Η Φυγοκέντρηση Δεν Απομονώνει"ιούς"
Μετάφραση: Απολλόδωρος
19 Ιανουαρίου 2023 | Dr. Saeed Qureshi, Ph.D. | Διαβάστε το εδώ
Η τεχνική της (βαθμιδωτής) υπερφυγοκέντρησης περιγράφεται συχνά στην ιατρική/βιολογική βιβλιογραφία σχετικά με τον διαχωρισμό, την απομόνωση και τον καθαρισμό ιών. Ωστόσο, η χρήση της παρεξηγείται και παρουσιάζεται εσφαλμένα για την απομόνωση ιών. Εν ολίγοις, η τεχνική είναι τεχνική διαχωρισμού αλλά ΔΕΝ μπορεί να απομονώσει ιούς, όπως εξηγείται παρακάτω.
Η φυγοκέντρηση είναι μια απλή τεχνική διαχωρισμού συστατικών σε ένα υγρό διάλυμα. Για παράδειγμα, αν ανακινήσει κανείς μερικά σωματίδια άμμου με νερό σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα και τον αφήσει στο τραπέζι, τα σωματίδια άμμου θα καθιζάνουν γρήγορα στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα. Ωστόσο, αν τα σωματίδια είναι μικρά και ελαφριά, μπορεί να μην καθιζάνουν γρήγορα στον πυθμένα του σωλήνα και συχνά παραμένουν αιωρούμενα στο νερό. Χρησιμοποιώντας μηχανήματα φυγοκέντρησης, οι δοκιμαστικοί σωλήνες περιστρέφονται για να τραβήξουν το υλικό προς τα κάτω με φυγόκεντρο δύναμη. Επομένως, πρόκειται για μια άλλη τεχνική διαχωρισμού, όπως το φιλτράρισμα του περιεχομένου (στερεό/υγρό) σε μια φιάλη ή ένα δοκιμαστικό σωλήνα.
Η τεχνική της υπερφυγοκέντρησης χρησιμοποιεί εξαιρετικά υψηλές ταχύτητες περιστροφής και βαρυτική δύναμη (g) σε χιλιάδες πολλαπλάσια. Μια τέτοια δύναμη έλκει τα εξαιρετικά μικρά σωματίδια, ακόμη και τα μακρομόρια, όπως πρωτεΐνες, DNA/RNA κ.λπ., προς τον πυθμένα των σωλήνων.
Μια παραλλαγή αυτής της τεχνικής, δηλ. η βαθμιδωτή υπερφυγοκέντρηση, διεξάγεται όπου η υδατική φάση αντικαθίσταται με τη στοίβαξη διαφορετικών συγκεντρώσεων διαλυμάτων ζάχαρης (σακχαρόζης) στους δοκιμαστικούς (φυγοκεντρικούς) σωλήνες. Η τοποθέτηση του δείγματος δοκιμής (π.χ. δείγμα επεξεργασμένου επιχρίσματος) στην κορυφή και στη συνέχεια η περιστροφή των σωλήνων έχει ως αποτέλεσμα την εξάπλωση των σωματιδίων σε όλους τους σωλήνες με βάση το μέγεθος και την πυκνότητα των σωματιδίων. Η ζώνη (θέση) στην οποία κατακάθονται οι συγκεκριμένοι τύποι σωματιδίων απομακρύνεται με σιφώνιο και χρησιμοποιείται για την ταυτοποίηση και τον χαρακτηρισμό.
Εννοιολογικά, η υπερφυγοκέντρηση είναι παρόμοια με το κοσκίνισμα σε στοίβες, κατά το οποίο σωματίδια διαφορετικών μεγεθών διαχωρίζονται και συλλέγονται σε ταψιά με διαφορετικά μεγέθη κόσκινων ή οπών. Το κρίσιμο πράγμα που πρέπει να θυμόμαστε είναι ότι πρόκειται για μια τεχνική διαχωρισμού, αλλά ΔΕΝ μπορεί να ταυτοποιήσει ή να χαρακτηρίσει τη φύση των σωματιδίων που διαχωρίζει.
Από την άποψη της απομόνωσης ιών, η ικανότητα διαχωρισμού ή διασποράς της βαθμωτής υπερφυγοκέντρησης ΔΕΝ απομονώνει τα σωματίδια του ιού, αλλά ενδεχομένως συλλέγει σε μια ζώνη που αντανακλά ένα συγκεκριμένο εύρος σωματιδίων μεγέθους και πυκνότητας. Επομένως, εξακολουθεί να παρέχει ένα μείγμα του αρχικού δείγματος, ίσως λιγότερο πυκνό και πιο ομοιογενές από το εφαρμοζόμενο δείγμα. Λόγω της ετερογένειας των βιολογικών σωματιδίων, αυτή η διαφορική φυγοκέντρηση πάσχει από επιμόλυνση και κακή ανάκτηση. Η μάζα, η πυκνότητα και το σχήμα των σωματιδίων υπαγορεύουν τη θέση της ζώνης (σωματιδίων).
Ωστόσο, η γνώση της ζώνης ή του τμήματος των σωληναρίων που περιέχει τον ιό απαιτεί βαθμονόμηση του βήματος φυγοκέντρησης πριν από τη χρήση του. Αυτό το βήμα βαθμονόμησης μπορεί να γίνει μόνο με τη χρήση του απομονωμένου και καθαρισμένου δείγματος ιού. Όμως, ένα τέτοιο δείγμα ιού ΔΕΝ είναι διαθέσιμο. Επομένως, ΔΕΝ μπορεί να προσδιοριστεί ποια ζώνη θα περιέχει τον υποτιθέμενο ιό.
Στην πραγματικότητα, η φυγοκέντρηση προς το παρόν διαιρεί το αρχικό δείγμα επιχρίσματος (gunk) σε μικρότερα τμήματα, ΧΩΡΙΣ να γνωρίζει αν υπάρχει ο ιός ή ποιο τμήμα (ζώνη) τον περιέχει. Έτσι, τίποτα ΔΕΝ απομονώνεται. Επομένως, η απομόνωση του ιού με τη χρήση υπερφυγοκέντρησης είναι ψευδής ισχυρισμός και δείχνει έλλειψη κατανόησης της επιστημονικής μεθόδου/τεχνικής.
Παρακαλούμε προμηθευτείτε σήμερα ένα αντίτυπο των Χρήσιμων Σημειώσεων για να μάθετε τη σχετική επιστήμη για τα φάρμακα.
----Δικτυογραφία :
Centrifugation Does Not Isolate
https://bioanalyticx.com/centrifugation-does-not-isolate/