέπτυξαν σταθερά πυρετική αντίδραση 4 έως 6 ημέρες μετά τον εμβολιασμό. Το πυρετικό στάδιο διήρκεσε 3 έως 7 ημέρες.
Ολόκληρο το αίμα που ελήφθη κατά τη διάρκεια αυτού του εμπύρετου σταδίου έχει περάσει επιτυχώς από 3 έως 6 περάσματα ip σε ινδικά χοιρίδια (Εικ. 1 έως 5). Η περίοδος επώασης μειώθηκε σε 2-3 ημέρες και ορισμένα ινδικά χοιρίδια πέθαναν από 7 έως 17 ημέρες μετά τον εμβολιασμό. Τα κλινικά συμπτώματα στα ζώα ήταν: απώλεια όρεξης και βάρους, "φουσκωμένο πρόσωπο" και διόγκωση των όρχεων. Κατά τη νεκροψία διαπιστώθηκε σπληνομεγαλία και παγίωση των πνευμόνων.
Οι αντιδράσεις πυρετού στα ινδικά χοιρίδια δημιουργήθηκαν με τη χρήση πρώιμων δειγμάτων αίματος από το προηγούμενο πέρασμα. Σε μία περίπτωση (Εικ. 4, πέρασμα 4), η αντίδραση πυρετού ακολούθησε τον εμβολιασμό αίματος που ελήφθη την 11η ημέρα. Το γεγονός αυτό επιβεβαιώνει την παρατήρηση ότι η μόλυνση φαίνεται να παράγει ιαιμία μακράς διάρκειας".
--> Συµπεράσµατα
"Τα αποτελέσματα που αναφέρθηκαν παραπάνω δείχνουν ότι από ανθρώπινο και πιθηκοειδές υλικό απομονώθηκε ένας οργανισμός και μεταδόθηκε μέσω τεσσάρων έως έξι περασμάτων σε ινδικά χοιρίδια".
DOI: 10.1007/978-3-662-01593-3_16
Όπως φαίνεται από την παραπάνω μελέτη, οι ερευνητές συγχέουν την πειραματική δημιουργία ασθένειας σε ινδικά χοιρίδια μέσω σειριακών διελεύσεων και αφύσικων οδών μόλυνσης με την "απομόνωση" ενός "ιού". Σε κανένα σημείο δεν καθαρίστηκε και δεν απομονώθηκε ποτέ ένας "ιός" από τα υγρά ενός άρρωστου ανθρώπου, ενός πιθήκου ή ενός ινδικού χοιριδίου. Πέραν του μη ειδικού πυρετού, της απώλειας βάρους και της απώλειας όρεξης (που συνέβησαν μετά από ενέσεις τοξικής μη καθαρισμένης γλίτσας στο στομάχι), κανένα από τα συμπτώματα που παρουσίασαν τα ινδικά χοιρίδια (φουσκωμένο πρόσωπο, διογκωμένοι όρχεις) δεν σχετίζεται καθόλου με την ανθρώπινη κατάσταση. Στην πραγματικότητα, οι Rudolf Siegert και Werner Slenczka παραδέχτηκαν αργότερα στην εργασία τους Laboratory Diagnosis and Pathogenesis, ότι όσον αφορά την παθογένεια της νόσου στον άνθρωπο, "προφανώς η μολυσματικότητα του ιού Μάρμπουργκ διαφέρει στον πίθηκο, τον άνθρωπο και το ινδικό χοιρίδιο". Ωστόσο, με βάση αυτά τα πειραματικά αποτελέσματα διαπιστώθηκε ότι ένας νέος παθογόνος "ιός" κρυβόταν στα υγρά των νοσούντων ινδικών χοιριδίων, τα οποία στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκαν για απεικόνιση με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο προκειμένου να προσπαθήσουν να βρουν τον νέο "ιό".
--> 2. Εικόνες ηλεκτρονικής μικροσκοπίας
"Η δεύτερη δυνατότητα γρήγορης διάγνωσης έγκειται στην άμεση επίδειξη του ιού με το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο. Αυτό μπορεί να επιτύχει εάν ο παράγοντας φυγοκεντρηθεί απευθείας από ορό ή πλάσμα σε φορέα, σύμφωνα με τους Peters και Muller [7]. Η χαρακτηριστική µορφολογία δεν αφήνει καµία αµφιβολία ως προς τη διάγνωση. Ωστόσο, δεν διαθέτουμε εμπειρία που να μας επιτρέπει να απαντήσουμε στο ερώτημα σχετικά με την πιθανότητα να παραβλεφθεί ο παράγοντας με τη μέθοδο αυτή. Για το λόγο αυτό θα πρέπει σε κάθε περίπτωση να ακολουθήσουν προσπάθειες αποµόνωσης του ιού σε ινδικά χοιρίδια και σε διάφορα συστήµατα κυτταροκαλλιέργειας.
https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-662-01593-3_22
Ενώ οι ερευνητές απέτυχαν στις αρχικές τους προσπάθειες να εντοπίσουν τον "ιό" με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετά την ασθένεια των ινδικών χοιριδίων, τελικά διαπίστωσαν μέσω των αποτελεσμάτων άμεσης και έμμεσης χρώσης αντισωμάτων ότι μπορούσαν να βρουν τον "ιό" στο συκώτι και τη σπλήνα των ζώων αυτών. Αν και η μελέτη του Rudolf Siegert δεν προσέφερε πολλές πληροφορίες για το πώς προσδιόρισαν ότι τα σωματίδια που παρατηρήθηκαν ήταν ο πραγματικός "ιός" που έψαχναν, προσέφερε μερικά ενδιαφέροντα σχόλια σχετικά με τη μορφολογία τους, τα οποία ευτυχώς δεν χάθηκαν στη μετάφραση:
--> Σχετικά με την αιτιολογία μιας άγνωστης ανθρώπινης λοίμωξης που προέρχεται από πιθήκους
"Τα αποτελέσματα που περιγράφονται δείχνουν ότι ο "ιός Marburg" δεν είναι πανομοιότυπος, αλλά μορφολογικά συγγενεύει στενά με τον ιό της φυσαλιδώδους στοματίτιδας (1, 2, 6, 9, 11, 12), τον ιό Coval (1, 3) Egtved- (13) και τέλος τον ιό της λύσσας (8, 10). Μια θεμελιώδης διαφορά από αυτούς τους ιούς φαίνεται να έχει η ιδιαίτερη τάση για αύξηση του μήκους".
Σύμφωνα με τον Seigert, τα σωματίδια που παρατήρησε έμοιαζαν μορφολογικά με τους "ιούς" της φυσαλιδώδους στοματίτιδας, της κοβάλιας, του egtved και της λύσσας. Η κύρια διαφορά ήταν στο μήκος των σωματιδίων. Ωστόσο, το μήκος των σωματιδίων διακρίνει πραγματικά τόσο πολύ αυτούς τους "ιούς" μεταξύ τους; Θα μπορούσαν όλα αυτά να είναι τυχαία κομμάτια από τα ίδια μακρά σκέλη που έχουν σπάσει ή ακόμη και να έχουν δημιουργηθεί από τις διαδικασίες που χρησιμοποιήθηκαν για τη λήψη των εικόνων; Παρακάτω παρουσιάζονται οι εικόνες του "ιού" του Μάρμπουργκ που παρέσχε ο Seigert και οι οποίες δείχνουν μερικά μακρύτερα σωματίδια αναμεμειγμένα με άλλα μικρότερα σωματίδια που μοιάζουν με το σχήμα σφαίρας των προαναφερθέντων "ιών" που αναφέρονται στην εργασία του. Η τρίτη εικόνα που περιλαμβάνεται είναι μία που παρέχεται από τον Slenczka και λέγεται ότι προέρχεται από την αρχική "απομόνωση" το 1967, ενώ οι έγχρωμες εικόνες είναι εικόνες που προέρχονται από πρόσφατα άρθρα του 2022 σχετικά με τα κρούσματα του "ιού" του Μάρμπουργκ στη Γκάνα:
https://www.bmj.com/content/378/bmj.o1797
https://www.indiatoday.in/amp/information/story/what-is-marburg-virus-1977711-2022-07-20
Όπως φαίνεται, ο "ιός" του Μάρμπουργκ έχει διαφορετικά σχήματα και μεγέθη, από μακρόστενα νηματοειδή σωματίδια μέχρι μικρότερα σωματίδια που μοιάζουν με σφαίρες, ακόμη και εκείνα που μοιάζουν με δομές που μοιάζουν με "στεφάνη". Φαίνεται ότι η εικόνα του "ιού" εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τον τρόπο λήψης/κοπής της φωτογραφίας καθώς και από τον τρόπο με τον οποίο τα σωματίδια είναι βαμμένα και χρωματισμένα. Ακολουθούν εικόνες των "ιών" που ο Seigert αναφέρει ότι είναι μορφολογικά παρόμοιοι με τον "ιό του Μάρμπουργκ":"
--> Κυστική στοματίτιδα
Σε αυτές τις εικόνες, μπορούμε να δούμε το παρόμοιο σχήμα που μοιάζει με σφαίρα στον "ιό" της φυσαλιδώδους στοματίτιδας, όπως φαίνεται στα σωματίδια που ισχυρίζεται ότι είναι ο "ιός της λύσσας". Είναι ενδιαφέρον ότι τα σωματίδια φαίνεται να ποικίλλουν σε μέγεθος από τις μικρότερες σφαίρες μέχρι τις πολύ πιο επιμήκεις μορφές που μοιάζουν με τον "ιό του Marburg". Αυτό το "ξετύλιγμα" περιγράφηκε στην τρίτη εικόνα ως πιθανότατα αποτέλεσμα των διαδικασιών αρνητικής χρώσης που έγιναν για την απεικόνιση των σωματιδίων του "ιού".
https://www.utmb.edu/virusimages/VI/vesicular-stomatitis-indiana-virus
https://www.nature.com/articles/ncomms2435
"Η διαφορά στο βαθμό ξετυλίγματος πιθανόν να οφείλεται σε εγγενείς διακυμάνσεις στη διαδικασία αρνητικής χρώσης λόγω διαφορών στην τοπική υδρόφιλη κατάσταση του φιλμ στήριξης, στη συγκέντρωση του δείγματος, στη θερμοκρασία δωματίου και στην υγρασία." https://www.researchgate.net/figure/EM-of-VSV-structure-Negative-staining-was-done-with-I-N-SST-A-Intact-VSV-The_fig1_14969735
--> Ιογενής αιμορραγική σηψαιμία (VHSV)
Ο VHSV είναι ένας "ιός" ψαριών που υποτίθεται ότι έχει επίσης το ίδιο ακριβώς σχήμα με τον "ιό" της λύσσας και μοιάζει μορφολογικά με τον "ιό του Μάρμπουργκ". Όπως φαίνεται, τα σχήματα των σωματιδίων κυμαίνονται και πάλι από μικρές οντότητες που μοιάζουν με σφαίρες έως μακρύτερα νημάτια, ίσως και πάλι λόγω των αρνητικών διαδικασιών χρώσης.
--> Λύσσα
Ακόμη και ο "ιός της λύσσας", που λέγεται ότι είναι τα σωματίδια που μοιάζουν με σφαίρες και φαίνονται στις εικόνες ΤΕΜ, εμφανίζουν διάφορα σχήματα και μεγέθη ανάλογα με τη χρώση και τον χρωματισμό. Ορισμένα φαίνεται να είναι μακρόστενες μορφές νηματίων τύπου Marburg που τυχαίνει να υπάρχουν σε σχήμα U κατά την απεικόνιση. Είναι αρκετά ενδιαφέρον ότι μέχρι τις αρχές της δεκαετίας του 1980, ο "ιός του Μάρμπουργκ" είχε ταξινομηθεί ως ραβδοϊός λόγω των ομοιοτήτων μεταξύ της μορφολογίας των "ιών". Αρχικά μάλιστα του δόθηκε το όνομα Rhabdovirus simiae.
https://www.cdc.gov/rabies/diagnosis/electron_microscopy.html
https://en.m.wikipedia.org/wiki/Rabies_virus
https://fineartamerica.com/featured/tem-of-rabies-viruses-cnriscience-photo-library.html
Ενώ είναι εύκολο να δει κανείς τις ομοιότητες μεταξύ του "ιού του Μάρμπουργκ" και των άλλων "ιών" που ανέδειξε ο Seigert στη μελέτη του, παρέλειψε να αναφέρει ότι μπορούμε να βρούμε παρόμοια σωματίδια νηματίων που μοιάζουν να σχετίζονται και με πολλούς άλλους "ιούς":
--> Παρωτίτιδα
https://www.ecdc.europa.eu/en/immunisation-vaccines/facts/vaccine-preventable-diseases
http://www.virology.uct.ac.za/vir/teaching/linda-stannard/paramyxovirus
--> Ιλαρά
https://europepmc.org/articles/pmc375751?pdf=render
https://www.sciencephoto.com/media/248676/view/measles-virus-tem
--> Parainfluenza
https://www.alamy.com/stock-photo/human-parainfluenza-virus-hpiv.html
https://www.sciencephoto.com/media/247979/view/coloured-tem-of-parainfluenza-virus-particles
https://www.sciencephoto.com/media/1010244/view
Μπορεί να διαπιστωθεί ότι οι εικόνες αυτών των σωματιδίων που ισχυρίζεται ο Seigert ότι είναι διαφορετικοί "ιοί" έχουν σίγουρα παρόμοια μορφολογία (δηλαδή μορφή και δομή). Είναι σαφές ότι η χρώση και ο χρωματισμός των σωματιδίων καθώς και ο τρόπος μεγέθυνσης και παρουσίασής τους επηρεάζει σίγουρα τον τρόπο με τον οποίο εμφανίζονται στις εικόνες. Αναφέρεται μάλιστα σε μια μελέτη ότι οι διαδικασίες αρνητικής χρώσης έχουν αντίκτυπο στον τρόπο με τον οποίο σχηματίζονται τα σωματίδια. Είναι προφανές, όταν συμπεριλαμβάνονται εικόνες από μορφές νηματίων άλλων "ιών", ότι πρόκειται για μια ακόμη περίπτωση όπου τα ίδια σωματίδια (που φαίνονται σε διάφορα στάδια σχηματισμού/αποικοδόμησης) κόβονται από μια αμιγή θάλασσα διαφορετικών σχημάτων και δομών και εστιάζονται ως ο αντιπροσωπευτικός ένοχος σε πολυάριθμες ασθένειες.
Καθώς οι εικόνες ηλεκτρονικής μικροσκοπίας παίζουν τόσο καθοριστικό ρόλο στην απόδειξη που παρέχεται για τον "ιό του Μάρμπουργκ", είναι σημαντικό να αποκτήσουμε κάποια μεγαλύτερη εικόνα της διαδικασίας ηλεκτρονικής μικροσκοπίας που χρησιμοποίησαν ο Werner Slenczka και οι συνεργάτες του προκειμένου να ταυτοποιήσουν τον "ιό του Μάρμπουργκ". Για τον σκοπό αυτό μπορούμε τώρα να στρέψουμε την προσοχή μας σε ένα άρθρο που έγραψε το 2017 και περιγράφει πώς ξεκίνησε η έρευνά του για τον "ιό των φιλοϊών". Σε αυτή την περιγραφή, μαθαίνουμε ότι τα δείγματα αίματος που ελήφθησαν από τα ινδικά χοιρίδια αναμίχθηκαν με γλουταραλδεΰδη και φορμαλδεΰδη πριν από την απεικόνιση. Ο Slenczka παραδέχτηκε ότι η αναζήτηση ενός άγνωστου παθογόνου παράγοντα στην ΗΜ μπορεί να είναι κουραστική και απογοητευτική, καθώς εξήγησε ότι πολλοί μολυσματικοί παράγοντες μπορούν να βρεθούν μέσα στο δείγμα. Αυτό συνέβη και με τον "ιό" του Marburg, καθώς στο δείγμα υπήρχαν πολυάριθμες μικροβιακές προσμίξεις (συνεπώς ήταν μη καθαρισμένο και δεν είχε απομονωθεί), γεγονός που δυσχέραινε την ερμηνεία των δεδομένων. Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, η σπλήνα και το ήπαρ των χοίρων Γουινέας χρησιμοποιήθηκαν για την απεικόνιση ΗΜ με τη χρήση άμεσου και έμμεσου φθορισμού αντισωμάτων και τα δείγματα ξηράθηκαν στον αέρα και στερεώθηκαν με παγωμένη ακετόνη. Δεδομένου ότι δεν γνώριζαν αν ο άγνωστος παράγοντας θα σκοτωνόταν από την ακετόνη, ο Slenczka ισχυρίστηκε ότι χειρίστηκαν τις αντικειμενοφόρους πλάκες με εξαιρετική προσοχή. Στη συνέχεια, χρειάστηκαν 3 εβδομάδες σκληρής δουλειάς για να πάρουν τα πρώτα αποτελέσματα. Ο Slenczka δήλωσε ότι αυτό που είδε στις διαφάνειες του έμοιαζε με τα σώματα Negri που λέγεται ότι είναι ειδικά για τον "ιό" της λύσσας, αλλά με κάποιο τρόπο αυτό το εύρημα του είπε ότι αυτό το φαινόμενο ήταν η αιτία ενός νέου "ιού". Χρησιμοποίησε τα αρχικά του ευρήματα για να χαρακτηρίσει κάθε δείγμα ινδικού χοιριδίου με αυτά τα εγκλείσματα ως δείγμα με τον "ιό" που χρειαζόταν περαιτέρω ανάλυση με ΗΜ.
Τα δείγματα αίματος που επιλέχθηκαν για περαιτέρω ανάλυση υποβλήθηκαν και πάλι σε γλουταραλδεΰδη και φορμαλδεΰδη και μελετήθηκαν. Ο Dr. D. Peters, μαζί με τον τεχνικό του, πέρασε πάνω από μία ημέρα εξετάζοντας τα δείγματα χωρίς κανένα αποτέλεσμα. Τη δεύτερη ημέρα, ο Dr. Peters εγκατέλειψε την έρευνα για ένα μεσημεριανό διάλειμμα και παρέδωσε τα ηνία στον Dr. G. Müller. Μόλις ο Dr. Peters επέστρεψε από το μεσημεριανό του διάλειμμα, ενημερώθηκε από τον Dr. Müller ότι ο "ιός" είχε βρεθεί (σε λιγότερο από μία ώρα), καθώς είχαν παρατηρήσει άγνωστα σωματίδια διαφορετικής μορφολογίας και δομής από αυτά που είχαν παρατηρηθεί στο παρελθόν. Προφανώς, αυτό δεν ισχύει, καθώς τα ίδια αυτά σωματίδια έχουν παρατηρηθεί με διάφορους "ιούς", όπως αναλύθηκε προηγουμένως. Τελικά, η όλη διαδικασία "απομόνωσης" δεν περιελάμβανε τον καθαρισμό και την απομόνωση οποιουδήποτε "ιού" απευθείας από ανθρώπινα υγρά και αντ' αυτού στηρίχθηκε εξ ολοκλήρου σε υποθέσεις που βασίστηκαν σε έμμεσες αποδείξεις που προέκυψαν από μελέτες σε ζώα, αντιγόνα και ΗΜ χρησιμοποιώντας μη καθαρισμένο και μη απομονωμένο υλικό από χοιρίδια Γουινέας και όχι από ανθρώπους.
Είναι ενδιαφέρον ότι, καθώς οι εργαστηριακοί ερευνητές που "μολύνθηκαν" αρχικά με τον "ιό" διεξήγαγαν έρευνα για το εμβόλιο πολιομυελίτιδας χρησιμοποιώντας καλλιέργειες νεφρικών κυττάρων πιθήκων, θεωρήθηκε ότι ο "ιός" προερχόταν από τους εισαγόμενους πιθήκους. Ωστόσο, σύμφωνα με τον Slenczka, κανένας από τους πιθήκους σε κανένα από τα εργαστήρια δεν εμφάνισε ποτέ κανένα σημάδι ασθένειας σε κανένα σημείο. Δήλωσε επίσης ότι τα ακριβή στοιχεία θνησιμότητας των ενοχοποιημένων πιθήκων δεν κοινοποιήθηκαν ποτέ. Έτσι, αφέθηκε σε απλές υποθέσεις ότι κάποιες επίμονα μολυσμένες μαϊμούδες από το "νησί των πιθήκων", οι οποίες ήταν σε κλουβί για έρευνα, μπορεί να ήταν η πηγή εισαγωγής του "ιού" του Μάρμπουργκ στην Ευρώπη. Σύμφωνα με τον Slenczka, ήταν γνωστό ότι ένας μεγάλος αριθμός πιθήκων από την ίδια πηγή στην Ουγκάντα μεταφέρθηκε ταυτόχρονα στη Σουηδία, την Ιαπωνία, την Τσεχοσλοβακία, την Ιταλία, την Ελβετία και την Αγγλία με σκοπό την προετοιμασία κυτταρικών καλλιεργειών. Ωστόσο, δεν αναφέρθηκαν κρούσματα σε καμία από αυτές τις τοποθεσίες. Έτσι, ο Slenczka αναγκάστηκε να παραδεχτεί ότι η υπόθεσή του, όπως και ο "ιός" του, βασιζόταν αποκλειστικά σε υποθέσεις:
--> Έρευνα για τον ιό Filovirus - Πώς ξεκίνησε
"Αυτά τα πειράματα ήταν ένα βήμα προς τη σωστή κατεύθυνση, αλλά ο παράγοντας παρέμεινε άγνωστος. Για να διευκολυνθεί η ταυτοποίηση, αίμα από μολυσμένα ζώα, που ελήφθη κατά την κορύφωση της νόσου, αναμείχθηκε με γλουταραλδεΰδη και φορμαλδεΰδη για να αδρανοποιηθεί και να διατηρηθεί ο άγνωστος παράγοντας και στάλθηκε στα εργαστήρια ηλεκτρονικής μικροσκοπίας (ΕΜ) του Πανεπιστημίου του Μάρμπουργκ και του Ινστιτούτου Τροπικής Ιατρικής Bernhard Nocht στο Αμβούργο της Γερμανίας για ανάλυση: D. Peters, επικεφαλής του Τμήματος Ιολογίας στο Ινστιτούτο Bernhard Nocht, ήταν γνωστός ιολόγος ηλεκτρονικής μικροσκοπίας και πολύ έμπειρος στην ανάλυση ιικών δομών.
Φυσικά, η αναζήτηση ενός άγνωστου παθογόνου παράγοντα σε βιολογικά υλικά με βάση το ΗΜ μπορεί να είναι εξαιρετικά κουραστική και -σε περίπτωση αρνητικού αποτελέσματος- πολύ απογοητευτική.
Στην περίπτωση του υλικού των ινδικών χοιριδίων, ένα πρόσθετο εμπόδιο έγινε σύντομα εμφανές. Μια σοβαρή επιπλοκή, που συχνά συναντάται κατά την αναζήτηση άγνωστων παθογόνων, είναι η επιμόλυνση από οργανισμούς που δεν σχετίζονται με την ασθένεια. Αυτοί οι μολυσματικοί παράγοντες "pick-up" μπορεί να παρεμβαίνουν στον αιτιολογικό παράγοντα ή ακόμη και να προκαλούν οι ίδιοι ασθένεια. Η μόλυνση μπορεί να προκύψει ως αποτέλεσμα μιας προϋπάρχουσας λοίμωξης. Κατά τη μετάβαση σε νέα ζώα, οι μολυσματικοί παράγοντες ενδέχεται να μεταφερθούν με μεγαλύτερη αποτελεσματικότητα από τον άγνωστο αιτιολογικό παράγοντα. Ο κίνδυνος καλλιέργειας ενός μολυσματικού παράγοντα μπορεί να μειωθεί με τη χρήση ζώων από φυλή SPF (specific pathogen free). Το 1967, στο Μάρμπουργκ δεν υπήρχε η δυνατότητα προμήθειας ινδικών χοιριδίων SPF. Αντ' αυτού, τα ζώα αγοράζονταν από τοπικούς σταθμούς εκτροφής που δεν έκαναν έλεγχο για μολύνσεις. Ως εκ τούτου, στα πειράματα που διεξήγαγαν οι Drs. Siegert και Shu, συνέβη να υπάρχουν μικροβιακές μολύνσεις, συμπεριλαμβανομένων ψευδομονάδων, παστερελαίων και σε ορισμένες περιπτώσεις παραμυξοϊών στα ινδικά χοιρίδια. Αν και ήταν απολύτως σαφές ότι αυτοί οι γνωστοί οργανισμοί δεν ήταν το αιτιολογικό παθογόνο, η παρουσία αυτών των επιμολύνσεων περιέπλεκε την ερμηνεία των δεδομένων".
"Όργανα από μολυσμένα και μη μολυσμένα ινδικά χοιρίδια, ιδίως ήπαρ και σπλήνα, χρησιμοποιήθηκαν για την παρασκευή αποτυπωμάτων σε μικροσκοπικές αντικειμενοφόρους πλάκες, τα οποία στη συνέχεια ξηράθηκαν στον αέρα και σταθεροποιήθηκαν με παγωμένη ακετόνη. Δεδομένου ότι δεν γνωρίζαμε αν ο άγνωστος παράγοντας θα σκοτωνόταν από την ακετόνη, χειριστήκαμε αυτές τις αντικειμενοφόρους πλάκες με εξαιρετική προσοχή. Χρειάστηκαν 3 εβδομάδες σκληρής δουλειάς για να έχουμε τα πρώτα αποτελέσματα. Βρήκα λαμπρά φθορίζοντα κυτταροπλασματικά εγκλείσματα σε ηπατικά κύτταρα από ένα μολυσμένο ινδικό χοιρίδιο. Δεδομένου ότι όλοι οι έλεγχοι ήταν αρνητικοί, ήμουν βέβαιος ότι είχα βρει αντιγονικές δομές του άγνωστου παθογόνου (Εικ. 4). Εκείνη τη στιγμή, δεν ήταν ακόμη δυνατό να πω αν αυτά τα εγκλείσματα, τα οποία έμοιαζαν με τα σώματα Negri που βρέθηκαν σε μολυσμένα από τον ιό της λύσσας κύτταρα (Goldwasser et al. 1959), ήταν ενδεικτικά μιας ιογενούς ή βακτηριακής λοίμωξης. Ωστόσο, ήταν σαφές ότι είχα εντοπίσει κάτι που κανείς δεν είχε δει στο παρελθόν- δομές ενός άγνωστου παράγοντα που προκαλούσε μια θανατηφόρα ασθένεια (Slenczka et al. 1968).
Χρησιμοποιώντας αυτή τη δοκιμασία, ήταν πλέον δυνατό να εντοπιστούν τα ζώα που είχαν μολυνθεί από αυτόν τον παράγοντα, ώστε να επιλεγεί υλικό για ΗΜ έρευνες. Και πάλι, αίμα ινδικών χοιριδίων επεξεργασμένο με γλουταραλδεΰδη και φορμαλδεΰδη στάλθηκε στο Ινστιτούτο Bernhard Nocht στο Αμβούργο για ΗΜ ανάλυση. Ο Dr. D. Peters, μαζί με έναν τεχνικό, ανέλυσε αρνητικά βαμμένο υλικό για περισσότερο από μία ημέρα, αλλά δεν παρατήρησε τίποτα που να θυμίζει ιική δομή. Τη δεύτερη ημέρα της έρευνάς του, ο Dr. Peters έφυγε από το εργαστήριο για ένα μεσημεριανό διάλειμμα και παρέδωσε το δείγμα στον συνάδελφό του, Dr. G. Müller, ζητώντας του να συνεχίσει την έρευνα. Σε λιγότερο από μία ώρα, ο Dr. Müller είχε καταφέρει να βρει ιικά σωματίδια που, λόγω του μεγέθους και της μοναδικής μορφολογίας τους, ταυτοποιήθηκαν ως προϊόντα ενός άγνωστου ιού (Εικ. 5). Όταν ο Dr. Peters επέστρεψε από το μεσημεριανό του διάλειμμα, ο Müller του έδειξε τον νέο ιό. Δεν είναι σαφές γιατί ο Dr. Peters δεν είχε βρει τα ιικά σωματίδια όταν εξέτασε τα δείγματα. Η πιο πιθανή εξήγηση φαίνεται να είναι ότι τα σωματίδια είχαν καθιζάνει αυθόρμητα στον πυθμένα του σωλήνα και ο Dr. Peters πήρε υλικό μόνο από την κορυφή".
"Οι ερευνητές που αξίζουν τα εύσημα για την απομόνωση και την ταυτοποίηση του ιού του Μάρμπουργκ είναι ο Walter Mannheim, Πανεπιστήμιο του Μάρμπουργκ για την επιτυχή μετάδοση σε ινδικά χοιρίδια, ο Werner Slenczka, Πανεπιστήμιο του Μάρμπουργκ για την ανίχνευση και την ταυτοποίηση του αντιγόνου του ιού του Μάρμπουργκ με ανάλυση ανοσοφθορισμού και ο Gerhard Müller, Ινστιτούτο Bernhard Nocht για την ταυτοποίηση του ιού με ΗΜ. Ο Walter Mannheim, βακτηριολόγος, δεν ενδιαφέρθηκε να συμμετάσχει στη συγγραφή δημοσιεύσεων παρά τη συμμετοχή του στην απομόνωση του ιού".
"Το πιο ενδιαφέρον ερώτημα σχετικά με αυτές τις μαϊμούδες είναι η κατάσταση της υγείας τους. Πού και πότε απέκτησαν τον ιό; Γιατί δεν παρουσίασαν σημάδια ασθένειας σε κανένα σημείο- ούτε όταν βρίσκονταν στο Εντέμπε, ούτε κατά την άφιξή τους στο Λονδίνο, τη Φρανκφούρτη, το Μάρμπουργκ ή το Βελιγράδι, ούτε όταν τελικά τους έγινε ευθανασία; Η θνησιμότητα των εισαγόμενων NHPs ήταν περίπου 5% εκείνη την εποχή. Μια αύξηση της θνησιμότητας των εισαγόμενων NHPs θα έπρεπε σίγουρα να εγείρει υποψίες. Τα ακριβή στοιχεία θνησιμότητας των ενοχοποιημένων πιθήκων δεν κοινοποιήθηκαν ποτέ. Δεν υπάρχει αμφιβολία ότι τα ζώα επιθεωρούνταν προσεκτικά πριν από τη χρήση τους".
"Η υπόθεση ότι κάποιοι επίμονα μολυσμένοι πίθηκοι από το "νησί των πιθήκων" θα μπορούσαν να είναι η πηγή εισαγωγής του ιού Marburg στην Ευρώπη θα μπορούσε να βοηθήσει στην εξήγηση ορισμένων ιδιαιτεροτήτων αυτής της επιδημίας. Είναι γνωστό ότι ένας μεγάλος αριθμός πιθήκων από την ίδια πηγή στην Ουγκάντα μεταφέρθηκε στη Σουηδία, την Ιαπωνία, την Τσεχοσλοβακία, την Ιταλία, την Ελβετία και την Αγγλία την ίδια στιγμή και για τον ίδιο σκοπό: για την προετοιμασία κυτταρικών καλλιεργειών. Ωστόσο, δεν αναφέρθηκε κανένα κρούσμα σε καμία από αυτές τις τοποθεσίες. Είναι πιθανό ότι όταν συγκεντρώθηκαν οι αποστολές προς τη Γερμανία και τη Γιουγκοσλαβία, δεν είχαν απομείνει αρκετοί πίθηκοι στο σταθμό συλλογής και, ως εκ τούτου, χρησιμοποιήθηκαν ζώα από το "νησί των πιθήκων" για να συμπληρωθεί η αποστολή. Μεταξύ των ζώων που είχαν συλληφθεί από το "Monkey island" υπήρχαν πιθανώς και κάποια που είχαν επιβιώσει από μόλυνση με τον ιό Marburg αλλά φαίνονταν υγιή. Αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει γιατί ο ιός Marburg μεταφέρθηκε αποκλειστικά με αποστολές σε τοποθεσίες στη Γερμανία και στη Γιουγκοσλαβία.
Ομολογουμένως, η παραπάνω υπόθεση βασίζεται σε υποθέσεις. Προσφέρει όμως μια ενδιαφέρουσα εξήγηση που αντιμετωπίζει πολλά από τα ανοιχτά ερωτήματα σχετικά με το εν λόγω ξέσπασμα, τα οποία, μέχρι τώρα, παρέμεναν αναπάντητα".
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28766193/
--> 3. Καλλιέργεια κυττάρων
"Στις κυτταροκαλλιέργειες απουσιάζουν οι κυτταροπαθητικές αλλοιώσεις. Ωστόσο, ήδη από την τρίτη ημέρα μπορούν να αναγνωριστούν κυτταροπλασματικά εγκλείσματα αντιγόνου, τα οποία αυξάνονται σημαντικά σε αριθμό και μέγεθος μέχρι την 7η ημέρα.
https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-662-01593-3_22
Πέρα από τα ζητήματα που σχετίζονται με την ερμηνεία των μολυσμένων και μη καθαρισμένων εικόνων ΕΜ και την έλλειψη νόσου στους πιθήκους που θεωρήθηκε ότι ήταν φορείς του "ιού", οι πρώτες προσπάθειες για τον πολλαπλασιασμό του "ιού" σε κυτταροκαλλιέργειες απέτυχαν παταγωδώς. Χρησιμοποιήθηκαν πολλές διαφορετικές κυτταρικές σειρές και συχνά προέκυπταν αντικρουόμενα αποτελέσματα. Πολλές φορές, οι ερευνητές ισχυρίζονταν ότι ο "ιός" πολλαπλασιάστηκε επιτυχώς στα κύτταρα, παρόλο που δεν παρατηρήθηκε ποτέ το απαιτούμενο κυτταροπαθογόνο αποτέλεσμα (CPE). Αυτό είναι το φαινόμενο που χρησιμοποιούν οι ιολόγοι για να ισχυριστούν ότι οι δομικές αλλαγές που παρατηρούνται σε ένα κύτταρο ξενιστή κατά τη διάρκεια της καλλιέργειας είναι αποτέλεσμα της μόλυνσης και του πολλαπλασιασμού από "ιό". Όπως αναφέρει μια πηγή, το CPE είναι ένας τρόπος "θέασης" και έμμεσης μέτρησης μιας "ιογενούς" λοίμωξης με την εξέταση της ζημίας που προκαλεί ένας "ιός" σε ένα κύτταρο. Αυτή η βλάβη είναι μια μέτρηση που χρησιμοποιείται ευρέως σε εργαστήρια ιολογίας σε όλο τον κόσμο προκειμένου να προσδιοριστεί έμμεσα η παρουσία ενός "ιού". Χωρίς την παρατήρηση μιας τέτοιας επίδρασης, η καλλιέργεια θα έπρεπε θεωρητικά να δείχνει ότι δεν υπάρχει "ιός" στο δείγμα. Ωστόσο, καθώς το φαινόμενο αυτό δεν παρατηρείται πάντοτε, οι ιολόγοι βρήκαν έναν τρόπο να παρακάμψουν την έλλειψη δυνατότητας παραγωγής αυτού του φαινομένου σε όλες τις καλλιέργειες, υποστηρίζοντας ότι ορισμένοι "ιοί" δεν παράγουν καθόλου CPE, ενώ άλλοι το κάνουν μόνο σε ορισμένες κυτταρικές σειρές. Δηλώνουν ότι ακόμη και χωρίς την παρατήρηση CPE, οι καλλιέργειες εξακολουθούν να είναι επιτυχείς παρά την έλλειψη δομικών αλλαγών που υποδηλώνουν την κατάληψη του κυττάρου από τον "ιό" και την επακόλουθη διαδικασία αντιγραφής.
Τα παρακάτω σημεία είναι από ένα έγγραφο του 1971, το οποίο συνοψίζει τις προσπάθειες καλλιέργειας του "ιού" του Μάρμπουργκ και εξηγεί τα συγκεχυμένα και αντιφατικά αποτελέσματα. Οι συγγραφείς κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι ενώ ο "ιός" μπορούσε να πολλαπλασιαστεί σε καλλιέργεια, ο γενικός κανόνας ήταν ότι δεν μπορούσαν να παρατηρηθούν ακαθάριστες κυτταροπαθητικές αλλαγές:
--> Καλλιέργεια του ιού Marburg (Rhabdovirus simiae) σε κυτταρικές καλλιέργειες
"Την εποχή που ο αιτιολογικός παράγοντας του αιμορραγικού πυρετού Marburg ήταν ακόμη άγνωστος, έγιναν προσπάθειες απομόνωσης του παράγοντα από ασθενείς. Για τους σκοπούς της απομόνωσης χρησιμοποιήθηκαν πειραματόζωα και πολλά κυτταρικά συστήματα, αλλά όλες οι αρχικές δοκιμές σε κυτταρικές καλλιέργειες ήταν ανεπιτυχείς (SIEGERT et aI., 1967- MAY and KNOTHE,1968- SIEGERT et aI., 1968). Αργότερα, όταν ο ιός αποµονώθηκε σε ινδικά χοιρίδια (SIEGERT et aI., 1967- SMITH et aI., 1967- KUNZ et aI., 1968- MAY and KNOTHE, 1968- KISSLING et aI., 1968), πολλοί ερευνητές προσπάθησαν να πολλαπλασιάσουν τον ιό Marburg σε διάφορες κυτταρικές καλλιέργειες. Επί του παρόντος, είναι διαθέσιμα πολλά δεδομένα τα οποία θα συνοψιστούν στην παρούσα έκθεση".
Σε πρωτογενή κύτταρα του νεφρού του Cercopithecus, του είδους με το οποίο εισήχθη ο παράγοντας στη Γερμανία, οι SIEGERT et aI. (1968) διαπίστωσαν ότι ο ιός αναπαράγεται χωρίς κυτταροπαθητικό αποτέλεσμα (CPE). Απέδειξαν επίσης το ειδικό αντιγόνο του ιού με τη μέθοδο του ανοσοφθορισμού. Αντίθετα, οι HAAS et aI. (1968) παρατήρησαν σοβαρή CPE σε πρωτογενή κύτταρα νεφρών Cercopithecus. Τα κύτταρα αυτά ήταν μόνο λιγότερο ευαίσθητα στον ιό από ό,τι οι υποδόρια μολυσμένοι πίθηκοι Cercopithecus.
Σε πρωτογενή νεφρικά κύτταρα πιθήκων Rhesus, ο ιός πολλαπλασιάστηκε αλλά χωρίς CPE (HOFMANN και KUNZ, 1968). Πρωτογενή κύτταρα ανθρώπινης προέλευσης πολλαπλασίασαν επίσης τον ιό. Οι MAY και KNOTHE (1968) δεν μπόρεσαν να παρατηρήσουν CPE σε ανθρώπινα λευκοκύτταρα, αλλά ανέφεραν ελαφρά CPE σε πρωτογενή ανθρώπινα αμνιακά κύτταρα (MAY et aI., 1968).
Μπορέσαμε να καταδείξουμε τον πολλαπλασιασμό του ιού σε πρωτογενείς ινοβλάστες εμβρύου ινών ινδικού χοιριδίου, αλλά δεν παρατηρήθηκε CPE (HOFMANN και KUNZ, 1968).
Σε κύτταρα εμβρύου νεοσσού, διαπιστώσαμε έναν πολύ μικρό πολλαπλασιασμό του ιού (HOFMANN and KUNZ, 1968), ενώ άλλοι ερευνητές δεν παρατήρησαν καθόλου πολλαπλασιασμό (SMITH et aI., 1967- MAY και KNOTHE, 1968).
"Οι καθιερωμένες κυτταρικές σειρές διερευνήθηκαν επίσης για τον πολλαπλασιασμό του ιού Marburg. Στην αρχή δοκιμάστηκαν κύτταρα που προέρχονταν από πιθήκους. Παρόλο που διαπιστώσαμε ότι τα μόνιμα κύτταρα νεφρών Cercopithecus (στέλεχος GMK-AHl) παρήγαγαν υψηλούς τίτλους ιού-1 ml υγρού καλλιέργειας περιείχε 10^6 μολυσματικές δόσεις για τα ινδικά χοιρίδια-δεν μπορέσαμε να αποδείξουμε ΚΑΕ. Οι KISSLING et aI. (1968) ήταν πιο επιτυχείς- παρατήρησαν CPE στις καλλιέργειές τους τη δεύτερη ημέρα p.i., η οποία ήταν συνολικά περίπου η 4η-5η ημέρα.
Στην κυτταρική σειρά VERO, ο ιός πολλαπλασιάστηκε επίσης. Οι SIEGERT et aI. (1968) δεν παρατήρησαν CPE και οι KISSLING et aI. (1968) παρατήρησαν μόνο ελαφρά CPE.
Από κύτταρα προέλευσης πιθήκων Rhesus, τα καρδιακά κύτταρα (στέλεχος CMH) επέτρεψαν μόνο ελαφρά ανάπτυξη του ιού (HOFMANN and KUNZ, 1968), ενώ σε νεφρικά κύτταρα (στέλεχος LLC-MK2) δεν ήταν αποδεδειγμένος ο πολλαπλασιασμός του ιού (SMITH et aI., 1967).
Στις µελέτες των SMITH et aI. (1967) ο ιός Marburg πολλαπλασιάστηκε σε κύτταρα L (κύτταρα εµβρύου ποντικού) χωρίς CPE- εµείς δεν µπορέσαµε να αποδείξουµε ανάπτυξη του ιού σε αυτά τα κύτταρα.
Τα καρδιακά κύτταρα που προέρχονται από ινδικά χοιρίδια επέτρεψαν επίσης τον πολλαπλασιασμό του ιού χωρίς CPE (KISSLING et aI., 1968).
Οι πρώτες αναφορές CPE που προκλήθηκε από τον ιό Marburg σε κυτταροκαλλιέργειες έγιναν από τους ZLOTNIK et aI. (1968). Είχαν διαπιστώσει ότι ο ιός ήταν προσαρμόσιμος στα κύτταρα BHK21. Στο πρώτο πέρασμα παρατηρήθηκαν στα μολυσμένα κύτταρα μετά από 13 ημέρες τυπικά σωμάτια εγκλεισμού παρόμοια με εκείνα που βρέθηκαν στο ήπαρ ινδικού χοιριδίου και η CPE εμφανίστηκε περίπου την 23η ημέρα. Μετά από μερικά περάσματα, τα σωμάτια εγκλεισμού καθώς και η CPE εμφανίζονταν νωρίτερα. Στο εργαστήριό µας οι καλλιέργειες BHK21 παρουσίασαν µόνο µικρές αλλαγές που εµφανίστηκαν πολύ αργά (HOFMANN και KUNZ, 1968). Οι KISSLING et aI. (1968) εξέτασαν δύο στελέχη BHK21 . Το ένα, το στέλεχος WI 2, συμπεριφέρθηκε όπως το στέλεχος στο εργαστήριό μας, αλλά το άλλο ήταν ιδιαίτερα ευαίσθητο. Το κυτταροπαθητικό αποτέλεσμα παρατηρήθηκε περίπου τη 2η-5η ημέρα μετά τη μόλυνση.
Σε αντίθεση µε 3 άλλες οµάδες ερευνητών (SIEGERT et aI., 1968- SMITH et aI., 1967- MAY and KNOTHE, 1968), µπορούσαµε να πολλαπλασιάσουµε τον ιό Marburg αρκετά καλά στο στέλεχος HeLa. Ένα ml καλλιεργητικού υγρού περιείχε 104 μολυσματικά σωματίδια για τα ινδικά χοιρίδια, ωστόσο δεν διαπιστώσαμε κανένα CPE (HOFMANN και KUNZ, 1968).
Άλλα στελέχη που προέρχονταν από ανθρώπινες πηγές ελέγχθηκαν επίσης για CPE που προκαλείται από τον ιό Marburg. Οι KISSLING et aI. (1968) πολλαπλασίασαν τον ιό σε ινοβλάστες της ακροποσθίας. Στο πρώτο πέρασμα του ιού η CPE ήταν αποδεδειγμένη αλλά δεν μπορούσε να αναπαραχθεί σε σειριακά περάσματα. Σε κύτταρα U, μια σταθερή κυτταρική σειρά ανθρώπινου αμνίου, ο παράγοντας πολλαπλασιάστηκε επίσης αλλά χωρίς CPE (HOFMANN και KUNZ, αδημοσίευτο).
Στο εργαστήριό μας είχαμε προηγουμένως δοκιμάσει πολλά κυτταρικά συστήματα, αλλά δεν μπορέσαμε να εντοπίσουμε μια κυτταρική σειρά στην οποία ο ιός Marburg πολλαπλασιάζεται με CPE. Τελικά συναντήσαμε το κυτταρικό στέλεχος ELF (εμβρυϊκοί ινοβλάστες του ανθρώπινου πνεύμονα), στο οποίο η CPE εμφανίζεται περίπου την 3η ημέρα και φτάνει στο μέγιστο περίπου την 5η ημέρα μετά τη μόλυνση. Το κυτταροπαθητικό αποτέλεσμα αρχίζει σε εστιακές περιοχές και συνίσταται σε αραχνοποίηση και αργότερα σε συσσώρευση των κυττάρων. Τέλος, οι εστίες γίνονται συρρέουσες (βλέπε εικόνες 1-3). Πρέπει να αναφερθεί ότι, μολονότι οι αλλαγές είναι σοβαρές, δεν είναι ποτέ πλήρεις και τελικά τα υγιή κύτταρα μπορούν να αναπτυχθούν και να επιδιορθώσουν τις βλάβες".
"Συνοψίζοντας τα ενίοτε αντικρουόμενα αποτελέσματα που λαμβάνονται από τους διάφορους ερευνητές, μπορεί να δηλωθεί ότι τα κύτταρα που προέρχονται από θηλαστικά όπως ο πίθηκος, το ινδικό χοιρίδιο και το χάμστερ και τα ανθρώπινα κύτταρα είναι ευαίσθητα στον ιό. Συχνά παράγονται υψηλοί τίτλοι από τα κύτταρα, αν και κατά κανόνα δεν παρατηρήθηκαν ακαθάριστες κυτταροπαθητικές αλλαγές".
https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-662-01593-3_15
--> Συνοπτικά:
Η νόσος του "ιού" Μάρμπουργκ (MVD) λέγεται ότι είναι ένας σπάνιος αλλά σοβαρός αιμορραγικός πυρετός που προσβάλλει τόσο τους ανθρώπους όσο και τα πρωτεύοντα θηλαστικά.
Είναι ένα από τα επτά είδη που ανήκουν στην ομάδα Filoviridae, με τα άλλα έξι είδη του "ιού Έμπολα" να είναι τα μόνα άλλα γνωστά μέλη της οικογένειας "filovirus".
Ο "ιός του Μάρμπουργκ" αναγνωρίστηκε για πρώτη φορά το 1967, όταν εκδηλώθηκαν ταυτόχρονα κρούσματα αιμορραγικού πυρετού σε εργαστήρια στο Μάρμπουργκ και τη Φρανκφούρτη της Γερμανίας και στο Βελιγράδι της Γιουγκοσλαβίας (σημερινή Σερβία).
Οι πρώτοι άνθρωποι που "μολύνθηκαν" είχαν εκτεθεί σε εισαγόμενους από την Ουγκάντα αφρικανικούς πράσινους πιθήκους ή στους ιστούς τους κατά τη διεξαγωγή ερευνών
Η κλινική διάγνωση της νόσου του "ιού" του Μάρμπουργκ (MVD) μπορεί να είναι δύσκολη, καθώς πολλά από τα σημεία και τα συμπτώματα της MVD είναι παρόμοια με άλλα λοιμώδη νοσήματα (όπως η ελονοσία, ο τυφοειδής πυρετός ή ο δάγκειος πυρετός) ή με "ιογενείς" αιμορραγικούς πυρετούς που μπορεί να ενδημούν στην περιοχή (όπως ο πυρετός Lassa ή ο Έμπολα)
Οι πρώτοι ασθενείς έλαβαν θεραπεία στα σπίτια τους για έως και 10 ημέρες, παρόλο που η ασθένεια περιγράφηκε ότι ξεκίνησε ξαφνικά με έντονη κακουχία, μυαλγία, πονοκέφαλο και ταχεία αύξηση της θερμοκρασίας σε 39°C ή και περισσότερο.
Αν και τα κλινικά συμπτώματα δεν ήταν πολύ ανησυχητικά κατά τις πρώτες 3-4 ημέρες, πρόσθετα συμπτώματα και σημεία εμφανίστηκαν στο τέλος της πρώτης εβδομάδας
Τα γαστρεντερικά συμπτώματα, όπως ναυτία, έμετος και διάρροια, υπέδειξαν στους επαγγελματίες υγείας ότι η διάγνωση μπορεί να είναι δυσεντερία ή τυφοειδής πυρετός
Σε ορισμένες περιπτώσεις, οι ασθενείς πέθαναν από σοβαρό αιμορραγικό σοκ την επομένη της εισαγωγής τους στο νοσοκομείο
Σημειώνεται ότι δεν υπάρχουν καθόλου πληροφορίες σχετικά με τις θεραπείες στις οποίες υποβλήθηκαν οι ασθενείς πριν και μετά την εισαγωγή τους στο νοσοκομείο και οι οποίες θα μπορούσαν να έχουν επιδεινώσει τα κλινικά τους συμπτώματα
Δεν συνέβη μετάδοση μέσω του αέρα μεταξύ των ανθρώπων, όπως δείχνει, για παράδειγμα, η περίπτωση ενός νεαρού άνδρα που κοιμήθηκε στο ίδιο κρεβάτι με τον αδελφό του μόλις λίγες ημέρες πριν πεθάνει- ο αδελφός δεν εμφάνισε νόσο και ήταν οροαρνητικός για τον MARV 6 μήνες αργότερα
Ένας από τους ασθενείς είχε νοσήσει βαριά κατά τη στιγμή της επιδημίας, αλλά, για άγνωστους λόγους, δεν νοσηλεύτηκε και ανάρρωσε και, 15 χρόνια αργότερα, υποστήριξε ότι είχε νοσήσει από MARV (πλήρης ανάρρωση από σοβαρή ασθένεια χωρίς εισαγωγή/θεραπεία στο νοσοκομείο... 🤔)
Μέχρι τα μέσα Σεπτεμβρίου, είχε καταστεί προφανές ότι ο παράγοντας παρουσίαζε χαμηλή μεταδοτικότητα
Είχαν εμφανιστεί μόνο λίγα κρούσματα δευτερογενούς λοίμωξης και κανένα κρούσμα τριτογενούς λοίμωξης και δεν είχαν εμφανιστεί νέα κρούσματα κατά τη διάρκεια των προηγούμενων 2 εβδομάδων
Ο Rudolf Siegert διεξήγαγε πειράματα με ινδικά χοιρίδια και διαπίστωσε ότι ο παράγοντας μπορούσε να μεταδοθεί μεταξύ ινδικών χοιριδίων και παρουσίαζε παθογένεια που αυξανόταν από πέρασμα σε πέρασμα (δηλ. όσο πιο συχνά έκαναν ενέσεις σε ινδικά χοιρίδια με καλλιεργημένους άρρωστους χυλούς και ιστούς, τόσο περισσότερο αρρώσταιναν)
Ωστόσο, όλες οι προσπάθειες για τον προσδιορισμό του αιτιολογικού παράγοντα με φωτεινή ή ηλεκτρονική μικροσκοπία απέτυχαν και οι ευκαιριακές βακτηριακές λοιμώξεις αποτελούσαν μείζον πρόβλημα.
Με άλλα λόγια, ισχυρίστηκαν ότι υπήρχε ένας "ιός" μέσα στην τοξική γλίτσα που πασάριζαν και εγχύονταν κατά συρροή σε ινδικά χοιρίδια, αλλά δεν μπόρεσαν να τον βρουν
Μετά από αυτή την αποτυχία, υπήρχαν διαθέσιμα δείγματα ανθρώπινου ορού και ορού ανάρρωσης γουρουνιών Γουινέας και ορισμένα από τα δείγματα ορού είχαν επισημανθεί με φλουορεσκεΐνη για άμεση IFA
Τρεις εβδοµάδες αργότερα, ο W.S. εντόπισε ενδοκυτταροπλασµατικά εγκλείσµατα στους ιστούς των µολυσµένων ινδικών χοιριδίων, µε IFA
Το φορμαλινοποιημένο πλάσμα περιστράφηκε απευθείας πάνω σε πλέγματα ηλεκτρονικού μικροσκοπίου (ΗΜ), μέσω μιας νέας τεχνικής που ανέπτυξε ο Gerhard Müller, και έγινε αρνητική χρώση
Με αυτές τις μεθόδους, ο "ιός" του Μάρμπουργκ ταυτοποιήθηκε στις 20 Νοεμβρίου 1967, σχεδόν 3 μήνες μετά την έναρξη της επιδημίας.
Για τα πειράματα με το ινδικό χοιρίδιο, το πηχτό αίμα αιμολύθηκε με αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό και τα όργανα αποτριβήθηκαν με ψυχρό γουδί και αραιωτικό ρυθμιστικού φωσφορικού διαλύματος που περιείχε 10 p. 100 κανονικό ορό κουνελιού, ώστε να δοθεί τελική συγκέντρωση περίπου 20 % κατ' όγκο.
Τα θηλαστικά ποντίκια εμβολιάστηκαν ενδοεγκεφαλικά (IC) και ενδοπεριτοναϊκά (IP) με 0,02 ml, ενώ τα ινδικά χοιρίδια (200-300 g) εμβολιάστηκαν IP με 4 ml.
Για περαιτέρω παθητικοποίηση, το ολικό αίμα που συλλέχθηκε με καρδιακή παρακέντηση εγχύθηκε IP
Όλες οι προσπάθειες απομόνωσης ήταν αρνητικές εκτός από τους χοίρους Γουινέας.
Οι χοίροι Γουινέας που εγχύθηκαν με τη μέθοδο IP με δείγματα αίματος του ασθενούς H. F. (HF 1 και HF 2) εναιωρήματα οργάνων του ασθενούς P. S. και δεξαμενές οργάνων Cercopithecus M 10 και M 14 ανέπτυξαν σταθερά εμπύρετη αντίδραση (δηλαδή πυρετό) 4 έως 6 ημέρες μετά τον εμβολιασμό
Ολόκληρο το αίμα που ελήφθη κατά τη διάρκεια αυτού του πυρετικού σταδίου είχε περάσει επιτυχώς από 3 έως 6 περάσματα IP σε ινδικά χοιρίδια
Η περίοδος επώασης μειώθηκε σε 2-3 ημέρες και ορισμένα ινδικά χοιρίδια πέθαναν από 7 έως 17 ημέρες μετά τον εμβολιασμό.
Τα κλινικά συµπτώµατα στα ζώα ήταν τα εξής:
Απώλεια όρεξης και βάρους
"Φουσκωμένο πρόσωπο".
Διεύρυνση των όρχεων
Οι ερευνητές θεώρησαν ότι τα αποτελέσματα που αναφέρθηκαν έδειξαν ότι από το ανθρώπινο υλικό και το υλικό των πιθήκων, ένας οργανισμός είχε "απομονωθεί" και είχε μεταδοθεί μέσω τεσσάρων έως έξι περασμάτων σε ινδικά χοιρίδια.
Με άλλα λόγια, η διαδοχική έγχυση ασθενών ιστών και υγρών σε ινδικά χοιρίδια και η πρόκληση συμπτωμάτων ισοδυναμούσε με "απομόνωση ενός ιού"
Σύμφωνα με την αναζήτηση του "ιού" με ηλεκτρονική μικροσκοπική απεικόνιση, ο Rudolf Siegert περιέγραψε τα σωματίδια που παρατηρήθηκαν ως μορφολογικά στενά συνδεδεμένα με τον "ιό" της φυσαλιδώδους στοματίτιδας, τον Coval, τον Egtved και τον "ιό" της λύσσας
Μια θεμελιώδης διαφορά από αυτούς τους "ιούς" φάνηκε να έχει η ιδιαίτερη τάση να αυξάνεται σε μήκος
Προκειμένου να ταυτοποιηθούν τα σωματίδια του "ιού" στην ΗΜ, αίμα από μολυσμένα ζώα, που ελήφθη στην κορύφωση της νόσου, αναμίχθηκε με γλουταραλδεΰδη και φορμαλδεΰδη για να αδρανοποιηθεί και να διατηρηθεί ο άγνωστος παράγοντας
Ο Werner Slenczka παραδέχθηκε ότι η αναζήτηση ενός άγνωστου παθογόνου παράγοντα σε βιολογικά υλικά με βάση το ΗΜ μπορεί να είναι εξαιρετικά κουραστική (κάτι που δεν θα συνέβαινε σε ένα καθαρισμένο/απομονωμένο παρασκεύασμα).
Μια σοβαρή επιπλοκή, που συχνά συναντάται κατά την αναζήτηση άγνωστων παθογόνων παραγόντων, είναι η επιμόλυνση από οργανισμούς που δεν σχετίζονται με την ασθένεια
Αυτοί οι μολυσματικοί παράγοντες που "μαζεύονται" μπορεί να παρεμβαίνουν στον αιτιολογικό παράγοντα ή ακόμη και να προκαλούν οι ίδιοι ασθένεια
Κατά τη μετάβαση σε νέα ζώα, οι μολυσματικοί παράγοντες μπορεί να μεταφερθούν με μεγαλύτερη αποτελεσματικότητα από τον άγνωστο αιτιολογικό παράγοντα
Το 1967, στο Μάρμπουργκ δεν μπορούσαν να βρεθούν ειδικά ινδικά χοιρίδια απαλλαγμένα από παθογόνα, οπότε τα ζώα αγοράστηκαν από τοπικούς σταθμούς εκτροφής που δεν έκαναν έλεγχο για μολύνσεις.
Ως εκ τούτου, στα πειράματα που διεξήγαγαν οι Drs. Siegert και Shu, συνέβη να υπάρχουν μικροβιακές μολύνσεις, συμπεριλαμβανομένων ψευδομονάδων, παστερελαίων και σε ορισμένες περιπτώσεις "παραμυξοϊών" στα ινδικά χοιρίδια.
Η παρουσία αυτών των επιμολύνσεων περιέπλεξε την ερμηνεία των δεδομένων.
Τα δείγματα αποξηράνθηκαν στον αέρα και στερεώθηκαν με παγωμένη ακετόνη ωστόσο, καθώς δεν γνώριζαν αν ο άγνωστος παράγοντας θα σκοτωνόταν από την ακετόνη, χειρίστηκαν αυτές τις αντικειμενοφόρους πλάκες με εξαιρετική προσοχή
Χρειάστηκαν 3 εβδομάδες σκληρής δουλειάς για να έχουν τα πρώτα αποτελέσματα
Ο Slenczka βρήκε εγκλείσματα μέσα στα δείγματα που έμοιαζαν με τα σώματα Negri που βρέθηκαν σε κύτταρα "μολυσμένα" από τον ιό της λύσσας
Κατά κάποιο τρόπο, η εύρεση των ίδιων εγκλεισμάτων που παρατηρούνται στη λύσσα οδήγησε τον Slenczka να πιστέψει ότι αυτό ήταν το αποτέλεσμα ενός νέου "ιού"
Ο Dr. D. Peters, μαζί με έναν τεχνικό, ανέλυσαν αρνητικά βαμμένο υλικό για περισσότερο από μία ημέρα, αλλά δεν παρατήρησαν τίποτα που να θυμίζει δομή "ιού"
Τη δεύτερη ημέρα της έρευνάς του, ο Dr. Peters έφυγε από το εργαστήριο για μεσημεριανό διάλειμμα και παρέδωσε το δείγμα στον συνάδελφό του, Dr. G. Müller, ζητώντας του να συνεχίσει την έρευνα και σε λιγότερο από μία ώρα, ο Dr. Müller είχε καταφέρει να βρει "ιΪκά" σωματίδια που, λόγω του μεγέθους και της μοναδικής μορφολογίας τους, ταυτοποιήθηκαν ως προϊόντα ενός άγνωστου "ιού"
Υπενθυμίζεται ότι είχε παραδεχθεί ότι ο "ιός" του Μάρμπουργκ έμοιαζε μορφολογικά με πολλούς άλλους "ιούς", συμπεριλαμβανομένης της λύσσας
Δεν είναι σαφές γιατί ο Dr. Peters δεν είχε βρει τα σωματίδια του "ιού" όταν εξέτασε τα δείγματα
Σύμφωνα με τον Slenczka, οι ερευνητές που αξίζουν τα εύσημα για την "απομόνωση" και την ταυτοποίηση του "ιού" Marburg είναι οι εξής
Walter Mannheim, Πανεπιστήμιο του Μάρμπουργκ για την επιτυχή μετάδοση σε ινδικά χοιρίδια (δεν ενδιαφέρθηκε να συμμετάσχει ως συν-συγγραφέας σε δημοσιεύσεις παρά τη συμμετοχή του στην απομόνωση του "ιού")
Werner Slenczka, Πανεπιστήμιο του Μάρμπουργκ για την ανίχνευση και ταυτοποίηση του αντιγόνου του "ιού" του Μάρμπουργκ με ανάλυση ανοσοφθορισμού
Gerhard Müller, Ινστιτούτο Bernhard Nocht για την ταυτοποίηση του "ιού" με ΗΜ
Σημειώνεται ότι η όλη διαδικασία "απομόνωσης" δεν περιελάμβανε τον καθαρισμό και την απομόνωση οποιουδήποτε "ιού" απευθείας από ανθρώπινα υγρά και, αντίθετα, στηρίχθηκε εξ ολοκλήρου σε υποθέσεις που βασίστηκαν σε έμμεσα στοιχεία που προέκυψαν από μελέτες σε ζώα, αντιγόνα και ΗΜ χρησιμοποιώντας μη καθαρισμένο και μη απομονωμένο υλικό από Γουινέα Χοίρους
Καθώς οι εργαστηριακοί εργαζόμενοι που αρρώστησαν εργάζονταν σε έρευνα για την πολιομυελίτιδα χρησιμοποιώντας καλλιέργειες νεφρικών κυττάρων πιθήκων, θεωρήθηκε ότι είχαν μολυνθεί από τους εισαγόμενους πιθήκους
Ωστόσο, κανένας από τους πιθήκους δεν παρουσίασε σημάδια νόσου σε κανένα σημείο.
Τα ακριβή στοιχεία θνησιμότητας των ενοχοποιημένων πιθήκων δεν ανακοινώθηκαν ποτέ
Ο Slenczka υπέθεσε ότι ορισμένοι επίμονα μολυσμένοι πίθηκοι από το "νησί των πιθήκων" θα μπορούσαν να είναι η πηγή εισαγωγής του "ιού" του Marburg στην Ευρώπη
Ήταν γνωστό ότι ένας μεγάλος αριθμός πιθήκων από την ίδια πηγή στην Ουγκάντα μεταφέρθηκε στη Σουηδία, την Ιαπωνία, την Τσεχοσλοβακία, την Ιταλία, την Ελβετία και την Αγγλία την ίδια στιγμή και για τον ίδιο σκοπό: για την προετοιμασία κυτταρικών καλλιεργειών
Ωστόσο, δεν αναφέρθηκαν κρούσματα σε καμία από αυτές τις τοποθεσίες
Ο Slenczka παραδέχτηκε ότι η υπόθεση που διατύπωσε βασιζόταν σε υποθέσεις
Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, οι προσπάθειες απομόνωσης ενός "ιού" από ασθενείς απέτυχαν
Για σκοπούς απομόνωσης χρησιμοποιήθηκαν πειραματόζωα και πολλά κυτταρικά συστήματα, αλλά όλες οι αρχικές δοκιμές σε κυτταρικές καλλιέργειες ήταν ανεπιτυχείς.
Μόνο όταν ο "ιός" "απομονώθηκε" σε ινδικά χοιρίδια έγιναν περαιτέρω προσπάθειες καλλιέργειας ενός "ιού"
Πολλοί ερευνητές προσπάθησαν να πολλαπλασιάσουν τον "ιό" του Marburg σε διάφορες κυτταρικές καλλιέργειες
Σε πρωτογενή κύτταρα του νεφρού Cercopithecus, του είδους με το οποίο εισήχθη ο παράγοντας στη Γερμανία, οι Seigert et aI. (1968) διαπίστωσαν ότι ο "ιός" πολλαπλασιάστηκε χωρίς κυτταροπαθητικό αποτέλεσμα (CPE)
Αντιθέτως, οι Haas et aI. (1968) παρατήρησαν σοβαρή CPE σε πρωτογενή κύτταρα νεφρών Cercopithecus.
Σε πρωτογενή νεφρικά κύτταρα πιθήκων Rhesus, ο "ιός" πολλαπλασιάστηκε αλλά χωρίς CPE (Hofmann and Kunz, 1968)
Πρωτογενή κύτταρα ανθρώπινης προέλευσης πολλαπλασίασαν επίσης τον "ιό", ωστόσο οι May και Knothe (1968) δεν μπόρεσαν να παρατηρήσουν CPE σε ανθρώπινα λευκοκύτταρα, αλλά ανέφεραν ελαφρά CPE σε πρωτογενή ανθρώπινα αμνιακά κύτταρα (May et aI., 1968).
Οι Hofmann και Kunz μπόρεσαν να καταδείξουν πολλαπλασιασμό του "ιού" σε πρωτογενείς ινοβλάστες εμβρύου ινών ινδικού χοιριδίου, αλλά δεν παρατηρήθηκε CPE.
Σε κύτταρα εμβρύου νεοσσού, οι Hofmann και Kunz διαπίστωσαν έναν πολύ ελαφρύ πολλαπλασιασμό του "ιού", ενώ άλλοι ερευνητές δεν παρατήρησαν καθόλου πολλαπλασιασμό (Smith et aI., 1967- May και Knothe, 1968).
Αν και οι Hofmann και Kunz διαπίστωσαν ότι τα μόνιμα κύτταρα νεφρών Cercopithecus (στέλεχος GMK-AHl) παρήγαγαν υψηλούς τίτλους "ιού", δεν μπόρεσαν να αποδείξουν CPE
Οι Kissling et aI. (1968) ήταν πιο επιτυχείς- παρατήρησαν CPE στις καλλιέργειές τους τη δεύτερη ημέρα p.i., η οποία ήταν συνολικά περίπου η 4η-5η ημέρα.
Στην κυτταρική σειρά VERO, ο "ιός" πολλαπλασιάστηκε επίσης, ενώ δεν παρατηρήθηκε CPE από τους Siegert et aI. (1968) και μόνο ελαφρά CPE από τους Kissling et aI. (1968).
Από κύτταρα προέλευσης πιθήκων Rhesus, τα καρδιακά κύτταρα (στέλεχος CMH) επέτρεψαν μόνο ελαφρά ανάπτυξη του "ιού" (Hofmann and Kunz, 1968), ενώ σε νεφρικά κύτταρα (στέλεχος LLC-MK2) δεν αποδείχθηκε κανένας πολλαπλασιασμός του "ιού" (Smith et aI., 1967)
Στις µελέτες των Smith et aI. (1967) ο "ιός" του Marburg πολλαπλασιάστηκε σε κύτταρα L (κύτταρα εµβρύου ποντικού) χωρίς CPE, ωστόσο οι Hofmann και Kunz δεν µπόρεσαν να αποδείξουν ανάπτυξη "ιού" στα κύτταρα αυτά.
Τα καρδιακά κύτταρα που προέρχονται από ινδικά χοιρίδια επέτρεψαν επίσης τον πολλαπλασιασμό του "ιού" χωρίς CPE (Kissling et aI., 1968).
Οι πρώτες αναφορές της CPE που προκαλείται από τον "ιό" του Marburg (ενδιαφέρουσα φράση εδώ, καθώς η CPE υποτίθεται ότι προκαλείται μόνο από τον "ιό") σε κυτταροκαλλιέργειες έγιναν από τους Zlotnik et aI. (1968), οι οποίοι διαπίστωσαν ότι ο "ιός" ήταν προσαρμόσιμος στα κύτταρα BHK21.
Στο πρώτο πέρασμα παρατηρήθηκαν στα μολυσμένα κύτταρα μετά από 13 ημέρες τυπικά σωμάτια εγκλεισμού παρόμοια με εκείνα που βρέθηκαν στο ήπαρ ινδικού χοιριδίου και η CPE εμφανίστηκε περίπου την 23η ημέρα
Μετά από μερικά περάσματα, τα σωμάτια εγκλεισμού καθώς και η CPE εμφανίζονταν νωρίτερα (γεγονός που δείχνει ότι το πέρασμα προκάλεσε την αλλοίωση των κυττάρων και τη δημιουργία της CPE, όχι ο "ιός").
Σε αντίθεση µε 3 άλλες οµάδες ερευνητών (Siegert et aI., 1968- Smitg et aI., 1967- May and Knothe, 1968), οι Hofmann και Kunz ισχυρίστηκαν ότι µπορούσαν να πολλαπλασιάσουν τον "ιό" του Marburg αρκετά καλά σε στέλεχος HeLa, ωστόσο δεν παρατηρήθηκε CPE.
Άλλα στελέχη που προέρχονταν από ανθρώπινες πηγές εξετάστηκαν επίσης για CPE που προκαλείται από τον "ιό" του Marburg, καθώς οι Kissling et aI. (1968) πολλαπλασίασαν τον "ιό" σε ινοβλάστες της ακροποσθίας.
Στο πρώτο πέρασμα του "ιού" η CPE ήταν αποδεδειγμένη, αλλά δεν μπορούσε να αναπαραχθεί σε σειριακά περάσματα.
Σε κύτταρα U, μια σταθερή κυτταρική σειρά ανθρώπινου αμνίου, ο παράγοντας πολλαπλασιάστηκε επίσης αλλά χωρίς CPE (Hofmann and Kunz, αδημοσίευτο)
Οι Hofmann και Kunz είχαν προηγουμένως δοκιμάσει πολλά κυτταρικά συστήματα, αλλά δεν μπόρεσαν να εντοπίσουν μια κυτταρική σειρά στην οποία ο "ιός" του Marburg πολλαπλασιάζεται με CPE, μέχρι που έπεσαν πάνω στο κυτταρικό στέλεχος ELF (εμβρυϊκοί ινοβλάστες του ανθρώπινου πνεύμονα), στο οποίο η CPE εμφανίζεται περίπου την 3η ημέρα και φθάνει στο μέγιστο περίπου την 5η ημέρα μετά τη μόλυνση
Ωστόσο, παραδέχθηκαν ότι αν και οι αλλαγές ήταν σοβαρές, δεν ήταν ποτέ ολοκληρωμένες και τελικά τα υγιή κύτταρα μπορεί να αναπτυχθούν και να επιδιορθώσουν τις βλάβες
Συνοψίζοντας τα ενίοτε αντικρουόμενα αποτελέσματα που προέκυψαν από τους διάφορους ερευνητές, αναφέρθηκε ότι τα κύτταρα που προέρχονται από θηλαστικά, όπως πιθήκους, ινδικά χοιρίδια και χάμστερ, καθώς και τα ανθρώπινα κύτταρα ήταν ευαίσθητα στον "ιό", καθώς συχνά παρήχθησαν υψηλοί τίτλοι από τα κύτταρα, αν και κατά κανόνα δεν παρατηρήθηκαν ακαθάριστες κυτταροπαθητικές αλλαγές (CPE)
Ζούμε σήμερα σε μια εποχή όπου νέοι "ιοί" και παλιοί κλασικοί φαίνεται να ξεσπούν σε διάφορα μέρη του κόσμου. Κάθε ένα από αυτά τα ξεσπάσματα παρουσιάζεται από τα μέσα ενημέρωσης ως πιθανή επιδημία/πανδημία που περιμένει να συμβεί, αν όχι τώρα, τότε σίγουρα στο εγγύς μέλλον. Μας προετοιμάζουν συνεχώς για αυτό το ενδεχόμενο. Αυτό που είναι ενδιαφέρον είναι ότι οι περισσότερες από αυτές τις ασθένειες μοιράζονται τα ίδια μη ειδικά συμπτώματα που περιλαμβάνουν μια ασθένεια που μοιάζει με γρίπη και κάποια μορφή εξανθήματος. Οι ασθένειες φαίνεται να παρουσιάζονται σε ασθενείς με άτυπους τρόπους σε μη ενδημικές χώρες, όπου οι ασθενείς δεν έχουν ιστορικό ταξιδιών σε γνωστές εστίες ούτε επαφή με ζώα που θεωρούνται φορείς. Καθώς η κλινική διάγνωση είναι αδύνατη λόγω των επικαλυπτόμενων συμπτωμάτων, χρησιμοποιούνται δόλιες δοκιμασίες PCR για τη δημιουργία κρουσμάτων.
Ο "ιός" Μάρμπουργκ είναι ο τελευταίος σε αυτό το "ιικό" καρουζέλ που κάνει την εμφάνισή του. Ακούγοντας τα MSM, αυτός ο "εξαιρετικά μεταδοτικός ιός" έχει τη δυνατότητα να εκραγεί στον κόσμο αν δεν προληφθεί άμεσα, παρόλο που δεν υπάρχουν γνωστές θεραπείες ούτε εμβόλιο που λέγεται ότι είναι επιτυχημένο εναντίον του. Το πρόσφατο "ξέσπασμα" στην Γκάνα μόλυνε τέσσερις ανθρώπους, ενώ το προηγούμενο "ξέσπασμα" στη Γουινέα το 2021 μόλυνε μόλις έναν. Μέχρι σήμερα, έχουν σημειωθεί συνολικά 475 κρούσματα του "ιού" Μάρμπουργκ παγκοσμίως από την "ανακάλυψή" του το 1967. Είναι όντως αυτός ο "εξαιρετικά μεταδοτικός, μολυσματικός και θανατηφόρος ιός" που μας έχουν πλασάρει;
Η εξέταση της ιστορίας του "ιού" δίνει μια τελείως διαφορετική εικόνα από αυτή που μας πλασάρουν τα MSM. Όχι μόνο το αρχικό ξέσπασμα μεταξύ των ερευνητών του εμβολίου της πολιομυελίτιδας δεν θεωρήθηκε εξαρχής ανησυχητικό, αλλά οι ασθενείς έλαβαν θεραπεία στο σπίτι για έως και 10 ημέρες. Όσοι τελικά εισήχθησαν στο νοσοκομείο ήταν αυτοί που τελικά υπέκυψαν μόλις μία ημέρα μετά την εισαγωγή. Ένας ασθενής, ο οποίος θεωρήθηκε βαριά άρρωστος, δεν ζήτησε ποτέ νοσοκομειακή περίθαλψη και ανάρρωσε πλήρως. Χωρίς να γνωρίζουμε τις ακριβείς θεραπείες που χορηγήθηκαν στους ασθενείς πριν και αμέσως μετά την εισαγωγή στο νοσοκομείο, πρέπει να αναρωτηθούμε αν οι θεραπείες προκάλεσαν τη σοβαρότητα των συμπτωμάτων που παρατηρήθηκαν σε όσους τελικά υπέκυψαν στη νόσο.
Η διαδικασία ανακάλυψης του νέου "ιού" δημιουργεί μια ακόμη πιο πειστική υπόθεση ότι δεν ανιχνεύθηκε ποτέ κάποιο νέο παθογόνο. Πρώτα απ' όλα, κανένας "ιός" δεν καθαρίστηκε ούτε απομονώθηκε ποτέ απευθείας από τα υγρά ενός άρρωστου ανθρώπου ή πιθήκου. Τα μόνα στοιχεία που χρησιμοποιούνται για να υποστηριχθεί η ύπαρξη του "ιού" του Μάρμπουργκ προέρχονται εξ ολοκλήρου από πειράματα με ινδικά χοιρίδια, όπου μη καθαρισμένα γλίτσα και ιστοί εγχύθηκαν και πέρασαν κατά σειρά στα ζώα. Αφού αρρώστησαν πειραματικά τα ζώα, διενεργήθηκαν μη ειδικές εξετάσεις αντισωμάτων προκειμένου να βρεθούν εγκλείσματα τύπου Negri (που λέγεται ότι είναι ειδικά για τη λύσσα, αλλά έχει αποδειχθεί επανειλημμένα ότι δεν είναι) στα σπλήνα και το συκώτι των χοίρων της Γουινέας, και στη συνέχεια δείγματα αίματος στάλθηκαν για απεικόνιση με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο προκειμένου να βρεθεί ο "ιός". Το κυνήγι των σωματιδίων του "ιού" ήταν μακρύ και ο αρχικός έμπειρος ερευνητής δεν μπόρεσε να βρει τίποτα μετά από μιάμιση ημέρα αναζήτησης. Μόλις έφυγε για μεσημεριανό γεύμα, ο λιγότερο έμπειρος βοηθός του εργαστηρίου κατάφερε να βρει τον "ιό" μετά από λιγότερο από μία ώρα αναζήτησης. Τα νηματοειδή σωματίδια επιλέχθηκαν ως αντιπροσωπευτικά του "ιού" του Μάρμπουργκ λόγω της μοναδικότητας και του μήκους τους. Ωστόσο, όπως παραδέχτηκε ο επικεφαλής ερευνητής Rudolf Siegert, τα σωματίδια ήταν μορφολογικά παρόμοια με πολλούς "ιούς", συμπεριλαμβανομένου του "ιού" της λύσσας που σχετίζεται με τα προαναφερθέντα σώματα Negri. Μπορούμε επίσης να βρούμε αυτές τις μορφές που μοιάζουν με νήματα και σχετίζονται με άλλους "ιούς", όπως η παρωτίτιδα, η ιλαρά, η παραϊνφλουένζα και πολλοί άλλοι.
Σύμφωνα με τον Werner Slenczka, έναν άνθρωπο που ασχολήθηκε στενά με τη δημιουργία αυτών των ΗΜ εικόνων, τα δείγματα ήταν μολυσμένα από πολλούς μικροβιακούς παράγοντες, ακόμη και από "παραμυξοϊούς" που δυσκόλεψαν την ερμηνεία. Δήλωσε ότι η αναζήτηση των "ιικών" σωματιδίων ήταν κουραστική και συχνά απογοητευτική. Αυτό επιβεβαιώνει ότι οι εικόνες που χρησιμοποιήθηκαν ως απόδειξη για την ύπαρξη του "ιού" του Marburg προήλθαν από μη καθαρισμένα μολυσμένα δείγματα και συνεπώς δεν υπάρχει κανένας τρόπος να μπορέσουμε να δηλώσουμε ότι τα σωματίδια που σχετίζονται με τα κρούσματα Marburg είναι στην πραγματικότητα καθόλου "ιός". Ο Slenczka παραδέχτηκε επίσης ότι οι πίθηκοι που θεωρήθηκαν ως πηγή του "ιού" δεν ήταν ποτέ άρρωστοι σε κανένα σημείο και χρησιμοποιήθηκαν σε άλλα εργαστήρια τα οποία δεν παρουσίασαν ποτέ κανένα απολύτως κρούσμα.
Ακόμη πιο ενδιαφέρον είναι ότι οι προσπάθειες "απομόνωσης" ενός "ιού" παραδέχθηκαν ότι απέτυχαν. Οι πρώιμες προσπάθειες για τον πολλαπλασιασμό του "ιού" σε κυτταρικές καλλιέργειες κατέληγαν επανειλημμένα στην έλλειψη ενδείξεων για την ύπαρξη οποιουδήποτε "ιού". Ωστόσο, αυτό δεν εμπόδισε τους ερευνητές να δοκιμάσουν πολυάριθμες κυτταρικές σειρές για καλλιέργεια μέχρι να πάρουν τα αποτελέσματα που ήθελαν να δουν. Μετά από αλλεπάλληλες δοκιμές και λάθη που είχαν ως αποτέλεσμα συγκεχυμένα, αντικρουόμενα και αντιφατικά αποτελέσματα, αποφασίστηκε ότι, ενώ ο "ιός" του Μάρμπουργκ μπορούσε να πολλαπλασιαστεί σε κυτταροκαλλιέργειες, το έκανε χωρίς να παράγει το κυτταροπαθογόνο αποτέλεσμα (CPE), το ίδιο το κριτήριο που χρησιμοποιούν οι ιολόγοι για να "δουν" έμμεσα ότι ο "ιός" έχει καταλάβει το κύτταρο προκειμένου να πολλαπλασιαστεί.
Αυτό που μας έχει απομείνει όσον αφορά τον "ιό" του Μάρμπουργκ είναι μη ειδικά συμπτώματα της νόσου που σχετίζονται με μη ειδικά εγκλείσματα τύπου Negri σε ιστούς και σωματίδια που ισχυρίζονται ότι είναι μοναδικές " ιϊκές" δομές που στην πραγματικότητα μοιάζουν μορφολογικά με πολλά άλλα " ιϊκά" σωματίδια. Έχουμε επίσης έναν "ιό" που λέγεται ότι πολλαπλασιάζεται σε κυτταρική καλλιέργεια, ενώ δεν παράγει το ίδιο το αποτέλεσμα που αναζητείται για να διαπιστωθεί η παρουσία ενός "ιού" στο δείγμα. Με άλλα λόγια, ο "ιός" του Μάρμπουργκ είναι ένας ακόμη από μια μακρά σειρά ονομάτων που δόθηκαν στα ίδια συμπτώματα της νόσου που αντιπροσωπεύονται από τα ίδια τυχαία σωματίδια. Είναι απλώς άλλη μια απατηλή θεατρική παραγωγή που προωθείται από την ψευδοεπιστήμη που είναι γνωστή ως ιολογία.
Αν σας άρεσε αυτό το άρθρο και θα θέλατε να βοηθήσετε να στηρίξετε το συνεχές έργο μου, ο παρακάτω σύνδεσμος είναι μια επιλογή.
Παρακαλώ βοηθήστε να στηρίξετε το έργο μου. 🙏
***Δικτυογραφία:
The Marburg “Virus:” Precursor to Ebola – ViroLIEgy
https://viroliegy.com/2022/08/29/the-marburg-virus-precursor-to-ebola/