Κυτταροπαθητικές Επιδράσεις Σε Μη- Εμβολιασμένες Καλλιέργειες
Πειράματα ελέγχου που Ακυρώνουν τη μεθοδολογία της ιολογίας
Μετάφραση: Απολλόδωρος
21 Ιουνίου 2024 | ALDHISSLA | Διαβάστε το εδώ
Η Έλλειψη Ελέγχων στην Ιολογία είναι ένα εξαιρετικό άρθρο σχετικά με την παρουσία κυτταροπαθητικών επιδράσεων σε μη εμβολιασμένες καλλιέργειες.
Ο Mike Stone περιγράφει πώς η μέθοδος των κυτταροκαλλιεργειών που χρησιμοποιείται στην ιολογία καταρρίφθηκε το 1954, όταν ο John Enders παρατήρησε κυτταροπαθητικά φαινόμενα σε μη-εμβολιασμένες καλλιέργειες.
Αυτό επιβεβαιώθηκε από διάφορους άλλους ερευνητές τα επόμενα χρόνια.
Κάποιοι μπορεί να υπερασπιστούν τον John Enders υποστηρίζοντας ότι μπορούσε να διακρίνει τα κυτταροπαθητικά αποτελέσματα στις καλλιέργειες, επειδή «εσωτερικές πυρηνικές αλλαγές τυπικές για τους παράγοντες της ιλαράς» δεν παρατηρήθηκαν στη μη εμβολιασμένη καλλιέργεια.
Ωστόσο, τέτοιες ενδοπυρηνικές αλλαγές συμβαίνουν και σε μη εμβολιασμένες καλλιέργειες. Προς έκπληξη των ιολόγων.
«Προς έκπληξή μας, ενδοπυρηνικά και ενδοκυτταροπλασματικά ηωσινόφιλα εγκλείσματα του ιού της ιλαράς εμφανίστηκαν τόσο σε εμβολιασμένες όσο και σε μη εμβολιασμένες καλλιέργειες ελέγχου HEK. Έτσι, το απόθεμα αδενοϊού που προερχόταν από τις καλλιέργειες HEK του εμπορίου μολύνθηκε κατά λάθος με ιό ιλαράς».
Χωρίς καμία απόδειξη, οι συγγραφείς ισχυρίζονται ότι η μη εμβολιασμένη καλλιέργεια πρέπει να είχε «μολυνθεί» με ιό ιλαράς.
Βολικό μέσο διάσωσης που αναδεικνύει την ψευδοεπιστήμη της ιολογίας.
Οι πίθηκοι δεν ήταν το μόνο είδος του οποίου οι νεφροί ήταν επιρρεπείς σε αυθόρμητη αποσύνθεση. Σε μια μελέτη του 1970, αναφέρθηκε ότι τα μη εμβολιασμένα νεφρά κατσίκας διαλύονταν συχνά.
«Διαπιστώσαμε ότι τα κύτταρα των κατσικίσιων νεφρών ήταν επίσης πολύ ευαίσθητα στον ιό της ιλαράς, αλλά οι μη εμβολιασμένες καλλιέργειες εμφάνιζαν επίσης συχνά κυτταροπαθητικές επιδράσεις».
Τα νεφρά των χιμπατζήδων υπέστησαν την ίδια μοίρα σε μια μελέτη του 1963 με τίτλο: Chimpanzee Kidney Tissue for Growth and Isolation of Viruses (Νεφρικός ιστός χιμπατζή για ανάπτυξη και απομόνωση ιών).
«Κατά τη διάρκεια παρατεταμένης επώασης (2 εβδομάδες ή περισσότερο) μη εμβολιασμένων καλλιεργειών ιστού νεφρών χιμπατζήδων, τα κύτταρα εμφάνιζαν συχνά αλλαγές παρόμοιες με τις αλλαγές που προκαλούνται από την ανάπτυξη ιών».
Οι συγγραφείς υποπτεύθηκαν «τυχαίους ιούς» και όχι την ίδια την πειραματική διαδικασία.
«Η παρουσία τυχαίων ιών σε ορισμένες μη εμβολιασμένες καλλιέργειες ιστού νεφρού χιμπατζή είναι ύποπτη».
Η ιδέα αυτή είναι αβάσιμη, ιδίως εφόσον έχει αποδειχθεί ότι αθώες ουσίες μπορούν να προκαλέσουν κυτταροπαθητικές επιδράσεις.
Σε μια μελέτη που δημοσιεύθηκε το 1962 διαπιστώθηκε ότι το εκχύλισμα ζύμης αυξάνει τις κυτταροπαθητικές επιδράσεις και προκαλεί εκφυλιστικές αλλαγές τόσο σε μη εμβολιασμένες όσο και σε εμβολιασμένες καλλιέργειες.
«Πειράματα με εκχύλισμα ζύμης. Οι Wittler, Cary και Lindberg (1956) ανέφεραν ότι το εκχύλισμα ζύμης επιταχύνει την ανάπτυξη του PPLO σε καλλιέργειες ιστών και αυξάνει την κυτταροπαθητική επίδραση. Όταν το εκχύλισμα ζύμης (Difco) σε συγκέντρωση 0,5% υπήρχε στις καλλιέργειές μας τη στιγμή του εμβολιασμού, τόσο οι καλλιέργειες ελέγχου όσο και οι εμβολιασμένες καλλιέργειες παρουσίασαν εκφυλιστικές αλλαγές μέσα σε 1 εβδομάδα, πιθανώς λόγω της τοξικότητας του εκχυλίσματος για τα κύτταρα».
Υγρά από άτομα με «μη μολυσματικές» ασθένειες έχουν επίσης αποδειχθεί ότι προκαλούν κυτταροπαθητικές επιδράσεις.
«Διαπιστώσαμε ότι τα CSF από ασθενείς με ορισμένα ψυχιατρικά σύνδρομα, συμπεριλαμβανομένης της σχιζοφρένειας, παράγουν κυτταροπαθητικό αποτέλεσμα/επίδραση (CPE) όταν εμβολιάζονται σε σταθερές καλλιέργειες ιστών ... Αυτό το CPE μοιάζει με αυτό που παράγεται από ορισμένους ιούς, αλλά κανένας κυτταροπαθητικός παράγοντας δεν έχει ακόμη καθιερωθεί σε καλλιέργειες ιστών»
Μια μελέτη που δημοσιεύθηκε το 1984 προσπάθησε να αναζητήσει μια ιογενή αιτιολογία της φλεγμονώδους νόσου του εντέρου. Χρησιμοποιήθηκαν κυτταροκαλλιέργειες, αλλά οι συγγραφείς κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι οι κυτταροπαθητικές επιδράσεις που παρατηρήθηκαν πιθανώς προκαλούνταν από μη αναπαραγόμενο κυτταροτοξικό παράγοντα.
«Τα διηθήματα εντερικού ιστού προκαλούν κυτταροπαθητικές επιδράσεις σε εμβολιασμένες κυτταροκαλλιέργειες, αλλά η επίδραση που παρατηρήσαμε είναι μη ειδική ... Τα αποτελέσματά μας υποδηλώνουν ότι η παρατηρούμενη κυτταροπαθητική επίδραση προκλήθηκε από έναν μη πολλαπλασιαζόμενο κυτταροτοξικό παράγοντα».
Μια δημοσίευση του 1970 κατέδειξε μια σαφή ένδειξη ότι η ίδια η πειραματική διαδικασία δημιουργούσε τα κυτταροπαθητικά αποτελέσματα.
Νεφρικά κύτταρα από υγιή κουτάβια καλλιεργήθηκαν χωρίς την προσθήκη ενός υποτιθέμενου «μολυσμένου» δείγματος. Ωστόσο, παρατηρήθηκαν κυτταροπαθητικές επιδράσεις.
«Τα κουτάβια που χρησίμευσαν ως δότες νεφρικών ιστών για τις κυτταροκαλλιέργειες προέρχονταν από μια κλειστή αποικία φαινομενικά υγιών σκύλων beagle. Τα πρωτογενή κύτταρα των νεφρών του σκύλου τοποθετήθηκαν σε μέσο συντήρησης αποτελούμενο από ελάχιστο απαραίτητο μέσο Eagle και 2% εμβρυϊκό ορό μοσχαριού την επομένη της παραλαβής των μονοστρωματικών καλλιεργειών. Εστίες CPE αποτελούμενες από στρογγυλεμένα κύτταρα και πλάκες (Εικ. IA) εμφανίστηκαν 14 ημέρες μετά την έναρξη των καλλιεργειών. Η CPE προχώρησε και αφορούσε το 50 έως 75% του κυτταρικού φύλλου μέχρι το τέλος της τρίτης εβδομάδας καλλιέργειας».
Όταν οι ιολόγοι μη εμβολιασμένων καλλιεργειών ελέγχου παρουσιάζουν κυτταροπαθητικά φαινόμενα, συχνά κατηγορούν την «ιογενή» επιμόλυνση και όχι την ίδια την πειραματική διαδικασία. Αυτό φαίνεται σε μια μελέτη του 1970, όπου κατηγορήθηκε ένας «τυχαίος ιός» όταν οι μη εμβολιασμένες καλλιέργειες εμφάνισαν CPE.
«Κατά την προσπάθεια απομόνωσης ρινοϊών των βοοειδών σε καλλιέργειες κυττάρων BEK, παρατηρήθηκε ότι περιστασιακά οι έλεγχοι εκφυλίζονταν αυθόρμητα. Οι καλλιέργειες BEK επωάστηκαν σε κυλινδρικά τύμπανα στους 33 C για την απομόνωση των ρινοϊών των βοοειδών. Το μέσο συντήρησης περιείχε βασικό μέσο Eagle με άλατα Earle, 2% φυσιολογικό ορό κουνελιού και τις συνήθεις συγκεντρώσεις αντιβιοτικών. Κατά την πρωτογενή απομόνωση, περιστασιακές μη εμβολιασμένες καλλιέργειες ελέγχου εμφάνισαν εστιακή κυτταροπαθητική επίδραση (CPE) μετά από 12 έως 14 ημέρες επώασης».
Η ιδέα της «ενδογενούς ιογενούς μόλυνσης» ανάγεται στο 1955, όταν οι Rustigian et al. παρατήρησαν κυτταροπαθητικές επιδράσεις σε μη εμβολιασμένες καλλιέργειες. Έκτοτε, οι ιολόγοι ισχυρίζονται ότι ανακαλύπτουν πολλούς ιούς όταν οι μη εμβολιασμένες καλλιέργειές τους παρουσιάζουν κυτταροπαθητικά αποτελέσματα.
«Τα τελευταία χρόνια, έχει αυξηθεί ο αριθμός των αναφορών σχετικά με την αναγνώριση λανθάνουσας ιογενούς λοίμωξης σε ιστούς πρωτευόντων αλλά και μη πρωτευόντων ... Ως αποτέλεσμα της εκτεταμένης χρήσης κυτταροκαλλιεργειών πρωτευόντων, ένας μεγάλος αριθμός ιών πιθήκων έχει ανακτηθεί από μια ποικιλία πιθήκων, μπαμπουίνων και μαρμοζετών.
[...]
«Η απομόνωση ιο-ειδών παραγόντων από καλλιέργειες ιστών νεφρών πιθήκων αναφέρθηκε για πρώτη φορά από τους Rustigian et al. το 1955 (89). Στη συνέχεια, ως αποτέλεσμα της εκτεταμένης χρήσης καλλιεργειών νεφρικών κυττάρων πιθήκων, ιδίως στην παρασκευή εμβολίων κατά των ιών, ένας μεγάλος αριθμός ιών πιθήκων έχει ανακτηθεί ως ενδογενής προσμίξεις ιστών από τον Hull και τους συνεργάτες του (56- 58)».
[...]
«Με βάση ορισμένες βιολογικές ιδιότητες, ιδίως την κυτταροπαθητική δράση (CPE), οι ιοί των πιθήκων χωρίστηκαν αρχικά σε τέσσερις ομάδες από τους Hull και συνεργάτες (57). Άλλες βιολογικές ιδιότητες, συμπεριλαμβανομένης της μορφολογίας της πλάκας, της ευαισθησίας των κυττάρων-ξενιστών και της παραγωγής αιμοσυγκολλητίνης, έχουν επίσης χρησιμοποιηθεί για την ομαδοποίηση αυτών των ιών».
[...]
«Η αναγνώριση και ο χαρακτηρισμός των ιών των πιθήκων σε κυτταροκαλλιέργειες έχουν πρακτική σημασία, δεδομένου ότι οι ιστοί των πιθήκων συχνά φιλοξενούν ποικιλία ιών».
Αυτή η βολική μέθοδος διάσωσης της ενδογενούς ιϊκής παρουσίας χρησιμοποιήθηκε συχνά από τους ιολόγους προκειμένου να δικαιολογήσουν τις ψευδοεπιστημονικές μεθοδολογίες τους. Στο βιβλίο του Contamination in Tissue Culture, ο Jørgen Fogh περιγράφει τη διαδεδομένη χρήση αυτής της συσκευής διάσωσης.
« Πάρα πολλά ζωικά είδη έχουν κρυφές ιώσεις, δηλαδή ιούς που φαίνεται να υπάρχουν σε στενή σχέση με συγκεκριμένους ιστούς ή όργανα του συγκεκριμένου είδους, χωρίς να προκαλούν εμφανή συμπτώματα. Προκύπτει ότι οι πρωτογενείς καλλιέργειες που παρασκευάζονται από σχεδόν οποιονδήποτε ιστό μπορεί να βρεθούν μολυσμένες με ιούς in vitro απλώς και μόνο επειδή το όργανο από το οποίο παρασκευάστηκαν είχε μολυνθεί in vivo (Hsiung, 1968). Με τον τρόπο αυτό, πρωτογενείς καλλιέργειες από κοτόπουλα (Burke et al., 1965), χιμπατζήδες (Rogers et al., 1967), σκύλους (Smith et al., 1970), πάπιες (Luginbuhl, 1968), ινδικά χοιρίδια (Hsiung and Kaplow, 1969), χάμστερ (Stenback et al., 1966), τα άλογα (Hsiung et al., 1969), ο άνθρωπος (Hsiung, 1968), τα κουνέλια (Nesburn, 1969), οι αρουραίοι (Melendez et al., 1967), οι πίθηκοι (Hsiung, 1968) και οι χοίροι (Huygelen and Peetermans, 1967) έχουν βρεθεί να παράγουν ιούς αυθόρμητα».
Όταν οι ιολόγοι δεν βλέπουν τα αποτελέσματα που επιθυμούν, συχνά παίζουν και προσθέτουν αντιδραστήρια μέχρι να τα δουν. Στην περίπτωση του ιού της πολιομυελίτιδας σε κύτταρα Vero, οι επιστήμονες δεν ήταν σε θέση να δουν το CPE που ήθελαν μέχρι να προσθέσουν τρυψίνη. Φυσικά, το αποδίδουν στον «ιό».
«Όταν οι νεφροί πιθήκων μολύνονται in vivo με τον ιό της πολιομυελίτιδας, δεν παρατηρείται κυτταροπαθητικό αποτέλεσμα και δεν μπορεί να ανακτηθεί ο ιός μετά την επακόλουθη αιμάτωση του νεφρού ή την ομογενοποίηση του ιστού του. Ωστόσο, εάν τμήματα ενός μολυσμένου νεφρού που βρέθηκαν αρνητικά για τον ιό με τέτοιες δοκιμές αναχθούν σε κυτταρικά εναιωρήματα με επεξεργασία με θρυψίνη και χρησιμοποιηθούν για τη δημιουργία συμβατικών καλλιεργειών μονοστρωματικής μορφής, πραγματοποιείται τελικά καταστροφή των κυττάρων, συνοδευόμενη από την εμφάνιση πλήρως μολυσματικού ιού. Όταν τα νεφρικά κύτταρα απομακρύνονται από την in vivo κατάστασή τους σε ένα ξένο περιβάλλον, αποκτούν κατά κάποιον τρόπο ευαισθησία στον ιό της πολιομυελίτιδας».
Η παρουσία ενός ιϊκού παράγοντα σε κυτταροκαλλιέργειες ανιχνευόταν μέσω της παρατήρησης κυτταροπαθητικών επιδράσεων ή, στην περίπτωση ορισμένων ιών, μέσω της ανίχνευσης αιμαδοαπορρόφησης (η προσκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων στην επιφάνεια κάποιου πράγματος). Ωστόσο, η αιμαδορρόφηση εμφανίζεται και σε μη εμβολιασμένες καλλιέργειες, όπως περιγράφεται από μια δημοσίευση του 1961.
«Η παρουσία ενός ιϊκού παράγοντα σε εμβολιασμένες κυτταροκαλλιέργειες μπορεί να ανιχνευθεί είτε με την παρατήρηση του κυτταροπαθητικού αποτελέσματος, δηλαδή του κυτταρικού εκφυλισμού, στις εμβολιασμένες καλλιέργειες είτε, στην περίπτωση ορισμένων μυξοϊών που δεν προκαλούν σαφή κυτταρικό εκφυλισμό, με την προσθήκη ερυθρών αιμοσφαιρίων στο κυτταρικό φύλλο και την παρατήρηση της αιμαδορόφησης. Είναι απαραίτητο να γίνεται διάκριση μεταξύ της κυτταρικής καταστροφής που οφείλεται σε ειδική ιϊκή επίδραση και αυτής που οφείλεται στην τοξικότητα του εμβολίου ... Κατά τη χρησιμοποίηση της αιμοαπορρόφησης ως δείκτη της παρουσίας ιογενών παραγόντων, πρέπει να λαμβάνεται υπόψη ότι ορισμένοι ιοί πιθήκων εμφανίζονται ως φυσικοί μολυντές των καλλιεργειών νεφρικών κυττάρων πιθήκων και ότι αυτοί μπορεί να προκαλέσουν αιμοαπορρόφηση».
Η ταυτοποίηση του συγκεκριμένου «ιϊκού παράγοντα» έγινε με τη χρήση δοκιμών εξουδετέρωσης. Το προϊόν διάσπασης των κυτταρικών καλλιεργειών αναμιγνύονταν με διάφορα παρασκευάσματα πρωτεϊνών και στη συνέχεια προστίθεντο σε κυτταρικές καλλιέργειες και ανάλογα με τα αποτελέσματα που συνέβαινε να παρατηρούνται στις κυτταρικές καλλιέργειες, προσδιοριζόταν ο ιός.
«Η ταυτοποίηση των ιϊκών παραγόντων που ανακτώνται σε συστήματα καλλιέργειας ιστών επιτυγχάνεται συνήθως με τη δοκιμή εξουδετέρωσης (neutralization test). Για τη διαδικασία αυτή, μια τυπική ποσότητα του άγνωστου ιού, συνήθως 100 TCD50, αναμιγνύεται με γνωστούς ανοσοποιητικούς ορούς και μετά από κατάλληλη περίοδο επώασης τα μείγματα ορών-ιών εμβολιάζονται σε κυτταροκαλλιέργειες, προκειμένου να προσδιοριστεί ποιος, αν υπάρχει, από τους ανοσοποιητικούς ορούς είναι σε θέση να αποτρέψει την κυτταροπαθογένεια ή την αιμοαπορρόφηση. Μια τροποποίηση της δοκιµασίας εξουδετέρωσης που έχει αποδειχθεί ιδιαίτερα χρήσιµη για την ταυτοποίηση των ιικών παραγόντων είναι η δοκιµασία µεταβολικής αναστολής, κατά την οποία ο πολλαπλασιασµός ή µη πολλαπλασιασµός του ιού ανιχνεύεται χρωµατοµετρικά. Εάν ο ιός εξουδετερωθεί ειδικά από έναν ανοσοποιητικό ορό, ο κυτταρικός μεταβολισμός δεν διαταράσσεται και το μέσο μετατρέπεται από αλκαλικό σε όξινο, όπως υποδεικνύεται από τη μετατόπιση του χρώματος του δείκτη κόκκινης φαινόλης από κόκκινο σε κίτρινο. Για τη διαδικασία αυτή, τα κύτταρα, ο ιός και ο ορός προστίθενται όλα στη δοκιμή την ίδια ημέρα, εξαλείφοντας την ανάγκη για προκαταρκτική προετοιμασία καλλιεργειών μονοστρωματικών κυττάρων σε σωληνάρια.»
Ωστόσο, αυτή η μεθοδολογία έχει διαψευστεί λόγω μελετών ελέγχου. Σε μια δημοσίευση του 1968 με τίτλο: Latent virus infections in primate tissues with special reference to simian viruses (Λανθάνουσες λοιμώξεις από ιούς σε ιστούς πρωτευόντων με ειδική αναφορά στους ιούς των πιθήκων), οι G. D. Hsiung et al. δοκίμασαν τους υποκατάστατους δείκτες, δηλαδή τις δοκιμές CPE και εξουδετέρωσης, σε μη εμβολιασμένες φυσιολογικές καλλιέργειες κυττάρων.
Προς έκπληξή τους, παρατηρήθηκαν συχνά θετικά αποτελέσματα από τους υποκατάστατους δείκτες τους σε φυσιολογικά μη εμβολιασμένα κύτταρα.
«Προς μεγάλη μας έκπληξη, ένα ασυνήθιστα υψηλό ποσοστό καλλιεργειών που θεωρούνταν «φυσιολογικές» εμφάνισε μόλυνση από τον ιό».
Τα ίδια αποτελέσματα που αποδίδονται στους ιούς παρατηρούνται σε καλλιέργειες κυττάρων ακόμη και αν δεν προστεθεί υποτιθέμενο μολυσμένο υλικό.
Αν σας άρεσε αυτό το άρθρο και θα θέλατε να βοηθήσετε να στηρίξετε το συνεχές έργο μου, ο παρακάτω σύνδεσμος είναι μια επιλογή.
Παρακαλώ βοηθήστε να στηρίξετε το έργο μου. 🙏
---Δικτυογραφία :
Cytopathic Effects in Uninoculated Cultures
